基于胶体金免疫层析法快速筛查博罗县水产品中的药物残留

梁彬霞，郭荷梅，陈冠礼，李爱群

（1.博罗县农产品质量安全监督检测中心，广东惠州 516100；2.罗阳镇农产品质量安全监督检测站，广东惠州 516100）

随着水产养殖业的快速发展，我国水产业的国际地位也在逐步提升，但水产品质量安全问题也越来越受关注，水产品质量安全事件也时有发生，它直接关系到消费者身体健康，以及生产者和经营者的利益，甚至影响到社会稳定[1]。目前，水产品药物残留超标是危害水产品质量安全的主要因素之一，其具有代表性的药物残留种类包括硝基呋喃类、氯霉素、孔雀石绿等[2-3]。因此，如何加强水产品质量安全监控是我国目前面临的最重要的问题。

博罗县地处珠三角，是惠州市淡水养殖面积最大的县区，全县池塘养殖总面积近9 380 hm2，主要以草鱼、鲢鱼、鳙鱼、罗非鱼、鲫鱼养殖为主，是珠三角淡水养殖水产品的主要产区之一。胶体金免疫层析技术是基于膜的检测方法，具有特异性强、稳定性好、操作快捷简便、定性或半定量的特点，近年来常被广大基层检验人员用于现场检测[4-8]。利用胶体金免疫层析快速检测法对全县农贸市场和各镇主要养殖水产品进行药残测定，通过测定对全县水产品的安全性进行评价，为建立适用于全县水产品的质量安全检测体系，促进全县水产养殖向健康、安全、无公害的方面发展，提高消费者对全县水产品质量安全的信心和水产养殖业的发展提供借鉴和参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试样品

检测样品来源于农贸市场和全县各镇养殖基地，将抽取的样品带回实验室，样本去皮与脂肪，取每份样品的可食部分约100 g，用组织捣碎机充分绞碎、混匀，装入样品袋，标明标识，冷冻保存，备用。

1.1.2 试剂

胶体金快速检测试剂盒（包括胶体金快速检测试板、各种试剂）。

1.1.3 仪器

LC-2010型液相色谱仪、电子天平、移液器、均质机、水浴振荡机、全自动氮吹仪、离心机等。

1.2 方法

1.2.1 样品前处理

（1） 孔雀石绿（MG）。将样本解冻至室温，称取3±0.05 g均质物于15 mL离心管中；加入2 mL提取剂A，再加入1瓶提取剂B（5 mL），振荡3 min，在室温（20～25℃） 下以转速4 000 r/min离心5 min。取2 mL上层有机相至5 mL离心管中，加入100 μL氧化剂，振荡混匀后，静置1 min，于50～60℃水浴中用氮气（或空气） 吹干；然后加入0.3 mL缓冲液振荡混匀20 s，待检。

（2） 呋喃唑酮代谢物（AOE）。将样本解冻至室温，称取3±0.05 g均质物至50 mL离心管中。依次加入4 mL蒸馏水、0.5 mL试剂A和0.6 mL衍生化试剂，振荡混匀5 min，在65℃水浴中孵育30 min。依次加入1 mL试剂B、0.4 mL试剂C和1瓶提取剂（6 mL），振荡混匀5 min。在室温（20～25℃） 下以转速4 000 r/min离心5 min，取3 mL上层有机相至5 mL离心管中，在50～60℃水浴中用氮气吹干。取1 mL净化剂溶解干燥物，再加入0.5 mL试剂D颠倒混匀10～15次，在室温下（20～25℃）以转速4 000 r/min离心2 min，待检。

（3） 呋喃西林代谢物（SEM）。将样本解冻至室温，称取3±0.05 g均质物至50 mL离心管中。依次加入4 mL蒸馏水、0.5 mL试剂A和0.6 mL衍生化试剂，振荡混匀5 min，在65℃水浴中孵育30 min。依次加入1 mL试剂B、0.4 mL试剂C和1瓶提取剂（6 mL），振荡混匀5 min。在室温（20～25℃） 下以转速4 000 r/min离心5 min，取3 mL上层有机相至5 mL离心管中，在50～60℃水浴中用氮气吹干。取1 mL净化剂溶解干燥物，再加入0.5 mL试剂D振荡混匀，在室温下（20～25℃） 以转速4 000 r/min离心2 min，待检。

（4） 氯霉素（GAP）。将样本解冻至室温，称取4±0.05 g均质物至50 mL离心管中。加入1瓶提取剂（5 mL），振荡混匀5 min，在室温（20～25℃） 下以转速4 000 r/min离心5 min。取上层有机相全部转移至5 mL离心管中，在50～60℃水浴中用氮气吹干。取1 mL净化剂溶解干燥物，再加入0.3 mL缓冲液振荡混匀，在室温下（20～25℃） 以转速4 000 r/min离心2 min，待检。

1.2.2 快筛的判定方法

测呋喃唑酮类代谢物、呋喃西林代谢物、氯霉素时，用移液器吸取待测液下层液体80 μL至加样孔，静置，按照规定时间内读取结果。

测孔雀石绿时，用移液器吸取待检液体80 μL至微孔中充分混匀，静置2 min，然后全部滴加至检测卡加样孔，静置，按照规定时间内读取结果。

结果判读示意图见图1。

图1 结果判读示意图

1.2.3 符合性试验[9]

