钾对烟草根际氮细菌、氮古菌群落及氮代谢的影响

翁泽斌，彭世文，王淑民，何冬冬，郑国建，徐辰生，蔡海洋，刘泓，陈志厚

1 福建农林大学，资源与环境学院，福建省福州市仓山区上下店路15号 350002；2 南平市烟草公司，烟科分所，福建南平 353000

烟草作为典型的嗜钾作物，在栽培过程中，钾肥对烟叶产量、品质和土壤理化性质的影响因肥料用量、气候条件、土壤类型和农艺措施等因素的不同而存在差异。有研究表明，烟叶产量、产值对施肥措施的依赖程度分别达39%和47%[1]。为此，合理使用钾肥，获得更好的农艺效果，达到减肥增效的目的，成为近年来热门的研究话题。同时，氮素的供给对烟叶质量也起到决定性的作用，供给不足会导致蛋白质、核酸、磷脂等物质合成受阻、细胞分裂缓慢、植株矮小、叶片狭窄等问题，并显著降低其评吸质量；供给过度，则会导致烟叶过度生长从而落黄变慢，烤后烟叶一方面烟碱过高，糖类合成受阻，另一方面稀释效益导致各化学评价指标下降，影响烟叶质量。因此钾氮互作一直是国内外研究关注的重点[2-3]。第一，NO3--N和K+之间存在电荷补偿机制而促进生物体对彼此的吸收；第二，NH4+-N和K+相同的化合价和相似的离子半径使二者在土壤胶体的吸附上存在竞争关系；第三，NH4+-N的吸收吸附又能引起土壤酸化，有利于K+的释放，增加根际有效钾含量[2,4]。

一直以来，针对钾肥的研究多集中在提高烟叶钾含量上，涉及由此引起的氮代谢环境变化的研究较少，且对氮细菌、氮古菌的影响未见报道，因此本试验结合福建南平独特土壤、气候等生态因素，为获取氮代谢功能基因组数据，采用FAPROTAX数据库对16S rRNA高通量数据进行预测，并结合土壤酶活、土壤氮素有效性等传统土壤环境指标进行分析，通过研究大田环境下不同施钾水平对根际氮细菌、氮古菌和氮代谢的影响，分析研究施钾量与氮代谢的相互关系，为打造优质特色的“武夷生态、富钾清香”烟叶提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料与地点

供试烟草品种采用K326。试验安排在建瓯南雅镇仁墩村，土壤质地为砂壤土，前作为水稻。试验地的土壤基本养分状况见表1。从表中可以看出，试验土壤速效钾含量为50.16 mg/kg，含量较低。

表1 试验土壤基本养分状况Tab.1 Basic nutrient contents in soil

1.2 试验设置及培育方法

每公顷施钾量采用等差跨度，参考当地常规用量，以氮磷钾（N:P2O5:K2O）配比为1:0.8:2.8，每公顷钾肥施用量315.00 kg为对照。按对照施钾量1/4（78.75 kg）作为各个处理间的差值。实际各处理施钾肥（K2O）情况与氮磷钾（N:P2O5:K2O）配比见表2，分别在种植前、开盘前和团棵前三次施用。试验采用5处理3次重复的随机区组试验，每个小区4行，行距120 cm，株距50 cm。其他农事操作均统一按当地K326品种技术方案执行。

表2 不同处理氮磷钾养分配比Tab.2 Ratio of NPK by different treatments

1.3 土壤及烟株采样

土壤采样分别于烟草旺长期和顶叶成熟期（下称成熟期）两个时间进行，旺长期不同处理标记为：A1、B1、C1、D1、E1；成熟期不同处理标记为：A2、B2、C2、D2、E2。具体方法如下：每个处理随机选取三株有代表性的植株，采用抖根法获取烟草根际土壤，挑去杂质并过0.25 mm筛。充分混匀后，用四分法取样，4℃保存供土壤酶类及微生物量氮分析。另用相同方法，取根际土并于-20℃保存，供微生物群落分析。

1.4 土壤微生物DNA提取、群落分析及基因预测

根际土壤微生物区系分析采用生工Ezup柱式土壤DNA抽提试剂盒提取土壤全基因组DNA。采用NanoDrop以及0.5%琼脂糖电泳监测质量合格后，送诺禾致源以16S rRNA为目标，利用HiSep测序平台双末端测序。经OTUs聚类、采用物种注释及丰度分析、多样性分析对数据进行整理。再利用FAPROTAX数据库[5]基于Greengenes（Version 13.5）对以发表验证的可培养菌进行注释，并筛选出与氮代谢相关的细菌汇总其相对丰度值。

