C-met蛋白在食管癌组织中的表达及其与临床特征的关系

陈焱，宋小平，汤小虎，叶博

1北京新里程肿瘤医院有限公司外科，北京 100169

2清华大学第一附属医院胸外科，北京 100081

食管癌是消化系统高发肿瘤之一，全世界每年约有30万人死于本病。中国是食管癌高发区，年均死亡例数约10万，并且男性患者多于女性，年龄集中于40岁以下[1]。临床尚未明确食管癌发病机制，但已有研究证实，癌基因的活化、表达与本病密切相关[2]。肝细胞生长因子受体（C-met）蛋白是一种具有自主磷酸化活性的蛋白，是由一个α亚基和一个β亚基组成的异二聚体[3]。研究显示，正常细胞的C-met表达情况与肿瘤细胞的C-met表达情况存在显著差异，提示C-met可能参与了肿瘤的发生发展[4-5]。为探究C-met蛋白在食管癌组织中的表达及其与临床特征的关系，本研究选取80例食管癌组织标本及其癌旁组织标本进行了如下研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月至2017年3月北京新里程肿瘤医院手术后获取的80例食管癌组织标本及其癌旁组织标本。纳入标准：①经病理学诊断确诊为食管癌；②符合第7版食管癌TNM分期标准[6]；③患者年龄﹤80岁；④在北京新里程肿瘤医院实施外科手术治疗，术中成功获取食管癌组织标本及癌旁组织标本。排除标准：①手术前已经实施放化疗；②合并其他部位恶性肿瘤；③患者各项临床、病理学资料不详。80例患者中，男47例，女33例；年龄38～77岁，平均（55.7±10.0）岁；病灶直径﹥3 cm 50例，≤3 cm 30例；大体分型：浸润型11例，溃疡型33例，髓质型26例，蕈伞型10例；病变部位：食管上段14例，食管中段46例，食管下段20例；分化程度：高分化18例，中分化22例，低分化40例；TNM分期：Ⅰ期18例，Ⅱ期31例，Ⅲ期22例，Ⅳ期9例；发生淋巴结转移53例，未发生淋巴结转移27例。

1.2 免疫组化检测方法

将样本连续切片后，进行免疫组化检测。将切片脱蜡至水，10 ml 3%过氧化氢封闭，8 ml柠檬酸缓冲液进行抗原修复操作，反应5 min，选用10%羊血清封闭10 min，加入一抗，4℃孵育过夜，取出后复温30 min，加入二抗，反应30 min，磷酸盐缓冲液洗涤，脱水封片，镜检。

1.3 判定标准

免疫组化结果判定：C-met蛋白的阳性表达着色于细胞质，呈黄色、棕黄色、褐色。①根据着色强度：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，褐色、黑色为3分；②根据阳性细胞比例：阳性细胞所占比例≤10%为1分，阳性细胞所占比例11%～50%为2分，阳性细胞所占比例51%～75%为3分，阳性细胞所占比例＞75%为4分。两种评分相乘总分﹤3分为“－”，3～5分为“+”，6～9分为“++”，﹥9分为“+++”；﹤3分为阴性，≥3分为阳性[6]。

1.4 统计学方法

采用SPSS 16.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）进行统计描述；计数资料以例数及率（%）表示，组间比较采用χ2检验；以P﹤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 C-met蛋白阳性表达率的比较

食管癌组织中C-met蛋白阳性表达率为80.00%（64/80），高于癌旁组织的6.25%（5/80），差异有统计学意义（χ2=88.702，P﹤0.05）。（表1、图1）

表1 两种组织标本中C-met蛋白的表达情况

图1 食管癌组织及癌旁组织中C-met蛋白阳性表达（免疫组化染色，×200）

2.2 食管癌组织中C-met蛋白阳性表达与患者临床特征的关系

TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、浸润深度为T3～4期、发生淋巴结转移的食管癌患者的C-met蛋白阳性表达率高于TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期、浸润深度为T1～2期、未发生淋巴结转移的食管癌患者（P﹤0.05）；不同年龄、性别、肿瘤部位、分化程度、病灶直径的食管癌患者C-met蛋白阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P﹥0.05）。（表2）

表2 食管癌组织中C-met蛋白阳性表达与患者临床特征的关系[n（%）]

3 讨论

C-met是原癌基因编码的肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）受体，具有编码酪氨酸激酶活性，主要表达于各种上皮细胞内，可调节肿瘤细胞侵袭性[7]。C-met与HGF可直接作用内皮细胞，促使其增殖、迁移，还可通过增强血管生成因子的表达来增加血管生成[8]。相关研究已经证实，肿瘤细胞可通过释放白细胞介素-1（interleukin-1，IL-1）、成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor，FGF）以及血源性单核细胞分泌生长因子等来刺激邻近成纤维细胞，促进HGF、C-met表达并形成正反馈，导致肿瘤的生长、侵袭[9]。突变型C-met转染NIH3T3细胞后，NIH3T3细胞转化率大幅增高，提示C-met基因可通过促进NIH3T3细胞转化来促进肿瘤形成[10]。C-met除与HGF相互结合形成生物效应外，还可借助非HGF途径激活，尤其是met过度表达的肿瘤细胞内，C-met基因扩增可促进酪氨酸激酶激活，并促进细胞恶性转化。部分已有的研究探讨了C-met蛋白在食管癌组织中的异常表达，认为高表达的C-met蛋白是促进食管癌病情进展的重要因素。

本研究中，食管癌组织中的C-met蛋白阳性表达率为80.00%，高于癌旁组织的6.25%，差异有统计学意义，提示C-met蛋白是食管癌的重要参与因子。已有研究表明，通过激活的RET及RAS基因转染肿瘤细胞，可促使C-met过度表达，并增强HGF依赖性的肿瘤侵袭能力[11]。还有研究发现，转染C-met基因可增强癌细胞的增殖速度，并提高C-met水平，促进癌细胞的HGF敏感性，同时增强癌细胞侵袭性[12]。本研究中，TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、浸润深度为T3～4期、发生淋巴结转移的食管癌患者的C-met蛋白阳性表达率高于TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期、浸润深度为T1～2期、未发生淋巴结转移的食管癌患者，这表明C-met与食管癌的侵袭性密切相关，佐证了前述结论，提示C-met或可成为食管癌分期、浸润以及转移与否的检测标志物。C-met蛋白作用于食管癌发生发展的机制临床尚未明确，但可能与以下几点有关：①侵袭细胞C-met激活后，细胞外基质将随之降解，细胞外基质蛋白水解相关分子及受体表达水平升高，肿瘤细胞侵袭能力增强[13]。②C-met与HGF结合后将激活结肠癌转移相关基因MACC1，而MACC1可与C-met启动子SPI位点结合，并促使其转录。MACC1还具有促进肿瘤细胞外基质降解，调节细胞骨架结构等能力[14]。有研究发现，C-met表达与食管癌患者预后有关，提示C-met可进一步增强肿瘤细胞的恶性潜能，提高其活性及侵袭性[15]。本研究还发现，不同年龄、性别、肿瘤部位、分化程度、病灶直径的食管癌患者C-met蛋白阳性表达率比较，差异无统计学意义，表明C-met蛋白水平与年龄、性别等因素无关。

本研究对80例食管癌组织标本及其癌旁组织标本内的C-met蛋白阳性表达情况进行了检测，发现食管癌组织中的C-met蛋白阳性表达率升高，并且与肿瘤临床分期、浸润深度、淋巴结转移有关，提示C-met或可作为食管癌分期、浸润以及淋巴结转移与否的检测指标。

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