苦豆子植株不同部位对家兔离体血液抗凝效果研究

2018-05-08赵红琼孟坤杰

畜牧与饲料科学 2018年3期

赵红琼，张丹，孟坤杰

（新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐 830052）

苦豆子（Sophora alopecuroides L.）属于豆科多年生草本植物，主要生长于荒漠和半荒漠区域的沙质土壤中，耐盐碱、耐干旱，其植株群落喜连片生长。苦豆子主要生物活性成分为生物碱，如苦参碱、槐果碱等，其提取液或生物活性成分具有影响中枢兴奋性、降血压、抗菌以及平喘、镇咳和祛痰等作用［1］。张丹等［2-3］研究证明，苦豆子植株的豆子、豆荚、豆叶和顶须醇提液具有不同程度抑制小鼠离体小肠运动的作用，而这些部位中有机物、干物质、粗蛋白、粗脂肪、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、钙和磷等主要营养成分的含量存在差异［4］。该试验旨在探究苦豆子植株的豆子、豆荚、豆叶和顶须对家兔离体血液的抗凝效果，以期为开发苦豆子在抗凝血方面的药用价值提供参考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物：家兔，雄性，4 只，（2.1±0.6）kg，购买于新疆医科大学实验动物中心。1 d饲喂2次（10：00 和 19：00 左右）家兔颗粒饲料（购买于新疆医科大学实验动物中心），水自由饮用。

1.1.2 试验药材：苦豆子植株的豆荚枝、嫩叶枝和顶端干死的顶须于秋天采集于新疆维吾尔自治区乌苏市四棵树镇棉田周边田埂。豆荚枝阴干后剥出豆子，同时留下荚壳；嫩叶枝用自来水冲洗3遍后晾干，剪下干叶留用；干死的顶须完全阴干后留用。

1.2 方法

1.2.1 苦豆子植株各部位醇提液原液的制备：将苦豆子植株阴干的豆子、荚壳、干叶和顶须分别用800 mL摇摆式中药粉碎机粉碎，然后用70%乙醇室温超声提取3次，旋转蒸发仪抽真空后浓缩至1 g生药1 mL药液，即1∶1生药醇提液的豆子、豆荚、豆叶和顶须的原液，高压灭菌后4℃保存备用［1］。

1.2.2 苦豆子植株各部位对离体血液抗凝效果检测：该试验采用平板血凝法测定凝血时间。首先，在6孔白瓷凝集板的孔中分别加入10 μL 0.9%氯化钠（抗凝阴性对照）、3.8%柠檬酸钠（抗凝阳性对照），以及豆子、豆叶、豆荚和顶须原液。然后，用一次性注射器采集家兔心脏血液2 mL（从血液进入注射器开始秒表计时），迅速将90 μL血液加入凝集板含药液各孔，轻轻混匀后用干净的竹牙签（每孔用一根牙签）不停挑起血液，观察是否有凝血丝（纤维蛋白）出现，当第一次观察到有凝血丝出现的时候读取秒表时间，计为凝血时间。在血液离体后15 min、30 min和60 min时间点持续观察是否有凝血丝出现，如果依然无血丝出现，即为未凝固。该检测在20℃室温进行，用4只家兔进行重复。

1.2.3 数据统计：凝血时间结果用平均值±标准误（n=4）表示。不同药液处理之间凝血时间差异显著性分析用SPSS 15.0软件进行单因素方差分析，P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著。

2 结果和分析

凝集板各孔加苦豆子植株各部位醇提液原液后离体家兔血液凝血时间见表1。由表1可知，添加3.8%柠檬酸钠（抗凝阳性对照）孔血液在观察时间内未出现血液凝固现象，而0.9%氯化钠（抗凝阴性对照）孔血液凝固时间为（282±11）s。添加豆子孔血液在观察时间内也未出现血液凝固现象，而添加豆叶、豆荚和顶须孔凝血时间均极显著慢于0.9%氯化钠孔（P＜0.01），苦豆子植株这3个部位凝血时间由快到慢顺序为：顶须＞豆荚＞豆叶。

表1 苦豆子植株各部位醇提液对家兔离体血液凝血时间的影响

3 讨论

该试验结果表明，苦豆子植株的豆叶、豆荚和顶须醇提液均具有延缓家兔离体血液凝固时间的作用，且其豆子具有抗凝血作用。目前尚未见对苦豆子植株抗凝血效果的有关报道。机体血液凝固包括凝血酶原激活物的形成、凝血酶原变为凝血酶和纤维蛋白原变为纤维蛋白3个基本过程，其中，VK和钙离子在血液凝固的过程中发挥重要作用［5］。一般来说，药物抗凝机理一般包括沉淀或螯合血液凝固多步骤需要的钙离子，例如柠檬酸钠、草酸钾和乙二胺四乙酸二钠等；或者是颉颃VK的作用，如双香豆素。苦豆子植株成分研究目前主要集中在其生物碱种类和含量研究［6］，或者其营养成分（包括矿物质含量）的研究［4，6］。该试验中，苦豆子植株各部分具有延缓血液凝固或抗凝血作用，必定是其中某些有效成分参与阻断血液凝固的这3个基本过程。据《新疆维吾尔药志》记载，苦豆子茎叶含草酸盐棱晶［1］。同时，香豆素类似物也普遍在豆科植物中含有。因此推测，苦豆子植株各部分具有的延缓血液凝固或抗凝作用可能同含有这类抗凝物质有关，且将来有必要开展苦豆子植株中与影响血液凝固有关成分的研究。

该试验结果表明，相对苦豆子植株的豆叶、豆荚和顶须，其豆子具有更加强的抗凝血作用。陈晓丽等［6］采用等离子体原子发射光谱法研究了不同生育期（营养期、现蕾期、盛花期、盛荚期和成熟期）苦豆子根、茎、叶和种子中常量、微量矿质元素含量变化，发现这些元素含量因生育时期不同在植株不同部位存在明显差异。苦豆子植株部位不同其抗凝血功效存在差异，提示其植株不同部位抗凝血活性成分含量也存在差异。同样，冷晓红等［7］采用HPLC法对5—7月中不同物候期苦豆子植株地上部分主要生物碱的量进行监测，发现苦豆子中不同生物碱的量随物候期呈现不同规律的变化。张福宝等［8］用指纹图谱法检测发现苦豆子叶和茎不同采摘期化学成分存在差异。该试验使用的苦豆子植株采集于秋季，属于苦豆子的成熟期，那么不同生育期，苦豆子植株同一部位的抗凝血效果是否存在差异还有待于进一步探究。同时，针对苦豆子的体内抗凝作用及其抗凝机理也有待于进一步深入开展。