1.5 土壤氮素有效性分析

土壤微生物量氮和可溶性全氮的测定采用氯仿熏蒸-K2SO4提取法，利用碳自动分析仪对烟草根际土壤进行测定。计算时转换系数取0.45。并以二者合计值作为土壤氮素有效性的指示指标。

1.6 土壤酶类活性分析

尿素酶活性测定以尿素为基质，NH4+-N为水解产物，于690nm处测定吸光度。硝酸还原酶活性测定以KNO3为基质，(-NO2)为还原产物，在520nm处测定吸光度。

1.7 烟草化学成分测定及赋值

参考王彦亭等[6]的化学成分指标赋值法，对烤后烟叶的烟碱、总糖、还原糖、总氮、钾等指标进行测定。并针对中部叶，采用综合相关法和层次分析法计算结果确定各化学成分指标相应的权重，对偏离可接受范围的值采用二次曲线拟合确定其分值。采用指数和法评价烤烟内在化学成分协调性综合情况，化学成分协调性综合指标P值越高烟叶质量越好：

式中

P——烤烟化学成分协调性综合指数；

Pi——第i个化学成分指标相对权重；

Ci——第i个化学成分指标量化分值。

1.8 数据统计与分析

所有数据分析采用Excel与SPSS进行，相关性分析方法采用Duncan新复极差法，取P＜0.05为显著性差异。属（Rhizomicrobium）和节杆菌属（Arthrobacter）。

图1 不同钾水平下烟草根际细菌、古菌属水平相对丰度（前10位）Fig.1 Relative abundance of bacterial and archaeal taxonomic assignments at the genus level in tobacco’s rhizosphere soil of different potassium level (Top 10)

2 结果与分析

2.1 不同施钾水平对细菌、古菌属水平上群落组成的影响

如图1所示，根际细菌、古菌在属水平上相对丰度前十的类群为Haliangium属、节杆菌属（Arthrobacter）、马赛菌属（Massilia）、Acidibacter属、杜擀氏菌（Duganella）、苔菌属（Bryobacter）、鞘氨醇单胞菌属（Sphingomonas）、Candidatus Solibacter属、根微菌属（Rhizomicrobium）和亚硝化细杆菌侯选种（Candidatus Nitrosotalea），共占根际总细菌、古菌群落的12.2% ～ 15.6%。旺长期处理B、处理C、处理D和成熟期处理C、处理D、处理E所占比例较低，说明相比旺长期，成熟期根际烟草群落更适合较高的施钾水平，各菌属分布更为均匀，群落多态性更高，根际微生物区系的稳定性更高。在相对丰度前十的菌属中，与氮代谢相关的有：马赛菌属（Massilia）、亚硝化细杆菌侯选种（Candidatus Nitrosotalea）、根微菌

如表3所示，不同施钾水平下，亚硝化细杆菌侯选种（Candidatus Nitrosotalea）在旺长期和成熟期均无显著性差异，但成熟期相对旺长期相对丰度下降，且除处理C和处理D外均呈显著性差异。根微菌属（Rhizomicrobium）随着施钾水平的升高在成熟期呈倒“U”型分布并在处理B达最大值3.54‰，并显著高于旺长期。高施钾水平（处理E）使马赛菌属（Massilia）在旺长期有较高的相对丰度，而成熟期不同施钾水平间相对丰度无显著性差异，但处理A、处理C、处理E均相对旺长期显著下降。节杆菌属（Arthrobacter）在不同施钾水平无显著性差异，但成熟期的相对丰度要高于旺长期，并在处理B和处理C显著提高。

表3 不同钾水平下烟草根际四种氮代谢相关菌属水平相对丰度Tab.3 Relative abundance of four kinds of nitrogen metabolism bacterial and archaeal taxonomic assignments at the genus level in tobacco’s rhizosphere soil of different potassium level

