经口灌服不同剂量金芪片对大鼠血液生化学的影响探讨

王红平 赵璐 杨雯

（四川省食品药品检验检测院安全评价中心 四川 成都 611731）

金芪片是由成都复兴医院研制提供的院内制剂，主药为黄芪、白茅根等，具有清热解毒，凉血止血，托毒排脓功效，用于治疗乳腺癌、子宫癌等妇科肿瘤。本研究具体分析经口灌服不同剂量金芪片对大鼠血液生化学的影响，寻找临床安全剂量。

1.材料及方法

1.1 实验动物

雌性SD大鼠120只，SPF级，购入时体重为80～100g。实验动物生产许可证号：SCXK（渝）2012-0005，实验动物质量合格证号：NO.0000055，由第三军医大学第三附属医院野战外科研究所实验动物中心提供。

1.2 实验仪器

仪器：COBAS INTEGRA 400 Plus型全自动生化分析仪，瑞士Roche公司；。

试剂：主要为血液生化学试剂，均购自德国罗氏诊断有限公司。

1.3 方法

1.3.1 剂量确定[1]高剂量组：通过SD大鼠经口灌服金芪片14天多次给药毒性实验预试实验结果：最大给药量8.25g生药粉/kg·bw无动物死亡，未见明显毒性反应。因此将8.25g生药粉/kg·bw，设为高剂量，相当于41.25倍人用剂量。

低剂量组：金芪片的临床用量为成人（按60kg体重计）6片/次×4次/日，相当于0.2g生药粉/kg·bw/日，折算成大鼠的等效剂量为1.26g生药粉/kg.bw/日。为了便于配制药液，分析药物的剂量与毒性关系，因此将低剂量设为1.375g生药粉/kg·bw（是高剂量的1/6）。

中剂量组：中剂量设计选择在1.375g生药粉/kg·bw和8.25g生药粉/kg·bw之间，为了便于配制药液，分析药物的剂量与毒性关系，中剂量设为高剂量的1/2.5,低剂量的2.4倍，为3.3g生药/kg·bw。

另外设置溶媒对照组（蒸馏水）。

1.3.2 分组给药[2]大鼠经适应性饲养并检疫后，按体重随机均分成4组，连续经口灌胃给药3个月（按13周计），给药容积15ml/kg·bw，每周连续给药6天每天1次，星期天停药1天。连续给药13周后停药恢复1个月（按4周计）。

1.4 观察指标

在给药末期13周和恢复期17周各测一次血液生化学指标，检测项目包括：白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)、总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、总胆红素(TBIL)、总蛋白(TP)、血糖(GLU)、钾离子浓度(K+)、钠离子浓度(Na+)和氯离子浓度(Cl-)。

1.5 统计方法[3]

用SPSS16.0软件对各项检查的数据进行统计，数据以均数±标准差（±s）表示。血液生化指标按计量资料统计，首先选用SPSS16.0软件下的Decriptives统计数据，计算其均值、标准差、标准误、均值95%的可信区间、最大值和最小值；其次采用单因素方差分析，方差齐者，采用LSD多重比较检验；方差不齐者，采用Tamhane T2多重比较检验。

2.结果

2.1 给药末期血液生化学水平

表1、表2结果显示：给药末期，与对照组比较，高剂量组ALP降低（P＜0.05）；低、中、高剂量组ALT降低（P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01）；中剂量组CREA降低（P＜0.05）；高剂量组Glu升高（P＜0.01）；高剂量组K+浓度升高（P＜0.01）；中、高剂量组Na+浓度升高（P＜0.01）。

表1 连续3个月经口灌服金芪片对大鼠血液生化学的影响（末期）（±s）

表1 连续3个月经口灌服金芪片对大鼠血液生化学的影响（末期）（±s）

注：与溶媒对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01。

组别 ALB(g/L) ALP(U/L) ALT(U/L) AST(U/L) CREA(umol/L) CHOL(mmol/L) CK(U/L)空白对照组 47.41±3.46 56.84±23.58 34.56±6.04 104.95±23.42 37.47±5.37 1.432±0.262 587.19±235.51低剂量组 47.85±2.62 50.45±13.30 30.95±6.28* 103.52±22.49 40.28±4.90 1.456±0.302 530.62±203.48中剂量组 47.37±3.66 43.76±8.66 24.00±4.14** 91.50±28.10 33.36±4.39* 1.528±0.365 517.33±250.07高剂量组 47.39±3.01 39.88±12.06* 25.12±4.96** 94.10±19.18 37.06±6.09 1.446±0.309 460.13±137.63

表2 连续3个月经口灌服金芪片对大鼠血液生化学的影响（末期）（±s）

表2 连续3个月经口灌服金芪片对大鼠血液生化学的影响（末期）（±s）

注：与溶媒对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01。

组别 Glu(mmol/L) TBIL(umol/L) TP(g/L) TG(mmol/L) Bun(mmol/L) K+(mmol/L) Na+(mmol/L) Cl-(mmol/L)空白对照组 8.293±0.738 0.610±1.024 64.56±3.64 0.534±0.287 5.945±1.080 4.404±0.286 141.50±1.36 102.74±1.95低剂量组 8.740±0.901 0.540±0.964 64.34±3.66 0.377±0.080 5.924±0.953 4.448±0.370 141.90±1.17 103.69±1.32中剂量组 8.714±0.677 0.175±0.783 64.52±4.20 0.408±0.124 6.064±0.912 4.559±0.348 143.70±1.26** 103.31±1.45高剂量组 9.174±0.653** 0.600±2.073 64.19±3.60 0.440±0.124 6.396±1.218 4.855±0.272** 143.30±1.22** 102.98±1.78