对经试剂卡初筛、液相色谱确认的氯霉素、孔雀石绿、呋喃类代谢物等的阳性样品和阴性样品（各1份），按照1.2中各项目快筛方法分别进行测定，每个样品做6次平行，计算检出率，比较与原测值的符合性情况。

2 结果与分析

2.1 符合性试验

通过符合性试验，比较与原测值的情况，结果表明测试卡阳性样品的假阴性率与阴性样品的假阳性率均为0；检测限能达到：氯霉素≤0.3 μg/kg，孔雀石绿≤2 μg/kg，呋喃西林代谢物≤1 μg/kg，呋喃唑酮代谢物≤1 μg/kg，快检测试结果与样品LC测定结果一致，符合国家规定的水产药残标准。

符合性试验结果见表1。

表1 符合性试验结果

2.2 水产药物残留情况分析

2016年10月至2017年10月，博罗县农产品质量安全监督检测中心抽查了全县各农贸市场、养殖基地的鲢鱼、鳙鱼、鲤鱼、草鱼、鲶鱼、罗非鱼、鲫鱼、鲮鱼等13个品种268个样品，应用胶体金免疫层析法快速筛查氯霉素、孔雀石绿、呋喃类代谢物等指标。

不同品种鱼类检测出违禁药物使用情况调查结果见表2。

表2 不同品种鱼类检测出违禁药物使用情况调查结果

结果表明，博罗县水产品中仍出现违禁药物氯霉素、孔雀石绿、呋喃唑酮类代谢物和呋喃西林类代谢物残留检出情况；抽检涉及博罗县主要经济鱼类13个品种的268个水产样品中，9个检测出氯霉素，8个检测出孔雀石绿，4个检测出呋喃唑酮类代谢物，3个检测出呋喃西林类代谢物。从分析结果发现，氯霉素和孔雀石绿使用率在测试的违禁药物中所占的比例较大，草鱼、鳙鱼和鲫鱼违禁药物使用率在抽检的所有鱼类品种中所占的比例较高。

3 结论

基于胶体金免疫层析技术的特点，结合符合性试验对购置的试剂卡进行验证，检测限能达到：氯霉素≤0.3 μg/kg，孔雀石绿≤2 μg/kg，呋喃西林代谢物≤1 μg/kg，呋喃唑酮代谢物≤1 μg/kg；测试试剂卡阳性样品的假阴性率与阴性样品的假阳性率均为0；快检测试结果与样品LC测定结果基本一致，符合国家规定的水产药残标准。

试验在符合性试验的基础上应用胶体金免疫层析法对博罗县农贸市场和全县各镇养殖基地的阳性样品进行快速筛查，结果表明博罗县水产品中仍出现违禁药物氯霉素、孔雀石绿、呋喃唑酮类代谢物和呋喃西林类代谢物残留检出情况，且氯霉素和孔雀石绿使用率在测试的违禁药物中所占的比例较大，检出率分别为3.36%和2.98%；草鱼、鳙鱼和鲫鱼违禁药物使用率在抽检的所有鱼类品种中所占的比例较高。该结论为水产品在质量安全监控中对于鱼类品种和违禁药物的使用重点跟踪起到积极参考作用。

在我国，对高毒药物是明令禁止的，但从研究数据可以看出博罗县水产品仍然存在1%～4%的阳性样品。由于禁用物质及其代谢产物多属难降解物质，高浓度长期使用导致养殖用水和塘底泥受污染，在今后渔业养殖时虽未再使用禁用药物，但仍可能导致水产品检出禁用药物残留，造成水体及水产品的二次污染，这对水产品的监管提出了新的挑战。在今后的工作中，加快建立适用于博罗县水产品的质量安全检测体系的步伐，加强对易超标高风险鱼类品、易检出违禁药物实行年度专项抽检；同时在年度监控计划中将养殖用水也列入监控范围，弥补以往这方面的监控空白，进一步确保餐桌上的水产品安全可靠，以保障消费者的健康。

参考文献：

[1]赖年悦，钱继银，方凯，等.基于胶体金免疫层析法快速筛查水产品中的药物残留 [J].安徽农业科学，2013，41 （26）：10 817－10 818，10 831.

[2]祖学勤，唐春霞，靳涛.胶体金免疫层析技术在水产品药残快速检测中的应用 [J].现代农业科技，2013（17）：291-293.

[3]郭建军.胶体金免疫层析技术在水产品药物残留检测中的应用 [J].北京农业，2014（15）：44-45.

[4]张浩，罗来成，刘若森，等.胶体金快速检测试剂在农产品质量安全上的应用 [J].现代农业科技，2009（19）：338-338.

[5]王媛，钱蓓蕾，于慧娟，等.胶体金免疫层析产品快速测定水产品中的氯霉素残留 [J].中国渔业质量与标准，2013，3（1）：82-86.

[6]罗俊霞，李晓臣，范知，等.胶体金免疫层析法检测水产品中药物残留的风险浅析 [J].水产学杂志，2017，30（2）：46-49.

[7]王媛，于慧娟，钱蓓蕾，等.胶体金免疫层析法在水产品快速检测中的应用和发展方向 [J].农产品质量与安全，2013（1）：41-43.

[8]孔蕾，周健勇，叶磊海.胶体金免疫层析技术及其在水产养殖业中的应用 [J].河北渔业，2009（3）：49-50.

[9]王骏，李建业.高效液相色谱-荧光检测器测定水产品中孔雀石绿残留总量的研究 [J].食品科学，2007，28（7）：364-367.◇