2.2 不同施钾水平对氮代谢功能菌相对丰度的影响

由于土壤环境的复杂，单一的菌种功能并不能很好的代表整个土壤环境的特征。利用FAPROTAX筛选已知可培养的氮细菌，可以依据根际功能群落的变化了解根际环境的变化。如表4所示，除处理C外，硝化作用菌的相对丰度在旺长期比成熟期显著提高，平均提高90.2%。随着施钾量的增加，反硝化细菌相对丰度和硝酸还原菌相对丰度在旺长期与施钾水平呈显著负相关（P值分别为0和0.021），分别在处理A取得最大值3.79%和4.56%。成熟期相对旺长期有显著提高，并均在处理B取得最大的相对丰度5.16%和5.74%。揭示出烟草成熟期，土壤中的硝态氮被进一步还原成氧化亚氮、氮气和氨。不同施钾水平下固氮菌的相对丰度基本无显著变化。综上，旺长期土壤铵态氮的硝化作用相比成熟期旺盛，而旺长期硝态氮的还原过程相比成熟期较弱，并随着施钾水平的提高而减弱。

表4 不同钾水平下烟草根际氮细菌相对丰度Tab.4 Relative abundance of nitrogen bacteria in tobacco’s rhizosphere soil of different potassium level

2.3 不同施钾水平对烟草根际氮素有效性的影响

如表5所示，在不同时期土壤氮素有效性均呈倒“U”型分布，并在处理B分别取得最高值50.05 mg/kg和44.15 mg/kg，相对对照分别提高了20.9%和12.2%。处理B的土壤氮素有效性在旺长期要显著高于成熟期。因此有理由认为，施钾量不仅直接影响土壤中钾营养的供给，还可以显著影响土壤氮素有效性。处理B能显著提高土壤氮素的有效性，而同时提高土壤的施钾水平能在一定程度上根际土壤有效性氮的含量，进而减少烟株对氮的吸收。

表5 不同钾水平下烟草根际土壤氮素有效性Tab.5 Nitrogen availability in tobacco’s rhizosphere soil of different potassium level

2.4 不同施钾水平对烟草根际土壤酶活性的影响

2.4.1 脲酶

如图2所示，在旺长期，高钾处理（处理D、处理E）使脲酶活性显著升高，最高为130 mg/kg.h。成熟期，处理B及处理C脲酶活性较高，处理B活性达到最高值92 mg/kg.h，总体呈现中间高，两边低的趋势。不同生长时期对比，处理B和处理C在旺长期的活性显著低于成熟期，而处理D和处理E则反之。处理A在不同时期无显著变化。

2.4.2 硝酸还原酶

如图3所示，在氮钾配比N:K2O=1:1.4 ～ 2.8时，施钾量对旺长期硝酸还原酶活性影响不显著，但当配比N:K2O=1:2.8 ～ 4.2时，旺长期的硝酸还原酶活性随施钾量增大而显著升高。特别是处理E相比对照提高了221%。成熟期硝酸还原酶活性相比旺长期要显著提高（除处理E外），并呈现中间高两边低的趋势，在处理C的活性最高达到了131.8 mg/kg.h。整体来看，不同施钾量对根际硝酸还原酶活性影响在旺长期更明显，高钾显著提高硝酸还原酶的活性；成熟期根际土壤硝酸还原酶活性相比旺长期差异较小，但处理C显著较高。

图2 不同钾水平对烟草根际土壤脲酶活性的影响Fig.2 Urease activity in tobacco’s rhizosphere soil of different potassium level

图3 不同钾水平对烟草根际土壤硝酸还原酶活性的影响Fig.3 Nitratase activity in tobacco’s rhizosphere soil of different potassium level

2.5 不同施钾水平对烟草化学成分的影响

由表6可知，中部叶处理A的P值最高，对照处理C次之但无显著性差异；随着施钾水平提高，总氮及中上部叶的烟碱含量显著降低，相同施钾处理烟碱、总氮随着叶位的提高含量显著升高，中部叶处理A及处理B的烟碱含量较适宜，总体协调性较好；总糖、还原糖含量随着叶位的提高而降低，中部叶总糖、还原糖的含量随施钾水平的升高而降低；糖碱比由下至上，不同叶位的均值为16.66、4.41和2.21，氮碱比为1.52、0.74和0.60，随着叶位的提升，糖碱比和氮碱比显著下降，但相同叶位不同处理间在中上部叶无显著性差异；下部叶处理B氧化钾含量显著高于其他处理，中上部叶除处理A显著较低外，其他处理对烟叶氧化钾含量无显著性影响，但随着叶位的提高相同处理氧化钾含量显著降低。综上，就中部叶而言，处理A的施钾水平已能保证烟叶质量；而后期成熟的叶片总氮、烟碱含量上升，总糖、还原糖和氧化钾含量下降，在一定程度上影响烟叶品质。

