血小板激活后富血小板血浆注射对美肤除皱的效果观察

王红玮，于文熙，于永峰，于海平，林思敏

（深圳博美医疗美容门诊部，广东 深圳，518013）

随着生活水平的提高，面部年轻化已受到广大爱美人士的最爱，素颜呈现的自然美，当初大家都在打肉毒素来去除额头皱纹、鱼尾纹，但是注射后，会出现短时间的表情不自然。如今富血小板血浆容已得到欧洲CE认证、ISO、SQS及其他地区的广泛医学临床验证，仅需一次治疗就可对整个皮肤结构进行全面修复和重新组合，全面提升肌肤状态，延缓衰老，加上其操作步骤相对简单，因此PRP 美容技术将逐步代替其他美容除皱技术作为新一代美容方式。

我院从2016年4月至2018年2月，治疗患者62例，采取血小板激活后，富血小板血浆注射对美肤除皱的效果很好，其中38例为面部年轻化，美肤除皱，效果满意。25例加在自体脂肪移植中，可以促进自体脂肪细胞的成活，也获得了满意的效果，总结如下：

1 资料与方法

1.1 临床资料

已经检测比较血小板激活前后自体血浆不同成分的含量：血小板衍生生长因子（PDGF-AB)、表皮生长因子（EGF)、类胰岛素生长因子（IGF)及胶原的产量等[1]。（图1）血小板激活自体血浆准备流程；（图2）血小板激活自体血浆成分的含量变化；（图3）前期血小板激活自体血浆注射前后皮肤变化个案

本组62例患者来自我院美容外科，均为女性，年龄35-56岁。其中38例为面部年轻化，美肤除皱。25例加在自体脂肪移植中，使脂肪细胞成活率大大增加[2]。

1.2 方法

1.2.1 术前准备 询问病史 行血常规、凝血四项、血糖、术前传染病五项等检查，与患者沟通与签字拍照。1.2.2说明本项目拟采取的方法、技术路线以及工艺流程：

（1）抽取静脉血5-10ml注入无菌真空抗凝管内(2管),轻轻倒转试管混合4－5次。如不马上处理,放置于4度冰箱, 不超过30小时。

（2）离心抗凝管内的血液7分钟，3000g。

（3）离心后血液分成以下4层[3]：顶层为PPP（少含血小板）;；2层为PRP（浓缩血小板）；3层为MNC；底层为RBC (如图)，有些样本不明显分层，则取上1/3层为PPP；中1/3层为PRP（浓缩血小板）；下1/3层为MNC。

（4）用无菌注射器把2层的PRP抽吸出来,各转到5ml小管内(2管)。

（5）把5ml小管放置于-20度冰箱内30分钟(或者干冰上5min)后,取出放在室温融化。加入血小板活化剂pre-mixed solution：用0.5ml /1ml无菌注射器抽吸出血小板活化剂；每0.1ml的血小板活化剂加入到1mlPRP；轻轻倒转试管混合3-4次,室温静置15分钟[4]。

（6）离心5ml小管200g,3分钟；无菌注射器抽吸出的较粘稠液体，此为活化血小板(A-PRP)，底部如有沉淀物，丢弃不用；如不马上应用;可-20度冻存活化血小板(A-PRP)备用。

图1 血小板激活自体血浆准备流程

图2 血小板激活自体血浆成分的含量变化

1.2.3 （A-PRP）注射方法 本组病例22人通过水光枪将A-PRP 皮下注射；16人通过1ml注射器31G针头将A-PRP皮下注射、25人将A-PRP加入提纯后的自体脂肪中并充分混匀[5]。

2 结 果

本组本组病例22人通过水光枪注射皮下3次注射后，19人效果满意，3人效果不太明显，16人通过1mm注射器31G针头注射，13人效果比较满意，3人治疗后出现红色丘疹，25人注入提纯好的自体脂肪中，治疗部分为额部、颞部、颊部，颏部。治疗两次后，自体脂肪成活率很高，面部的轮廓改善满意。提供的成果形式为活化前后的PRP生物成品，并进行临床实验。约20-30天后顾客的皱纹将逐渐消失，重拾弹性健康，皮肤平滑紧致的年轻状态[6]

2.1 典型病例

2.1.1 患者，女45岁，眼尾皱纹明显，按上法提取PRP注射，采用点状注射，每侧注射量为1ML,注射一个月后，效果满意，见图3。

图3 典型案例1，左侧为术前，右侧为术后一个月

2.1.2 患者，女，47岁，由于遗传及常期上夜班，休息不好的原因，上睑脂肪缺失比较明显，会显得人比较衰老。查体：上睑皮肤松驰、上睑脂肪缺失、颏部轻度后倾。手术过程，在右侧大腿外侧，选择肿胀液（0.9%生理盐水500ML、利多卡因5ML、盐酸肾上腺素0.5ML、碳酸氢钠6.5ML）局部麻醉,抽取脂肪及肿胀液一起10ML，经离心处理后，提取脂肪颗粒3ML，加入处理好的PRP2ML。进入充分混合后，沿眉骨下缘缓缓注射，一只手注射，一只手找平整度，术后即时效果满意，观察术后三个月效果，患者自觉满意，见图4。

