沸玉菁茶清咽功能的实验研究

刘炘，於洪建，李文德，谢景欣，*

（1.江苏省疾病预防控制中心，江苏南京210009；2.浙江尖峰健康科技有限公司，浙江金华321000）

沸玉菁茶主要由铁观音茶、鲜白茅根、桔梗、胖大 海、青果、百合等组成，其中多种成分具有清肺利咽等功效，但配伍产品的相关功能未见报道[1-6]。我们根据原卫生部《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）[7]及国家食药监局《关于印发抗氧化功能评价方法等9个保健功能评价方法的通知》（国食药监保化[2012]107号）[8]的规定，通过对大小鼠采用不同剂量的沸玉菁茶水溶液进行干预，进一步观察沸玉菁茶的清咽效果。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 沸玉菁茶

沸玉菁茶（批号：20150326）浓缩提取物，为原茶叶经饮用水重复提取3次，提取液合并减压浓缩，真空干燥，浓缩倍数为1 g粉末相当于10 g茶叶。性状为黄褐色粉末，由浙江尖峰健康科技有限公司提供。

1.1.2 实验动物

SD 大鼠 150 g～220 g，ICR 小鼠 18.0 g～22.0 g，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，清洁级，合格证号：2015000533737；生产许可证号：SCXK（沪）2012－0002号；实验动物屏障环境设施使用许可证号：SYXK（苏）2012-0037号。全部动物均给予灭菌鼠饲料和灭菌水，灭菌鼠饲料由北京科澳协力饲料有限公司提供，饲料合格证号：SCXK（京）2014-0010。

1.1.3 主要仪器和试剂

TE412-L电子天平：德国Sartorius公司；YLS－7A足趾容积测量仪：济南益延科技设备有限公司；HPX-9052MBE电热恒温干燥箱：上海博讯医疗设备实业有限公司；葡聚糖4万（右旋糖酐40）、二甲苯（分析纯AR）：美国Sigma公司。

1.2 方法

1.2.1 分组及处理

选用健康雄性SD大鼠及ICR小鼠，分批按体重随机各分为4组（即对照组和低、中、高剂量组），每组10只，共分3批分别进行大鼠棉球植入实验、大鼠足趾肿胀实验及小鼠耳肿胀实验。经口灌胃，按照低、中、高剂量每天给予大鼠或小鼠41.6、83.3、249.9mg/kg（分别相当于成人每日每千克体重推荐摄入量的5倍、10倍和30倍）沸玉菁茶，大、小鼠灌胃容积分别为10、20 mL/kg·bw，溶剂对照组以等容积纯净水灌胃。各组大小鼠均给以普通饲料，自由进食和饮水，每天灌胃1次，连续灌胃30天后检测各项指标。

1.2.2 大鼠棉球植入实验

实验结束前8天，用脱毛器脱去大鼠两侧腹股沟处的毛，乙醚浅麻醉，碘伏消毒，在无菌条件下切开大鼠两侧腹股沟皮肤，植入备用的棉球，缝合切口，继续给予受试物。实验结束当天，给受试物1 h后，断颈处死大鼠，在原缝合处剪开皮肤，剥离并取出棉球肉芽组织，置于已称重洁净平皿中，恒温干燥箱60℃开盖干燥1 h后称重，计算肉芽肿净重。

肉芽肿净重/mg=干燥后棉球肉芽肿质量-原棉球质量

1.2.3 大鼠足趾肿胀实验

实验结束当天再给受试样品一次。1小时后，用足趾容积测量仪测量各组大鼠右后足趾的容积，作为0小时足趾容积。然后在大鼠右后足趾皮下注入1%葡聚糖4万0.1mL/只，分别于1、2、4、6 h测量大鼠足趾的容积，同一部位测量3次，取平均值。以不同时间所测足趾容积与致炎剂作用前的足趾容积之差为肿胀值，计算各个时间段的足趾肿胀率。

1.2.4 小鼠耳肿胀实验

汲取二甲苯20μL，滴加在小鼠右耳外侧面耳廓的中央，让其自由扩散，30min后，将小鼠脱颈椎处死，剪下双耳，用9mm直径打孔器在两耳相同部位打下耳片称重，以两耳重量之差为耳廓肿胀值，计算耳廓肿胀率。