表6 不同钾水平烟草化学成分的影响Tab.6 Chemical components in different potassium level of tobacco

3 讨论

马赛菌属（Massilia）是一种根际寄生菌，其生长需要较多养分，一般在营养丰富时期大量繁殖[7]。高钾环境相对丰度较高，说明马赛菌属（Massilia）更适应高钾环境，而其本身也是一种根际促生菌，故可以作为菌肥筛选的潜在属应用于后期研究。马赛菌属在旺长期相对丰度较高，显示出该时期氮素营养较丰度。亚硝化细杆菌候选种（Candidatus Nitrosotalea）是一种氨氧化古菌，能将土壤中的铵根离子转化为亚硝酸根离子，并以此获得能量[8]。其在旺长期相对丰度较高，说明旺长期根际铵态氮含量较高。针对氮代谢功能菌相对丰度的统计表明旺长期土壤中铵态氮的生成能力随着钾浓度的提高而降低。邢瑶等[9]研究报道，较高的铵态氮能促进烟株生长前期根系的发育，促进氮素在根系的利用。处理A到处理C脲酶活性不高，再一次佐证N:K2O=1:1.4 ～ 2.1配比时，铵态氮源较充足[10]。但当配比升高到1:3.5～ 4.2，脲酶活性上升，推测原因可能为高浓度钾离子会与铵根离子相互竞争[4]，影响微生物和烟草根部对铵根离子的吸收，产生了缺铵的假象。硝酸还原酶作为一种诱导酶，在土壤嫌气条件下或者根际氮营养失衡时被激活。旺长期高施钾配比（N:K2O=1:4.2）诱导了硝酸还原酶活性提高，说明该施肥配比的氮磷钾养分不平衡，高钾抑制了根际环境对铵态氮的利用。当N:K2O=1:2.1（处理B）时，不仅土壤氮素有效性最高，最有利于烟草生长，同时成熟期的土壤氮素有效性显著低于旺长期的也从侧面反映该处理下，烟株对氮素的利用率要高于其他处理。综上，N:K2O=1:2.1（处理B）能更好的促进旺长期烟草根系发育。

C Shang[11]研究发现根际脲酶活性在烟株打顶前较低，但打顶后就一直保持较高水平。这与本试验中处理B和处理C的情况一致。旺长期的功能菌相对丰度表现为硝化作用菌相对丰度较高而反硝化作用菌和硝酸还原菌相对丰度相低。除高钾（处理E）环境外，应激酶硝酸还原酶的活性在旺长期较低。这些现象从侧面说明，旺长期土壤中的氮素向硝态氮转变，成熟期反之。究其原因，一方面施氮时铵态氮比例较高，土壤氮素以硝化作用为主，导致成熟期土壤中硝态氮比例增加；另一方面，由于成熟期进入雨季，土壤嫌气条件下促进反硝化作用，硝酸还原酶活性增强。李中民[12]研究发现生长初期K326品种烟草对硝态氮亲和力更强，同时植株内的硝酸盐能诱导合成细胞分裂素[13]，因此在旺长期采用适当的氮钾配比能增加土壤环境中氮素的利用率，并有助于烟株的生长。烟叶质量的分析表明，处理A中部叶的烟叶质量最高，也从侧面佐证了与试验相同土壤环境下，较低的施钾量能满足烟草生产所需。

在成熟期，硝酸还原酶活性和脲酶活性在处理B和处理C均有大幅度提高。而脲酶活性在处理D大幅降低。根际氮代谢功能菌中反硝化作用菌相对丰度提高，硝化作用菌和硝酸还原菌相对丰度降低。表明在适宜的钾浓度条件下，根际环境对铵态氮的需求量增大，硝态氮的比例上升。从侧面证明了旺长期烟草利用硝态氮为主，到生长后期利用铵态氮为主。一方面，高脲酶活性能提高土壤铵态氮含量，有利于烟草的生长[14]，但也会显著促进烟叶氮素累积，不利于烟叶糖类化合物合成，同时烟株生长产生的稀释效应也会影响烟叶化学物质的含量；另一方面，不同氮素形态会影响烟株对钾素的吸收[4]。因此铵态氮和硝态氮要保持一定的比例才最有利于烟株的钾素营养。故建议在成熟期保持根际土壤较高的钾含量，优化根际不同形态氮素营养比例。并有研究表明，高浓度钾的环境中，烟草根皮层细胞质膜上的内向K+通道主要表现为低亲和性钾的吸收[15]。因此利用施钾量抑制脲酶活性，调节根际氮代谢，降低铵态氮含量，以达到促进烟株对钾的吸收，减少氮素积累，提高烟叶质量的目的。

