鲜牛奶中抗生素残留的原因及常用检测方法

张丽茹 黄新红 张东丽 李治玲 谢春胜

摘要：抗生素是一种高效的兽药，在奶牛养殖业中经常用于治疗乳房炎等疾病，但如果使用不当就会导致牛奶中残留过多。鲜牛奶中残留抗生素可能会引起多种不良反应，其会造成对抗生素类药物的敏感性降低，提高病原菌的耐药性。现主要概述鲜牛奶中抗生素残留的原因以及常用检测方法，给大家提供一定参考。

关键词：鲜牛奶；抗生素残留；原因分析；氯化三苯基四氮唑法；免疫受体试验方法

中图分类号：S858

文献标识码：B

文章编号：2095-9737（2018）01-0109-01

1 原因分析

新陳代谢和药物代谢动力学。药物能够经由不同的被动或者主动的化学过程而转运到动物体内，在机体新陈代谢过程中，部分药物能够表现出治疗学或者产生毒性影响，但其他的却没有。只要开始药物治疗，在其通过不同途径代谢结束前，会持续向组织间隔扩散。因此抗生素采取一般给药途径都会经由不同途径在一定程度上被消除，如奶液、粪便、尿液以及唾液（反刍动物中多次被利用的胃液）。另外，药物的制剂形式在很大程度上影响奶牛体内分子的排出，如某些“长期效应”药物能够在很长一段时间保留在注射部位和器官处，同时也会长时间对微生物有效。

哺乳期乳房处理及残留物的持续。奶牛哺乳期发生乳房炎后主要通过两种不同的处理机制进行治疗，即物理机制，是指每次挤奶中机械的排除；生物机制，即经由空隙进入血液中。少数抗生素本身就具有非常高的扩散性，能够快速越过如细胞壁、血管壁等不同的物理障碍，从而进入血液循环，再通过新陈代谢以不同的渠道消除掉，但其还能够在乳腺组织中积聚，并在葡萄腺、乳房池以及乳头内存留，就会在挤奶时经由奶液排到体外。通常情况下，牛奶中残留的抗生素浓度需要2～5天才会降低到MRL水平。

干乳期乳房处理。奶牛干乳期需要采取非常特殊的处理方式，这是由于该阶段机体停止产奶，而在最初哺乳期的生理恢复过程中，药物制剂的形式以及自身特性都会明显影响干乳期处理。在不挤奶的情况下，有时奶牛治疗后在乳头中残留的抗生素可能持续2个月之久，最终在第一次挤奶时就会经由初乳排出。

2 常用检测方法

氯化三苯基四氮唑法。即TTC法，在我国作为检测鲜牛奶中抗生素残留的标准方法，其测定原理是在鲜牛奶中加入菌种（嗜热链球菌），经培养后再加入无色的TTC指示剂，观察颜色变化。当鲜牛奶中存在抗生素时，加入菌种后无法增殖，此时就不会促使TTC指示剂发生还原反应，从而依旧呈无色状态；当鲜牛奶中存在抗生素时，加入菌种后就会大量生长繁殖，由于其在新陈代谢过程中会生成大量的氢，导致TTC指示剂发生还原反应而生成还原型的TTC，此时指示剂变成红色，从而造成样品也被染成红色。也就是说，鲜牛奶颜色没有变化判为阳性，染成红色判为阴性。操作时，先活化菌种，即用接种环取嗜热链球菌菌种在9 mL灭菌脱脂乳中接种，放在36℃恒温培养箱中进行12～15 h培养，之后保存在2～5℃冰箱中备用。注意每15天进行1次转种。第二步是测试菌液，即将上述被活化的嗜热链球菌菌种在灭菌脱脂乳中接种，在36℃添加下进行15 h培养，接着添加相同体积的灭菌脱脂乳，充分混匀即制成稀释的测试菌液。第三步是样品培养，即取9 mL样品装入18 mm×180 mm的试管内，注意每份样品还需要另外设置一份平行样。同时，还要再各做l份阳性和阴性对照，其中阴性对照管添加灭菌脱脂乳9 mL，阳性对照管添加青霉素G参照溶液9 mL。全部试管放在80℃水浴箱中进行5 min加热，经过冷却低于37℃时再添加1 mL测试菌液，轻轻转动试管充分混匀。之后放在36℃水浴箱中进行2h培养，接着添加3 mL质量分数为4%的TTC水溶液，使用涡旋混匀器进行15 s混合均匀或者振动试管混匀。最后再放在36℃水浴箱内进行30 min培养，注意避光，即可观察颜色变化。若样品颜色没有发生变化，可继续在水浴中进行30 min的避光培养，然后用于最终观察。观察时要确保迅速，如果长时间避光就会造成干扰。

免疫受体试验方法。免疫受体检测法是ELISA（酶联免疫分析法）的一种变换形式，其基本原理是以特定抗生素类群（如β-内酞胺类）作为靶子，让某些部位上固定的广谱受体（如微生物细胞）或者特定抗体捕捉。大部分检测法都是根据竞争性原理，使样品内所含的抗生素与内置抗生素标志物相互竞争结合于广谱受体或者固定抗体，之后采取冲洗和显色处理。内置抗生素标志物同广谱受体或者固定抗体相互结合会形成的一种复合体，在酶的作用下发生分解，从而生成发光物质或者有色物质。鲜牛奶中残留的抗生素同广谱受体或者固定抗体结合后也会形成复合体，但在酶的作用下分解不能够生成发光物质或者有色物质。因此通过对光度或者色度进行测定，同时与参比物进行对照，由此判断结果呈阳性还是阴性。由于该法根据竞争性原理，如果最终的反应结果光度越强或者颜色越深就判断为阴性，反之就判断为阳性。这种检测方法的优点是速度快，一般在10 min内就能够得到结果，但通常只能够作为定性试验，具有很强的特异性，且检测费用相对较高。