基质辅助激光解析电离飞行时间谱检测在临床致病真菌鉴定中的应用

刘 威

（营口市老边区疾病预防控制中心微生物检验，辽宁 营口 115005）

真菌是临床常见的致病菌之一，随着广谱抗生素的不断更新换代和免疫抑制剂药物的不断应用及支持治疗手段的不断进步，临床真菌感染的患者越发增多，目前实验室传统的真菌镜检和培养是鉴定真菌常用的方法，但是由于其培养时间过长、操作过于繁琐、检验人员的水平参差不齐对真菌的鉴定工作造成了一定的影响，延误了临床医师对疾病的治疗错过了疾病的最佳监控时间[1]。基质辅助激光解析电离飞行时间谱检测（matrix assisted laser desorption ionization time of flight spectrum，MALDI-TOF），是一类新兴的真菌检测技术，近年来该技术被不断地证实在细菌鉴定领域有着准确、快速、经济的优势，被越来越多的医院和防控中心所应用，从一定程度上避免了病情的延误，减轻了患者的经济负担[2]。我疾控中心应用不同的真菌检测技术检测真菌类型，旨在找出简便易行、检测率高的检测方法，指导临床治疗和疾病的防控，报道如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源：选自2015年4月至2016年4月于营口市疾控中心分离的真菌菌株100珠，采用信封法随机分为试验组和对照组，试验组50例，对照组50例。

1.2 Vitek2全自动微生物鉴定系统鉴定：取真菌菌液转移种植到沙堡弱培养基，将做好标记，置于37 ℃的培养箱静置培养2天后取出，将真菌于试管中调节浊度至2，应用VITEK2全自动细菌鉴定设备对培养板的细菌进行鉴定。

1.3 基质辅助激光解析电离飞行时间谱检测：取真菌菌液转移种植到沙堡弱培养基，将做好标记，置于37 ℃的培养箱静置培养2 d后取出，将真菌于试管中调节浊度至2，后将菌液涂抹靶点中心，加入VITEK MS-FA和VITEK MS-CHCA 基质液待试剂干燥后应用VITEKMS 仪器进行鉴定。当试验组和对照对真菌检验结果不一致时，将对真菌菌落应用DNA序列分析：应用真菌ITS2序列扩增和PCR产物测序的方法进一步分析真菌的种类[3]。

1.4 观察指标：观察试验组的真菌鉴定结果、对照组的真菌鉴定结果，计算两种鉴定方法的准确性。

1.5 统计学分析：采用统计学软件SPSS19.0进行分析，计数资料采用（±s）表示，两组间比较采用卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

试验组（VTITEK MS检测）发生鉴别错误的例数为4例，准确率为92%，对照组（VITEK- 2机器检测）发生鉴别错误的例数为5例，准确率为90%，试验组和实验室的真菌检测准确率比较没有统计学差异（P＞0.05），说明两组的真菌检测准确率相当，见表1。

表1 两组实验结果

3 讨 论

基质辅助激光解析电离飞行时间谱检测（matrix assisted laser desorption ionization time of flight spectrum，MALDI-TOF）可以对真菌做出迅速的检测，具有操作容易、价格低廉、准确率高、检测快速等优点。一般的真菌培养需要多种培养基和要求鉴定人员具有一定的工作经验才能做出准确的判断，并且一般培养干预鉴定结果的因素较多，并且耗时较长，对于少见的真菌检定率极低[4]。近年来基质辅助激光解析电离飞行时间谱检测迅速发展，给临床和疾病防控工作带来了许多便捷。本文观察了基质辅助激光解析电离飞行时间谱检测和VITEK 2机器检测在真菌鉴定中的准确性，结果表明试验组（VTITEK MS检测）发生鉴别错误的例数为4例，准确率为92%，对照组（VITEK 2机器检测）发生鉴别错误的例数为5例，准确率为90%，两组真菌检测准确率比较没有统计学差异（P＞0.05），说明两组的真菌检测真确率相当。

[1] 张超,廖万清.基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在病原真菌检验中的应用进展[J].中国真菌学杂志,2012 ,7(5):312-313.

[2] 何英,陆学东.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术及其在临床微生物鉴定中的应用[J].中华检验医学杂志,2011,34(10):881-888.

[3] 张明新,朱敏,王玫,等.应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定常见细菌和酵母菌[J].中华检验医学杂志,2011,34(11):988- 992.

[4] 姜长宏,龙军,华夏.基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪在侵袭性真菌感染病原真菌鉴定中的应用[J].实用医学杂志,2015,31(17):2902.