藏羔羊小反刍兽疫苗早期免疫效果检测与分析

刘文清 铁富萍 尕卓玛 河生德 （青海省海晏县畜牧兽医站 812200）

小反刍兽疫(Peste des peits ruminants，PPR)，又称羊瘟、小反刍兽瘟，是由副粘病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbolivirus)的PPRV病毒引起的高度接触性传染病，主要感染山羊、绵羊、羚羊、美国白尾鹿等家养和野生小反刍动物，山羊高度易感，绵羊次之，牛呈亚临床感染，以持续发热、口炎、腹泻、肺炎为主要特征[1]。易感羊群发病率可高达90%～100%，在严重情况下病死率能够达到50%～100%[2]。OIE将PPR列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病，而疫苗免疫是防控PPR最有效的措施[3]，我县是高原型藏羊的主产区，PPR疫苗每年进行注射和效果检测，但对藏羔羊早期免疫的效果如何，资料报道较少。为此，笔者进行了藏羔羊早期免疫效果检测，为完善藏羊免疫程序提供实验依据，

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 藏羔羊 七四牧场地处海晏县哈勒景地区，年存栏高原型藏系羊五万余只，年产羔羊3万余只。藏羊自然放牧饲养，实行统一管理模式，即公母羊分群饲养、不同年龄羊只单独组群、统一配种、统一销售。藏母羊于2017年4月15日开始产羔，5月15日产羔结束，至9月15出栏，藏羔羊年龄为4～5月龄。

1.1.2 疫苗 小反刍疫苗由新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生产，生产批号为：2016046，由县畜牧兽医站统一于2017年4月份发放，牧场兽医站自行保存在冷冻库内。5月26日(产羔结束10d)由3个大队各小队统一组织人力，在牧场兽医人员的指导下，按规定剂量(1ml/只)要求进行预防注射，3d内全部完成了疫苗注射工作，注射疫苗时羔羊为15～45日龄。

1.1.3 检测血清 藏羔羊血液由七四牧场兽医站分别采自3个大队的9户不同母羊群羔羊，每批次采集450份，3个批次共采集1350份，血清由海晏县畜牧兽医站统一分离并冷藏保存。

1.1.4 检测试剂及其它设备 检测试剂购自深圳市康百得生物科技有限公司。试剂批号为：20170323、20170725。ELX800酶标仪，PSH-200生化培养箱、单道或多道加样器等为县兽医实验室自备。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 将待检血清样品预先在包被板按1：100稀释，然后向ELISA反应板样品孔中每孔加入样品稀释液100μl；阳性对照、阴性对照及空白对照各2孔，每孔加样100μl，盖好封膜板后37℃生化培养箱反应30min。用洗涤液洗 3次，除空白对照外，其余每孔加酶标结合物100μl，盖好封膜板后37℃反应30min。用洗涤液洗3次，底物液和显色液(提前等量混匀)每孔加入100μl，盖好封膜板后37℃反应15min。最后，每孔加入终止液50μl，并在450nm波长读取OD值。

1.2.2 判断标准 阴性对照孔的OD平均值≤0.20，阳性对照孔的OD值≥0.30，试验数据方可有效。计算每个样品的百分比S/P(样品OD值/阳性对照平均OD值)，若S/P≥0.20为合格； S /P∠ 0.2为不合格；样品OD值为零判断为无抗体。

1.2.3 羊群管理情况 详细了解羊群饲养管理、产羔、PPV疫苗注射等情况，为效价结果分析提供基础资料。

2 结果

附表 抗体效价检测结果

3 讨论

（1）结果表明，放牧藏羔羊小反刍兽疫平均免疫合格率为34.3%，不合格率64.5%，没有注射小反刍兽疫苗的占1.2%，反映出本县七四牧场藏羔羊小反刍兽防治效果不理想，没有达到国家规定的合格率达到70%以上的要求。从批次来看，第一批次检测的3户藏羔羊合格率达到了76.5%，而后二次检测的6户合格率不到15%，这表明疫苗在保存过程中没有出现问题，但问题主要出现在三个大队在注射疫苗的过程中，有些队或牧户疫苗注射认真扎实，而有些队没有做到严要求，是导致免疫效果不佳的原因之一。（2）资料报道，湖羊在90日龄以后PPR疫苗免疫的效果明显优于90日龄之前，最佳免疫时间应该在90日龄之后，这与国外相关研究结果基本一致[4]。国外相关报道显示PPR母源抗体在羔羊3～4月龄下降到保护水平以下[4-]。七四牧场藏生产母羊于2016年5月中旬进行了PPV疫苗注射，而2017年产羔羊在注射PPR疫苗时年龄只有10～40d，是否由于藏羊母源抗体的存在而影响了羔羊免疫效果，仍需要进一步的研究。（3）由于免疫效果差，七四牧场所有羔羊又重新进行了小反刍兽疫苗注射，即增加了劳动力，又浪费了免疫药物，无形中造成了不必要的经济损失。建议牧场调整免疫程序，羔羊年龄达到90日龄后(每年7月15日)进行注射，同时要加大疫苗注射的监管力度，按相关要求做到注苗不漏针，不漏畜。

[1]李景玉,高玉竹,李元果等.小反刍兽疫研究进展[J].中国畜牧兽医,2014, 41(10)： 274-279.

[2]宋建德,袁丽萍,刘陆世等.全球小反刍兽疫流行状况和防控策略[J].中国动物检疫, 2015, 32(7)： 8-12.

[3]信爱国,杨仁标,向文彬.小反刍兽疫研究进展[J].中国预防兽医学报,2003, 25(2)： 152-154.

[4]徐雅萍,邱寒峰,俞乾挺等.小反刍兽疫疫苗对不同日龄湖羊的免疫效果研究[J].中国兽医预防学报, 2016, 38(8)： 646-648.