张明发[16]的研究表明，烟草生长的关键时期是旺长期，烟草烟叶氮素累积的关键时期是成熟期。本试验显示，不同时期烟草生长所需的钾量不同，单一的施肥方式并不能满足不同叶位优质烟叶生长需求。优质烤烟烟叶的烟碱、总糖、还原糖、总氮、氧化钾、糖碱比和氮碱比的范围分别为：2.2% ～ 2.8%、18% ～ 22%、18% ～ 22%、2% ～ 2.5%、3% 以上、8.5～ 9.5和0.95 ～ 1.05[6,17]。较早成熟的下部叶最适的施钾配比为N:K2O=1:1.4，较晚成熟的中上部叶总氮、烟碱含量升高，糖含量显著偏低，糖碱比、氮碱比失衡，最适施钾配比升高、范围变广，且较高施钾处理能降低氮碱含量。又有研究表明，上部叶氧化钾含量与施钾量呈正相关[18]，与试验相符。因此就本试验所述烟草生长条件而言，每公顷施钾（K2O）236.25 kg，N:K2O=1:2.1时根际氮素有效性最高，利于烟草旺长期的生长。而每公顷施钾（K2O）315 ～ 393.75 kg，N:K2O=1:2.8 ～ 3.5虽然旺长期会降低土壤有效性氮的含量，铵态氮缺乏，不利于烟株生长。但在成熟期，较高的施钾水平，抑制铵态氮的生成，一方面减少氮素的积累有利于烟草糖类化合物的合成，同时提升烟叶含钾量，提升烟叶化学品质；另一方面较低的铵态氮供给减缓烟草生长，降低稀释效益的影响，更有利于烟叶品质提升。

戴勋[19]的研究发现，追施钾肥，能降低烟碱含量，提高总糖、还原糖和氧化钾含量并提升糖碱比和氮碱比。而试验烟叶化学成分分析表明，上部叶烟碱含量过高，糖类、氧化钾含量和糖碱比氮碱比偏低，佐证了追施钾肥的必要性。李静[20]在研究中发现，烟草有两个钾元素的吸收高峰，分别出现在旺长后期和中部叶成熟期。在这两个时期之前保证钾肥丰富尤为重要。樊芬[21]研究发现，较晚的追肥（氮钾肥）有利于烟株合成能力和干物质的积累。王同朝[22]的研究也表明，分团棵期和打顶时两次施肥能更好的提高烟叶品质。但也有研究表明追肥时间后移，也容易造成烟株落黄变慢，大田生育期延长的不良影响[23]。因此可以考虑采用柠檬酸钾进行喷施有利于烟草的成熟，且烟叶品质较好[24]。具体追肥时间、品种及用量还需通过进一步研究来确认。

4 结论

（1）本研究通过高通量测序技术和分光光度法，发现不同钾肥的施用量能对根际微生物群落及氮代谢产生影响，进而影响烟株对氮的吸收与利用。

（2）试验显示，旺长期土壤中的氮素向硝态氮转变，成熟期反之。施钾配比N:K2O=1:2.1的氮素有效性较高，铵态氮充足；而N:K2O=1:3.5～4.2，影响微生物和烟草根部对铵根离子的吸收，认为在氮含量高的土壤上，可以通过增加钾肥的施用减少烟株对氮的利用。

（3）目前采用的单一的施钾方式并不能满足不同时期烟草生长和不同叶位优质烟叶成熟的需求。建议在与试验相同的土壤环境与气候背景下，打顶前可以依据现有施肥模式适当降低施钾量至每公顷施钾（K2O）236.25 kg（N:K2O=1:2.1），以获得较高的产量。并在打顶后追施一定量的钾肥，提高根际环境的钾水平，改变根际氮代谢环境，抑制烟株过度生长降低稀释效应，促进糖类化合物合成，提升烟草品质。

