苞叶杜鹃组织培养初步研究

刘敏 陈欣 蔡超 宋斐飞

[摘 要]对苞叶杜鹃进行了组织培养研究，结果表明：以加入ZT2.0mg/L的WPM培养基效果较好，以茎尖为材料的诱导率较高。

[关键词]组织培养；苞叶杜鹃

[中图分类号]S685.21 [文献标识码]A

苞叶杜鹃（Rhododendron redowskianum），又称云间杜鹃，为杜鹃花科（Ericaceae）、杜鹃花属（Rhododendron）矮小落叶灌木，株高20cm左右，分枝多，根系发达呈垫状植物。叶互生，长椭圆形，长1-2cm，叶缘具长腺毛。花少数生枝顶，紫红色，花径2cm， 花冠五裂，其中一侧裂至基部，至使冠呈左右对称状。花后结蒴果。苞叶杜鹃在长白山苔原带具有水土保持和维持生态平衡的重要作用，为吉林省I类保护植物。苞叶杜鹃在长白山分布数量少，在天池附近的旅游区应倍加爱护，防止践踏与采摘。花美丽可爱，可研究人工栽培为观赏花卉。

目前，关于苞叶杜鹃组织培养快速繁殖技术研究较少，对此，我们摸索出适合吉林地区快速繁殖苞叶杜鹃的方法，并建立苞叶杜鹃的苗木生产基地，为园林绿化供应苗木。

1 材料和方法

1.1 材料来源

于5月中旬在长白山上，剪取苞叶杜鹃幼嫩枝条，放于水中进行室内培养，次日接种。

1.2 实验方法

1.2.1 配置培养基

培养基的配置主要采取以下步骤：

1.2.1.1 溶解琼脂及蔗糖。用天平准确称取8g琼脂和20g蔗糖，将琼脂放入小锅中，加水、加热溶解，同时用玻璃棒不断搅拌，直至沸腾，停止加热，再把蔗糖放入锅中，搅拌充分后，将液体倒入大烧杯中。

1.2.1.2 加入WPM培养基母液。分别向大烧杯中加入大量元素、微量元素、铁盐、肌醇、有机溶剂和不同浓度的细胞分列素（ZT），组合溶液见表1，细胞分裂素浓度见表2。

1.2.1.3 调整PH值。将PH值调到约4.8-5.0。

1.2.1.4 分装。将已经调好的溶液分装到洗刷干净的三角瓶中。

1.2.1.5 培养基灭菌。将三角瓶摆放在高压灭菌锅中，接通电源高压灭菌，当温度达到121°C，压力达到0.105MPa时，灭菌15min。

1.2.2 苞叶杜鹃组织培养步骤

1.2.2.1 器皿、工具的洗涤。

1.2.2.2 植物材料的表面灭菌。

首先，刷洗、冲洗植物材料。将苞叶杜鹃植株剪成适当大小，放在手中加两滴洗涤精，小心搓洗。放入干净小烧杯中，再用蒸馏水冲洗。

其次，将清洗干净的植物材料连同烧杯一起放在工作台上，升汞消毒10min，浸泡过程中用干净玻璃棒不断搅拌，充分接触。再用蒸馏水冲洗4-5次，冲洗完毕，便可接种。

1.2.2.3 接种。

整个过程中实验环境及材料均需要无菌操作。将吸水纸铺在器皿上，将材料用镊子取出，用剪刀剪成1cm小段，每段上要含有芽，插植到培养基上。

1.2.2.4 培养条件。

将装有接种材料的三角瓶放到培养室中培养，温度保持在25°C，采用自然光照。

1.2.2.5 试验观察。

分别在5月21日、5月29日和6月9日对试验结果进行观察，并记录染菌、褐化和生长分化情况。

2 结果与分析

实验结果见表3

从表3可以看出，以茎尖诱导无菌芽效果较好，25d后诱导率达50%，浓度为2.0mg/L的细胞分裂素（ZT）对外植体诱导较为适宜，诱导率为56%。

3 结论与讨论

3.1 培养基对组培的影响

不同植物对培养基要求不同，大量微量元素、铁盐、肌醇、蔗糖的浓度以及pH的变化都会影响外植体的生长，培养基中NH4+浓度过高，就会引起植物体褐化；pH的变化则可引起酚类与过氧化酶活性结合部位的改变，也会影响植物组织发生褐化。在实验过程中充分考虑到苞叶杜鹃喜酸性土壤，因此培养基要调整其PH值为4.8-5.0。这是苞叶杜鹃组培成功的关键因素之一。

3.2 外植体对组培的影响

外植体体积过大易污染，不宜采纳；而过小，成活率又会很低。不同的植物、器官和組织，其形态发生能力都不相同。此外生理学的发育年龄，也对组织形态发生有影响。一般情况幼年比老年的组织形态发生能力强，且带菌少，这也是很重要的规律之一。

3.3 光照对组培的影响

光照的作用主要是在形态形成的诱导方面，它涉及植物细胞分化的若干重要过程，通过光合作用在特殊的细胞里积累淀粉，一定量淀粉聚集后，便引起器官发生。诱导器官形成时，不需要很强的光，对多数植物来说，保持16h光照，8h黑暗是适宜的。而光的波长，对不同植物的反应也有差异。在蓝光下幼苗生长旺盛，根系粗壮；白光下幼苗纤弱；红光下出苗少。光强上，植物的组培对此要求则十分严格，2000-3000lx的光强一般可满足植物光周期中对光强的要求。

3.4 温度及其他方面的影响

一些研究表明，大多数培养中的细胞，其生长适宜温度为26-28oC，但是仍有一些例外。有些植物组织培养还需要低温处理或受到昼夜温度环境的影响，而且温度可能影响到形态发生的类型。

此外基因型、消毒是否彻底、母株的生理状态、生长季节等对苞叶杜鹃的组织培养有一定影响。

[参考文献]

[1] 陈嵘.中国树木分类学[M].北京：科学出版社，1953.

[2] 汤桂钧，张建安，蒋建平，等.高山杜鹃的组织培养快速繁殖技术研究[J].上海农业学报.2004（03）.

[3] 王亦菲，孙月芳，周润梅，等.两种西洋杜鹃的组织培养[J].上海农业学报，2003（02）.