3 讨 论

图4 左侧为手术前，中间为手术后即刻，右侧为术后一个月

本研究主要观察了血小板激活后富血小板血浆注射对美肤除皱的效果。富血小板血浆是通过密度梯度离心法从全血中分离出来的自体材料，含有大量血小板的无活性物质，但是，当活化因子活化血小板时，所述血小板会释放生长因子，促进伤口的愈合[7]。本研究主要技术手段为抽取静脉血注入无菌真空抗凝管内进行离心，并取第2层的富血小板血浆（platelet Rich plasma, PRP）作为研究对象。取一部分的PRP分别加入血小板活化剂，以探讨血小板活化前后对皱纹的影响。技术指标主要包括检测活化前后血浆内生长因子的活性和注射后患者的皮肤状况[8]。

富血小板血浆（PRP)是通过密度梯度离心法从全血中分离出来的自体材料（autologous material)特征，是相对于少量的血浆浓缩含有大量血小板的无活性物质，并且含有高浓度的白细胞。通过血管中含有的物质活化富血小板血浆（PRP)中的血小板，然后释放生长因子（growth factor)和各种活性物质（active substance)。当活化因子活化血小板时，所述血小板由于其α颗粒（alpha granules)的脱颗粒作用（degranulation)而释放生长因子（growth factor)[9]。所述因子在伤口愈合（wound healing)初期扮演着重要角色。在此，释放的生长因子（growth factor)包括血小板衍生生长因子（PDGF-AB)、转化生长因子-bl(TGF-bl)、血管内皮生长因子（VEGF)、表皮生长因子（EGF)、类胰岛素生长因子（IGF)等。而且，在体外条件下，富血小板血浆（PRP)释放细胞因子等，由此合成成纤维细胞的DNA[10]。这增加了胶原的产量，从而促使形成胶原结构。我们通过比较添加血小板激活剂后富血小板血浆注射对除皱的效果。还有，把PRP加入自体脂肪移植手术中，增加自体脂肪细胞的成活率，也收到了满意的效果。

重点解决的技术关键问题为PRP的提取和活化，提取活化过程将在标准无菌百级实验室进行，由生物技术专业人员采用专有技术对PRP的提取和活化操作。技术指标主要包括检测活化前后血浆内生长因子的活性和注射后患者的皮肤状况。

参 考 文 献

[1]袁霆, 张长青, 李四波,等. 自体富血小板血浆与难愈合伤口的修复[J]. 中华整形外科杂志, 2006, 22(5)：391-393.

[2]黎洪棉, 柳大烈, 吴涛,等. 早期应用富血小板血浆凝胶对自体脂肪组织移植存活率的影响[J]. 中国组织工程研究,2011, 15(31)：5751-5755.

[3]李秋涛. 自体高浓度血小板血浆(PRP)面颈部皮肤抗衰老临床观察[J]. 中华医学实践杂志, 2011.

[4]程飚, 刘宏伟, 唐建兵,等. 自体富血小板血浆促进美容外科伤口愈合的临床观察[J]. 中国输血杂志, 2011,24(4)：282-284.

[5]王悦, 朱喆, 成荣杰,等. 富血小板血浆对人真皮细胞增殖及PDGF、TGF-β和VEGF表达的影响[J]. 实用口腔医学杂志,2012, 28(1)：64-69.

[6]Man D, Plosker H, Winland-Brown J E. The use of autologous platelet-rich plasma (platelet gel)and autologous platelet-poor plasma (fibrin glue)in cosmetic surgery.[J]. Plastic & Reconstructive Surgery, 2001, 107(1)：239-0.

[7]Eppley B L, Woodell J E, Higgins J. Platelet quantification and growth factor analysis from platelet-rich plasma： implications for wound healing[J]. Plastic & Reconstructive Surgery, 2004,114(6)：1502-1508.

[8]Ehrenfest D, David M, Rasmusson, et al. Classification of platelet concentrates： from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin(L-PRF)[J]. Trends in Biotechnology, 2009, 27(3)：158-67.

[9]Eppley B L, Pietrzak W S, Blanton M. Platelet-rich plasma： a review of biology and applications in plastic surgery[J]. Plastic & Reconstructive Surgery,2006, 118(6)：147e.

[10]Kanno T, Takahashi T, Tsujisawa T, et al. Plateletrich plasma enhances human osteoblast-like cell proliferation and differentiation[J]. J Oral Maxillofac Surg, 2005, 63(3)：362-369.