女贞子超微粉对肉仔鸡抗氧化和免疫功能的影响

赵香菊 王 留 （商丘职业技术学院 河南 商丘 476100）

女贞子是一味临床常用的补益类中药，又名冬青子，为常绿乔木女贞的干燥成熟果实，具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤和提高免疫力的功能。女贞子或女贞子提取物作物饲料添加剂应用于动物生产，提高动物生产性能，增强机体免疫力和抗氧化应激能力，作为合成抗氧化剂的天然替代物在动物实验和动物生产中已有很多报道[1-4]。在这些应用中，大多是以女贞子粗粉碎制剂使用，存在适口性差、吸收率低、药效不确定等缺点。采用现代中药制剂技术中的超微粉碎技术，能够将生药材的粒径粉碎到微米级别，细胞破壁率达到96%以上，提高中药有效物质的溶出度和药效学活性[5-7]。将女贞子加工成超微粉后是否影响女贞子药学活性尚未见报道，本试验在肉仔鸡日粮中添加0.5%的女贞子超微粉，通过测定肉仔鸡血清中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量以及外周血淋巴细胞转化率，研究女贞子超微粉对肉仔鸡抗氧化功能和免疫功能的影响。为女贞子超微粉在肉鸡的生产应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 722型可见光分光光度计，上海晶科仪器有限公司；二氧化碳培养箱，上海姚氏仪器设备厂；台式冷冻离心机，湖南赫西仪器装备有限公司；倒置显微镜，上海光学仪器厂；酶标仪，上海拜格科技公司。氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)，南京建成生物工程公司。鸡外周血淋巴细胞分离液，上海研谨生物科技公司。女贞子超微粉、黄芪多糖购于郑州伊尹植物原料有限公司。

1.2 试验动物与分组 60只1日龄AA肉仔鸡购于河南省新郑市银龙孵化禽业有限公司，运回后适应性饲养7d，随机分为分成3组，每组20只。空白对照组饲喂基础日粮，女贞子超微粉组在基础日粮中添加0.5%女贞子超微粉，黄芪多糖组在基础日粮中添加0.5%黄芪多糖，基础日粮参照NRC肉鸡营养标准配制，肉仔鸡分笼饲养，自由采食和饮水，按正常免疫程序常规免疫。

1.3 血样采集与处理 42d时每组随机抽取5只鸡，翼下静脉采血5ml，分装在两个试管中。一个试管3ml不加抗凝剂，室温下自然凝固后，3000转/分离心分离血清，分装于1.5ml指形管，-20℃保存，用于抗氧化指标的测定。一个试管2ml添加抗肝素钠抗凝，分离外周血淋巴细胞，用于免疫功能的测定。

1.4 抗氧化指标的测定 总抗氧化能力(T-AOC)采用化学比色法测定，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性采用二硫代二硝基苯甲酸法测定，超氧化物歧化酶(SOD)活性采用化学比色法测定，丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥法测定，操作过程严格按照试剂盒说明书进行。

1.5 外周血淋巴细胞转化率测定 外周血淋巴细胞转化率采用MTT法[8]测定。

1.6 试验数据处理 试验数据用平均值±标准差表示，采用SPSS18.0 统计处理软件进行方差分析。

2 结果

2.1 对肉仔鸡抗氧化指标的影响 由表1可知，日粮中添加0.5%女贞子超微粉能够提高肉仔鸡血清中T-AOC、GSH-Px、SOD的活性和降低MDA含量，与只饲喂基础日粮的空白对照组相比差异显著(P＜0.05)，与日粮中添加0.5%黄芪多糖粉的黄芪多糖组相比差异不显著(P＞0.05)。

2.2 对肉仔鸡淋巴细胞转化率的影响 由表1可知，日粮中添加0.5%女贞子超微粉能够提高肉仔鸡外周血淋巴细胞转化率，与只饲喂基础日粮的空白对照组相比差异显著(P＜0.05)，与日粮中添加0.5%黄芪多糖粉的黄芪多糖组相比差异不显著(P＞0.05)。

表1 女贞子超微粉对肉仔鸡抗氧化指标、淋巴细胞转化率的影响

3 讨论分析

3.1 对肉仔鸡抗氧化指标的影响 在正常的动物有机体内存在完整的氧化-抗氧化反应体系，包括脂质过氧化产物MDA等氧化剂以及T-AOC、SOD、GSH-Px、等抗氧化酶类和维生素C、类胡萝卜素等抗氧化剂。因此SOD、GSH-Px等抗氧化酶活性和MDA等自由基含量的变化反映机体氧化-抗氧化系统的变化情况。GSH-Px能够清除机体代谢过程中产生的活性氧，SOD能够调节机体氧化-抗氧化系统的平衡，血清内GSH-Px和SOD活性间接反映机体清除自由基的能力。MDA是主要的脂质过氧化产物，能够氧化细胞膜中多不饱和脂肪酸，破坏细胞膜的完整性，导致细胞膜的严重损伤，进而影响动物体的免疫功能与正常的代谢功，血清内MDA水平的降低反映机体抗氧化功能的降低。邓文琼等[9]研究显示，穿心莲超微粉能够增强三黄鸡的抗氧化功能。本试验中，与只饲喂基础日粮的空白对照组相比，日粮中添加0.5%女贞子超微粉能够提显著高肉仔鸡血清中T-AOC、GSH-Px、SOD的活性和降低MDA含量，说明女贞子超微粉能够调整肉鸡的氧化-抗氧化反应体系，提高机体的整体抗氧化功能。

3.2 对肉仔鸡免疫功能的影响 动物的免疫功能由免疫系统来执行，包括细胞免疫系统和体液免疫系统。细胞免疫系统主要由T细胞参与完成免疫反应，T细胞在抗原或细胞分裂素的刺激下分化为效应T细胞，直接杀灭感染的病原体或通过分泌免疫因子清除感染。体液免疫系统主要由B淋巴细胞参与完成免疫反应，B细胞在抗原或细胞分裂素的刺激下分化为浆细胞，分泌各种抗体以对抗病原感染。T淋巴细胞为动物体的主要免疫细胞之一，受到有丝分裂原刺激后发生转化，淋巴细胞转化率的高低常作为机体判定淋巴细胞的功能状态与机体免疫状况指的标。邓文琼等[9]研究显示，穿心莲超微粉能够增强三黄鸡的免疫功能。本试验中，与只饲喂基础日粮的空白对照组相比，日粮中添加0.5% 女贞子超微粉能够显著肉仔鸡外周血淋巴细胞转化率，说明女贞子超微粉能够调整调整淋巴细胞的功能状态，提高机体的整体免疫功能。

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