正交实验优选中药复方养阴生肌妇炎栓的提取工艺*

郭 敏 ，徐思雨，顾万红，古秋莉△

1甘肃省中医药研究院，甘肃 兰州 730050；2甘肃省中医院

中药复方养阴生肌妇炎栓以甘肃省中医院院内制剂养阴生肌散(甘药制字Z04000835)处方为依据，通过提取工艺研究，溶媒筛选，基质配比研究及制剂工艺考察，研制出便利、高效的用于治疗宫颈炎、阴道炎等妇科疾病的养阴生肌妇炎栓剂[1]。

养阴生肌妇炎栓主要由黄柏、龙胆草、雄黄、青黛等药物组成，龙胆草作为处方中不可缺少的组成部分，具有清热燥湿，泻肝胆火的功效，龙胆苦苷性质稳定，为其中的指标成分，故选择龙胆苦苷在混合提取物中的含量为考察指标，采用正交实验法，优选中药复方养阴生肌妇炎栓的最佳提取工艺[2-4]。

1 材料

1.1 仪器 美国Waters高效液相色谱仪(包括：Waters 2487紫外检测器；Waters 1525自动进样器)；旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；电子分析天平(上海天平仪器厂)；超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)；电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂)。

1.2 试药 龙胆苦苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号：11070-200510)；甲醇、乙腈为色谱纯；水为重蒸水；所用其他试剂均为分析醇。实验所用药材由甘肃省中医院药学部提供。

2 方法与结果

2.1 龙胆苦苷的含量测定[5-8]

2.1.1 色谱条件 色谱柱：Shim-pack VP-ODS(150 mm×4.6 mm)；流动相：水 - 乙腈(80∶20)；流速：1.0 mL/min；检测波长：254 nm；进样量：10 μL；柱温：25.0℃；外标法。理论塔板数按龙胆苦苷标准品计算不得低于3 500。

2.1.2 溶液的制备

2.1.2.1 对照品溶液的制备 取在五氧化二磷减压干燥器中放置24小时的龙胆苦苷对照品适量，精密称定，用甲醇配制成浓度为0.8 μg/mL的对照品溶液。

2.1.2.2 供试品溶液的制备 取约1.0g提取所得浸膏，精密称定，置50 mL烧杯中，加甲醇适量，超声10分钟，放冷至室温，过滤至25 mL的容量瓶中，再用甲醇定容至刻度，摇匀。取8 mL移至25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，0.45 μm 微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

2.1.3 测定方法 精密吸取对照品与供试品溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪，得到色谱峰面积，根据外标一点法，计算样品中龙胆苦苷的含量，色谱图见图1。

图1 龙胆苦苷含量测定HPLC色谱图

2.2 正交实验设计

2.2.1 因素水平确定 采用正交实验法对提取工艺进行优选，根据文献报道[2-4]，以提取时间(A)、乙醇浓度(B)、溶剂容量(C)为试验因素，每个因素设计3个水平，应用L9(34)正交表安排实验，见表1。

表1 提取方法因素水平

2.2.2 正交实验 正交实验结果见表2。

表2 正交实验结果

2.2.3 方差分析 方差分析结果见表3。

表3 方差分析结果

由表2—3可知，以浸膏得率为考察指标，最佳提取条件为A3B3C1；以龙胆苦苷含量为考察指标，最佳提取条件为A3B2C2。综合各提取条件，同时考虑到实际操作的简单易行，确定最佳提取工艺为乙醇浓度为80%，提取时间为5小时，溶剂量为8倍量。

2.3 正交实验结果验证 根据处方配比，取3批组方药材，按上述所选最佳提取工艺，分别测定出膏率及龙胆苦苷的含量，结果表明该工艺达到了提取条件优化的目的，见表4。

表4 正交实验结果验证

3 讨论

养阴生肌散由我院中医专家根据古方和临床实践配伍而成，在临床使用20余年，疗效确切。由于剂型上的缺陷限制了临床需要，而其制备工艺简单又无质量标准，因此不符合相关法律法规的要求，需要按国家新药申报的要求对其进行科学系统地二次开发。

索氏提取时溶剂的量对提取效果影响不大，考虑到实际生产成本，我们选择溶剂量以8倍量代替10倍量，而且各味药的提取效果均无明显改变。

[1]李喜香，刘效栓，张小华，等.养阴生肌散急性毒性及全身过敏性实验研究[J].西部中医药，2014，27(1)：29-31.

[2]陈长勋，刘占文，孙峥嵘，等.龙胆苦苷抗炎药理作用研究[J].中草药，2003，34(9)：814-816.

[3]王北婴，李仪奎.中药新药研制开发技术与方法[M].上海：上海科学技术出版社，2001：788-808.

[4]赵瑞芝，梁伟杰，丘小惠.龙胆药材中龙胆苦苷的提取工艺研究[J].中国药房，2005，16(12)：956-957.

[5]赵冰璐，姜连阁，赵亚芹.薄层扫描法测定龙胆中龙胆苦苷的含量[J].中医药信息，2000，17(3)：69.

[6]陈二林，黄艳辉，刘效栓，等.养阴生肌散中龙胆苦苷的HPLC测定[J].西部中医药，2013，26(10)：24-26.

[7]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2015：96.

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