2.2 恢复期血液生化学水平

表3、表4结果显示，恢复期，与对照组比较，高剂量组AST降低（P＜0.01）；中、高剂量组CK降低（P＜0.05）、Glu升高（P＜0.05）；高剂量组K+浓度降低（P＜0.01）。

表3 连续3个月经口灌服金芪片对大鼠血液生化学的影响（恢复期）（±s）

表3 连续3个月经口灌服金芪片对大鼠血液生化学的影响（恢复期）（±s）

注：与溶媒对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01。

组别 ALB(g/L) ALP(U/L) ALT(U/L) AST(U/L) CREA(umol/L) CHOL(mmol/L) CK(U/L)空白对照组 44.06±8.28 36.46±14.61 33.76±7.24 108.27±16.91 43.05±14.17 1.429±0.247 658.05±371.46低剂量组 41.99±7.54 49.82±21.50 38.08±7.10 102.46±20.80 42.58±11.32 1.259±0.325 609.68±220.90中剂量组 46.38±6.46 33.68±13.93 33.90±5.21 91.85±29.37 44.08±5.82 1.520±0.393 313.94±185.30*高剂量组 50.06±2.41 34.00±11.17 31.00±6.93 78.50±14.88** 49.68±8.58 1.366±0.244 351.31±392.47*

表4 连续3个月经口灌服金芪片对大鼠血液生化学的影响（恢复期）（±s）

表4 连续3个月经口灌服金芪片对大鼠血液生化学的影响（恢复期）（±s）

注：与溶媒对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01。

组别 Glu(mmol/L) TBIL(umol/L) TP(g/L) TG(mmol/L) Bun(mmol/L) K+(mmol/L) Na+(mmol/L) Cl-(mmol/L)空白对照组 7.426±0.918 0.000±0.000 64.50±3.42 0.588±0.198 8.137±1.153 6.127±0.519 167.70±12.08 122.58±9.60低剂量组 8.098±0.819 0.060±0.190 63.98±6.23 0.543±0.182 7.637±1.165 5.572±0.453 161.80±10.56 116.85±8.91中剂量组 8.576±1.234* 0.230±0.727 63.09±10.15 0.542±0.154 8.260±0.775 5.884±0.852 156.90±3.90 112.84±3.03高剂量组 8.523±1.223* 0.000±0.000 64.81±2.63 0.449±0.126 7.415±1.127 5.271±0.610** 158.70±3.56 115.81±3.56

3.讨论

金芪片对大鼠长期毒性血液生化学检验结果显示及分析，未见受试物的血液生化学方面的毒性反应。低、中、高三个剂量组给药末期以及恢复期的血液生化学检测值，与对照组比较，虽然部分结果显示有统计学意义，但是，除血糖指标外，涉及到肝功能的指标ALP和ALT在给药末期均为显著降低，恢复期恢复正常；涉及到肾脏功能的指标肌酐，在给药末期中剂量组低于对照组，而恢复期均有所恢复，病理检查也未见肝脏和肾脏有病变发生，且以上数据均在本实验室背景数据范围内波动，其降低不具有毒理学意义，故该样品对SD大鼠肝肾功能无明显影响[4-7]。血糖在给药末期高剂量组显著高于对照组，恢复期中、高剂量组血糖都有所降低但相对于对照组仍偏高，提示在临床用药时需关注患者血糖变化。

综上所述，在本试验条件下，大鼠连续3个月灌服金芪片1.375、3.3和8.25g生药粉/kg·bw三个剂量（分别为人临床日用剂量的6.875、16.5、41.25倍），无动物死亡，未见严重的毒性反应，低剂量组，即1.375g生药粉/kg·bw为安全剂量。

【参考文献】

[1]中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则（[Z]GPT3-1）.国家食品药品监督管理局,2005.

[2]国家食品药品监督管理局.药物非临床研究质量管理规范[J].中国医药导刊,2003,5(5)：364-366.

[3]王红平,武志强,曾统英,等.苏萸痛风胶囊重复给药毒性试验研究——对SD大鼠肝脏的影响[J].四川生理科学杂志 ,2017,39(2)：59-62.

[4]蔡铁全,李雪梅,胡宇驰,等.灵芝孢子胶囊大鼠重复给药26周长期毒性试验[J].毒理学杂志,2017,31(5)：410-413.

[5]尚红.全国临床检验操作规程[M]（第4版）.北京：人民卫生出版社,2015.

[6]府伟灵.临床生物化学检验[M]（第5版）.北京：人民卫生出版社,2015.

[7]夏兆飞.兽医临床病理学[M].北京：中国农业大学出版社,2014.