（4）在本试验的基础上，一方面针对追肥措施进一步研究，将研究结果运用到实际生产当中，提高烟草的产质量；另一方面，运用宏基因测序技术和RNA及蛋白的定量分析，结合具体基因和蛋白的表达情况，进一步探究微生物群落在烟草根际的钾氮互作方面所扮演的角色。为我国烟草科学种植，打造优质烟叶提供理论依据。

[1]段玉琪, 杨宇虹, 晋艳, 等. 长期施钾肥对烤烟产质量和土壤理化性状的影响[J]. 贵州农业科学, 2015, 43(09):100-104.DUAN Yuqi, YANG Yuhong, JIN Yan, et al. Effects of long-term potassium application on yield and quality of tobacco and soil physical and chemical properties[J]. Guizhou Agricultural Sciences,2015, 43(09):100-104.

[2]周龙, 吕玉, 朱启林,等. 施氮与间作对玉米和马铃薯钾吸收与分配的影响[J]. 植物营养与肥料学报, 2016, 22(6):1485-1493.ZHOU Long, LV Yu, ZHU Qilin, et al. Effects of N application on potassium absorption and distribution of maize and potato in intercropping system[J]. Plant Nutrition and Fertilizer Science,2016, 22(6):1485-1493.

[3]Rutkowska A, Pikuła D, Stepien´ W. Nitrogen use efficiency of maize and spring barley under potassium fertilization in long-term field experiment[J]. Plant Soil & Environment, 2014, 60(12):550-554.

[4]闫慧峰, 石屹, 李乃会,等. 烟草钾素营养研究进展[J]. 中国农业科技导报, 2013, 15(01):123-129.YAN Huifeng, SHI Yi, LI Naihui, et al. Progress in Tobacco Potassium Nutrition[J]. Journal of Agricultural Science and Technology, 2013, 15(01):123-129.

[5]Louca S, Parfrey L W, Doebeli M. Decoupling function and taxonomy in the global ocean microbiome[J]. Science, 2016,353(6305):1272.

[6]王彦亭, 谢剑平, 李志宏. 中国烟草种植区划[M]. 北京：科学出版社, 2010：32-37.WANG Yanting, XIE Jianping, LI Zhihong. China Tobacco Planting area[M]. Beijing: Science Press, 2010: 32-37.

[7]Ofek M, Hadar Y, Minz D. Ecology of Root Colonizing, Massilia,(Oxalobacteraceae)[J]. Plos One, 2012, 7(7):e40117.

[8]Kerou M, Offre P, Valledor L, et al. Proteomics and comparative genomics of Nitrososphaeraviennensis reveal the core genome and adaptations of archaeal ammonia oxidizers[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,2016, 113(49):E7937.

[9]邢瑶, 孙泽东, 陈乐,等. 氮素形态对烟苗根系生长及碳、氮积累的影响[J]. 中国烟草科学, 2015, 36(5):13-18.XING Yao, SUN Zedong, CHEN le, et al. Effect of Nitrogen form on Root Growth and C and N Accumulation of Flue-cured Tobacco Seedlings[J]. Chinese Tobacco Science, 2015, 36(5):13-18.

[10]Cheng F, Peng X, Zhao P, et al. Soil Microbial Biomass, Basal Respiration and Enzyme Activity of Main Forest Types in the Qinling Mountains[J]. Plos One, 2013, 8(6):e67353.

[11]Shang C, Chen A, Chen G, et al. Microbial Biofertilizer Decreases Nicotine Content by Improving Soil Nitrogen Supply[J]. Applied Biochemistry & Biotechnology, 2016:1-14.

[12]李中民, 杨铁钊, 段旺军,等. 不同基因型烟草苗期对硝态氮和铵态氮吸收动力学特征研究[J]. 江苏农业科学, 2011,39(02):155-157.LI Zhongmin, YANG Tiezhao, DUAN Wangjun, et al. Research on kinetics characteristics of nitrate and ammonium uptaken by different genotypes tobacco in seedling stage[J]. JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES, 2011, 39(02):155-157.

[13]Kiba T, Kudo T, Kojima M, et al. Hormonal control of nitrogen acquisition: roles of auxin, abscisic acid, and cytokinin[J]. Journal of experimental botany, 2011, 62(4):1399.