耳廓肿胀率/%=耳廓肿胀值/对照耳片质量×100

1.2.5 数据处理

采用SPSS20.0软件进行单因素方差分析（AnalysisofVariance，ANOVA），对 P＜0.05 的数据用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。方差不齐时先进行变量转换，仍不齐则改用秩和检验分析。

2 结果

2.1 一般状况

实验期间各组大鼠一般状况良好，无异常症状和体征，也无死亡和行为异常。

2.2 对实验前后动物体重的影响

各项实验前后动物生长情况良好，受试物各剂量组与溶剂对照组动物体重和增重差异均无统计学意义（P＞0.05），见表 1～3。

表1 各组动物的初始体重（±s，n=10）Tab le1 Initialbodyweightof theanim als in each group（±s，n=10）

表1 各组动物的初始体重（±s，n=10）Tab le1 Initialbodyweightof theanim als in each group（±s，n=10）

注：各项实验受试物各剂量组与溶剂对照组动物初始体重经ANOVA检验得P值均大于0.05。

组别 棉球植入/g 足趾肿胀/g 耳肿胀/g对照组 164±3 164±3 20.6±0.5低剂量组 166±2 163±4 20.6±0.2中剂量组 166±3 164±5 20.5±0.2高剂量组 165±3 165±5 20.4±0.6

2.3 大鼠棉球植入实验

沸玉菁茶大鼠棉球植入实验的结果如表4所示。

表2 各组动物的终末体重（s，n=10）Table2 Finalbodyweightof theanimals in each group（±s，n=10）

表2 各组动物的终末体重（s，n=10）Table2 Finalbodyweightof theanimals in each group（±s，n=10）

注：各项实验受试物各剂量组与溶剂对照组动物终末体重经ANOVA检验得P值均大于0.05。

组别 棉球植入/g 足趾肿胀/g 耳肿胀/g对照组 358±8 360±8 25.7±0.4低剂量组 362±10 361±11 26.1±0.5中剂量组 361±8 361±9 26.3±0.9高剂量组 362±10 363±9 26.4±0.9

表3 样品对动物体重增加的影响（±s，n=10）Table3 Effectof fei-yu-jing tea on body weightgain in anim als（±s，n=10）

表3 样品对动物体重增加的影响（±s，n=10）Table3 Effectof fei-yu-jing tea on body weightgain in anim als（±s，n=10）

注：各项实验受试物各剂量组与溶剂对照组动物体重增加经ANOVA检验得P值均大于0.05。

组别 棉球植入/g 足趾肿胀/g 耳肿胀/g对照组 194±7 196±6 5.2±0.5低剂量组 196±11 198±10 5.4±0.6中剂量组 195±6 197±8 5.8±1.0高剂量组 196±11 198±10 6.0±1.2

表4 沸玉菁茶大鼠棉球植入实验结果（±s）Table4 Effectof fei-yu-jing tea on cotton ball im plantation experim ent in rats（±s）

表4 沸玉菁茶大鼠棉球植入实验结果（±s）Table4 Effectof fei-yu-jing tea on cotton ball im plantation experim ent in rats（±s）

组别 动物数 肉芽肿净重/g P值对照组 10 0.052±0.008低剂量组 10 0.042±0.010 0.008中剂量组 10 0.039±0.007 0.001高剂量组 10 0.038±0.007 0.001

受试物各剂量组肉芽肿净重均低于溶剂对照组，方差分析及两两比较最小显著性差异法（Least-SignificantDifference，LSD）显示各剂量组差异均有统计学意义（P＜0.05），该项实验结果阳性。

2.4 大鼠足趾肿胀实验

沸玉菁茶大鼠足趾肿胀实验的结果如表5～表7所示。

表5 沸玉菁茶大鼠足趾肿胀1 h实验结果（±s）Tab le5 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat1 h（±s）

表5 沸玉菁茶大鼠足趾肿胀1 h实验结果（±s）Tab le5 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat1 h（±s）

组别 动物数致炎前足趾容积/mL 1 h足趾容积/mL 1 h肿胀率/% P值对照组 10 0.998±0.112 1.334±0.144 33.78±6.92低剂量组 10 0.998±0.075 1.369±0.122 37.20±6.30 0.387中剂量组 10 0.916±0.121 1.228±0.117 34.81±7.52 0.793高剂量组 10 0.983±0.094 1.196±0.155 21.96±12.71 0.005

