共聚焦激光显微镜扫描在面部毛囊蠕形螨检测中的应用

吴曹英 邹云敏 于世荣 张德志 康晓静

共聚焦激光显微镜(confocal laser scanning microscopy，简称CLSM)是一种新的皮肤成像技术，因其具有实时性、无创性、可重复性、高分辨率等特点，国内外学者利用CLSM对皮肤色素障碍性皮肤病[1]、皮肤肿瘤[2]、炎症性疾病[3]等多种疾病进行观察，并且对某些疾病治疗前后进行对比疗效观察[4]，目前已广泛应用于临床皮肤科的检测中。毛囊蠕形螨又称毛囊螨、螨虫、毛囊虫，常栖居在人的毛囊及皮脂腺，多在面部，尤其是皮脂腺分泌旺盛的部位，如鼻部、颊部、额部、下颌等。少数的虫体感染并不引起症状。但由于其虫体繁殖快，自身代谢产物及虫体崩解物刺激可引起局部炎症反应，导致多种面部皮肤病的发生，如酒渣鼻样皮炎、痤疮等。在CLSM中蠕形螨表现为毛囊漏斗部环状结构(蠕形螨的横断面)[5]。Sattler首先将CLSM用于毛囊蠕形螨的检测和计数[6]，并对酒渣鼻患者和正常人群面部蠕形螨计数进行比较，提示酒渣鼻患者面部蠕形螨数量明显高于正常人群。但并未将CLSM检测结果与镜检结果相比较。直接镜检观察到虫体是检测毛囊虫的金标准，但检测多个部位过程繁琐，且不能清晰地观察每个毛囊的感染情况，故本研究将直接镜检结果与CLSM结果相比较，以期观察CLSM在面部蠕形螨检测中的优势。

1 对象与方法

1.1 对象 选取近4个月就诊于我院门诊的患者180例，其中男29例，女151例，年龄15～80岁，平均(38±13.18)岁；汉族110例，维吾尔族45例，回族17例，哈萨克族8例。临床考虑酒渣鼻样皮炎93例，痤疮56例，脂溢性皮炎31例。

1.2 方法 分别于两侧鼻翼旁、鼻尖部、下颌部、额部共五个部位进行CLSM检查，每个部位进行一个4×4 mm Block扫描(约30～100个毛囊，平均51个毛囊)，观察受累及的毛囊数目。并记录毛囊蠕形螨的数量，每个毛囊≥4只以上记录为强阳性，1～3只记录为阳性。这些患者24小时不洗脸不外用护肤产品，带清洁手套挤压鼻翼两侧皮肤，取挤压出的分泌物置于载玻片上，滴石蜡油后直接显微镜下观察，记录阳性结果。

1.3 检测指标 CLSM蠕形螨阳性表现为：在扩张的毛囊内有一个或多个环形、椭圆形、锥形灰色或高折光结构，周围有透明环(图1)。镜检阳性：视野下可见一个或多个蠕形螨虫体(图2)。

1.4 统计学方法 采用SPSS 11.0统计软件进行分析，采用卡方检验。P<0.05为差异有统计学意义。

图1 蠕形螨在CLSM检查中呈多种形态表现，红色数字标记个数

图2 镜检螨虫阳性可直接观察蠕形螨虫

2 结果

180例患者中CLSM蠕形螨检测阳性124例，其中强阳性38例(21%)。见表1。

表1 两种检测方法的阳性结果比较

注：两种方法比较，χ2=3.9，P<0.05

4 讨论

几乎所有人面部都存在蠕形螨，健康人皮肤表面蠕形螨≤5个/cm2。少量蠕形螨并不会引起临床症状，但当人们发生面部疾病，同时又镜检出蠕形螨，往往会将两者联系起来，但此时的蠕形螨是正常寄生还是致病原因就容易混淆。传统的检测方法是直接镜检，而且阳性率不低，但是这个结果并不能告知我们螨虫的感染程度及毛囊的受累情况。

在本研究中，对面部蠕形螨多发部位如额部、两侧鼻翼旁、下颌、鼻部进行多点检测，并每个点扫描4 mm×4 mm Block，可同时观察到多个毛囊的受累情况，并同时记录毛囊蠕形螨的计数(取数量最多者记录)，其阳性率明显高于镜检取材结果。但由于直接镜检多点取材观察结果记录较繁琐，且蠕形螨数量并不能反映每个毛囊的感染情况，故无法进行阳性、强阳性分组。这很好的说明了CLSM能简便直观的观察毛囊蠕形螨这一特点。不过没有哪一项研究明确表明单位面积蠕形螨达到某一确定数量会引起皮肤疾病，本研究中人为的将CLSM检测结果分为阳性、强阳性，其目的在于提示CLSM在蠕形螨的检测中有更清晰、可计数的优势。而蠕形螨计数呈强阳性是否会导致面部疾病，则需要更多的临床数据支持。

另外CLSM还能监测蠕形螨的治疗效果。有研究[7]对8例患者治疗前后进行CLSM检测，治疗前均有10%以上毛囊感染，治疗后有50%患者症状改善且蠕形螨检测完全消失，症状未改善的病例蠕形螨也没有消失。他们认为直接镜检阴性而CLSM阳性的病例可能是蠕形螨的数量较少或需要多点取材，而CLSM无论蠕形螨多少，可以直观的观察到,并且可以多点重复检查，减少漏诊。不过也有学者提出[8]，CLSM只能观察毛囊漏斗表面200～300 μm的范围，更深的蠕形螨CLSM无法观察，而且直接镜检蠕形螨已经实行数十年，技术成熟，易操作，而CLSM仪器昂贵，检查费用相对较高。但是CLSM以一种新的蠕形螨检查方法，且较直接镜检更敏感，同时具有无创性、可重复性、可计数等优势，可广泛运用于临床检验中。

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[5] 刘华绪,林燕,于世荣,等.反射式共聚焦显微镜皮肤病图谱[M].人民卫生出版社,2013.31.

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[8] Lacey N, Forton FMN, Powell FC.Demodex quantification methods:limitations of confocal laser scanning microscopy[J].Br J Dermatol，2013，3：168-212.