[14]陈若星, 苏加坤, 王建兵,等. 土壤酶与微生物对烤烟生长和品质的影响[J]. 中国烟草学报, 2014, 20(3):73-78.CHEN Ruoxing, SU Jiakun, WANG Jianbing, et al. Effect of soil enzyme and edaphon on lfue-cured tobacco growth and quality[J].ActaTabacariaSinica, 2014, 20(3):73-78.

[15]王卫民. 烟草根皮层细胞质膜上内向K+通道的电生理特性及其调控[D]. 河南：河南农业大学, 2005.WANG Weimin. Electrophysiological Characterization and Regulation of Inward K+ Channel in the Plasmamembrane of Tobacco Root Cortex Cells[D]. Henan: Henan Agricultural University, 2005.

[16]张明发, 朱列书. 烤烟不同生育期供钾水平对叶片钾含量的影响[J]. 中国烟草科学, 2009, 30(1):23-25.ZHANG Mingfa, ZHU Lieshu. Effects of Potassium Rate in Different Growth Stages on Leaf Potassium Content of Flue-cured Tobacco[J]. CHINESE TOBACCO SCIENCE, 2009, 30(1):23-25.

[17]余建飞. 磷营养对烤烟上部叶生理指标及烤后烟化学成分的影响[J]. 安徽农业科学, 2015, 43(33):200-201.YU Jianfei. Influence of Foliage Spraying Phosphorus on Physiological Indexes in Upper Leaves and Chemical Composition in After Curing Tobacco Leaf[J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences, 2015, 43 (33):200-201.

[18]郑劲民, 查录云, 谢德平,等. 河南烟区土壤供钾特性与烟叶含钾量[J]. 烟草科技, 1994(5):29-32.ZHENG Jinmin, ZHA Luyun, XIE Deping, et al. Potassium of soil and tobacco leaves in Henan area[J]. Tobacco Science&Technology, 1994(5):29-32.

[19]戴勋, 王毅, 刘彦中,等. 不同钾肥追施量对烤烟K326生长及产质量的影响[J]. 中国烟草科学, 2009, 30(1):19-22.DAI Xun, WANG Yi, LIU Yanzhong, et al. Effects of Different Potassium Sidedressing Rates on Growth, Yield and Quality of Flue-cured Tobacco[J]. CHINESE TOBACCO SCIENCE, 2009,30(1):19-22.

[20]李静, 张锡洲, 李廷轩,等. 钾肥运筹对烤烟钾吸收利用的影响[J]. 植物营养与肥料学报, 2015, 21(04):969-978.LI Jing, ZHANG Xizhou, LI Tingxuan, et al. Effect of potash management on potassium absorption and utilization of fluecured tobacco[J]. Plant Nutrition and Fertilizer Science, 2015,21(04):969-978.

[21]樊芬, 刘泓翔, 王建波,等. 适期早栽和追肥前移对烤烟产质量的影响[J]. 湖南农业科学, 2016(10):32-36.PAN Fang, LIU Hongxiang, WANG Jianbo, et al. Effect of Proper Early Planting and Topdressing in Advance on Yield and Quality of Flue-cured Tobacco[J]. Hunan Agricultural Sciences, 2016(10):32-36.

[22]王同朝, 刘作新, 高致明,等. 分期追施钾肥对烤烟生长和品质的影响[J]. 河南农业大学学报, 2002, 36(4):348-351.WANG Tongchao, LIU Zhuoxin, GAO Zhiming, et al. Effects of applying potassium fertilizer at different stages on development and leaf quality of flue-cured tobacco[J]. JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL UNIVERSITY, 2002, 36(4):348-351.

[23]黄胜, 向金友, 程智敏,等. 追肥时间和基追肥比对云烟203产量质量的影响[J]. 农业科技通讯, 2012(07):99-101.HUANG Sheng, XIANG Jinyou, CHENG Zhimin, et al. Effects of topdressing time and fertilizer ratio among base and topdressing to the quantity and quality of Yunnan tobacco 203[J].BULLENIN OF AGRICULTURAL SCIENCE AND TECHNOLOGY, 2012(07):99-101.

[24]张明乾, 范建立, 郭传滨. 不同钾肥对烤烟主要化学成分的影响[J]. 山东农业科学, 2015, 47 (05):68-71.ZHANG Mingqian, FAN Jianli, GUO Chuanbin. Effects of Different Potassium Fertilizers on Main Chemical Components of Flue-cured Tobacco[J]. Shandong Agricultural Sciences, 2015,47(05):68-71.