表6 沸玉菁茶大鼠足趾肿胀2、4 h实验结果（±s）Table6 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat 2 h and 4 h（±s）

表6 沸玉菁茶大鼠足趾肿胀2、4 h实验结果（±s）Table6 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat 2 h and 4 h（±s）

注：受试物各剂量组与溶剂对照组大鼠足趾肿胀率经ANOVA检验得P值均大于0.05。

30.24±8.41低剂量组 10 1.477±0.151 4 h肿胀率/%对照组 10 1.420±0.148组别 动物数 2 h足趾容积/mL 2 h肿胀率/%4 h足趾容积/mL 42.45±8.09 1.296±0.116 37.44±13.91中剂量组 10 1.323±0.107 48.13±11.05 1.370±0.164 36.61±17.55高剂量组 10 1.330±0.156 46.02±16.07 1.234±0.082 36.03±16.62 1.218±0.114 24.47±11.28

表7 沸玉菁茶大鼠足趾肿胀6 h实验结果（±s）Table7 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat6h（±s）

表7 沸玉菁茶大鼠足趾肿胀6 h实验结果（±s）Table7 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat6h（±s）

注：受试物各剂量组与溶剂对照组大鼠足趾肿胀率经ANOVA检验得P值均大于0.05。

组别 动物数 6 h足趾容积/mL 6 h肿胀率/%对照组 10 1.206±0.120 21.06±7.89低剂量组 10 1.286±0.153 29.03±12.88中剂量组 10 1.136±0.089 25.55±14.37高剂量组 10 1.116±0.094 13.98±8.65

经方差分析及两两比较（LSD检验）显示，受试物高剂量组与溶剂对照组1 h足肿胀率差异有统计学意义（P＜0.01），该项实验结果阳性。

2.5 小鼠耳肿胀实验

沸玉菁茶小鼠耳肿胀实验的结果如表8所示。

表8 沸玉菁茶小鼠耳肿胀实验结果（±s）Table8 Effectof fei-yu-jing tea on auricleswelling test inm ice（±s）

表8 沸玉菁茶小鼠耳肿胀实验结果（±s）Table8 Effectof fei-yu-jing tea on auricleswelling test inm ice（±s）

组别 动物数 耳廓肿胀值/mg 耳廓肿胀率/% P值对照组 10 11.65±4.47 46.00±19.15低剂量组 10 6.65±3.12 28.32±13.03 0.033中剂量组 10 6.32±3.72 29.34±17.94 0.043高剂量组 10 10.23±5.04 44.88±20.20 0.889

经方差分析及两两比较（LSD检验）显示，受试物低、中剂量组耳廓肿胀率均低于溶剂对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），该项实验结果阳性。

3 讨论

沸玉菁茶是一种全新的保健饮品资源，结合中医君、臣、佐、使的配伍理论，引用中医喉科经典《重楼玉钥》古方为依据[9]，采用现代细胞筛选技术精研改良配方，运用现代制剂技术将有效成分浓集，配以茶叶，制成功效明确、质量可控的袋泡茶，对咽喉及呼吸道具有调理养护作用，适合粉尘危害严重的行业人员以及在雾霾环境下出行或作业的群体[10-12]。沸玉菁茶中的主要成分铁观音茶、鲜白茅根、胖大海、青果等均为药食同源，是常见的健康饮用材料，该配伍产品的安全性也已得到了相关实验验证[13-14]。

清咽作用的机制为干预咽部炎症反应[15-16]。炎症反应分为急性炎症和慢性炎症，当受试物经实验证实具有干预急性炎症和慢性炎症的作用后才能确定受试物是否具有清咽的作用[17-18]。本研究发现，使用沸玉菁茶干预后，与空白对照组相比，SD大鼠各剂量组棉球肉芽肿净重及高剂量组1 h足趾肿胀率显著减小；ICR小鼠低、中剂量组耳廓肿胀率低于溶剂对照组。说明沸玉菁茶具有干预大鼠肉芽肿形成、足趾肿胀以及抑制小鼠耳廓肿胀的作用。以上3个实验结果均为阳性，可判定沸玉菁茶清咽功能实验结果阳性，说明沸玉菁茶具有清咽的作用，这为以后沸玉菁茶的开发及应用提供了有力的依据[19-20]。但其干预炎症反应的机制仍有待今后进一步研究探讨。

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