2016年青海省部分州县羔羊包虫免疫抗体检测

王晓润

(青海省动物疫病预防控制中心，青海 西宁 810001)

包虫病(hydatid disease)，又称细粒棘球绦虫病，犬为终末宿主、家畜是中间宿主；其传播途径主要是犬的小肠寄生的细粒棘球绦虫发育成熟后排出的大量虫卵，而被虫卵污染的土壤、草地、水源、犬的皮毛，被人和家畜食入，在家畜和人体内的脏器中发育成包虫囊，囊内有无数的原头蚴，当感染动物屠宰后，含原头蚴的家畜肝、肺囊被犬生食，囊中的许多原头蚴在犬的小肠寄生发育，45 d 发育成成虫，成虫排出大量虫卵，周而复始，造成包虫病的传播流行。要在传播途径上切断传播源，主要手段：一是对家畜进行包虫病疫苗免疫，使之包虫卵不能在家畜肝、肺、脾等实质器官上寄生，形成包囊，对含有包虫囊的家畜脏器要严禁生食喂犬，切断包虫对犬的感染；二是对野犬扑杀，对家犬拴养并采取“犬犬投药、月月驱虫”的管理办法，对排出的犬粪进行焚烧、深埋，控制犬对包虫病的感染和传播。

2016年我们对省内8个州(市)、24个县(市)的960只羔羊，进行了羔羊包虫免疫抗体检测试验。

1 材料与方法

1.1 样品采集 在省内12个县，采集3月龄注射了包虫免疫疫苗的羔羊血清960份，进行羔羊免疫抗体检测。

1.2 诊断试剂 重庆澳龙生物制品有限公司生产的羊棘球蚴(包虫)ELISA抗体检测试剂盒。

1.3 方法 羔羊包虫病免疫抗体检测，按常规方法制备血清。

浓缩的洗涤液恢复至室温(25 ℃左右)，并摇动使沉淀的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作25倍稀释。

试剂稀释和样品稀释：在血清稀释板中按1∶100的体积稀释待检血清样品(198 μL样品稀释液中加2 μL待检血清样品)。对照稀释：在血清稀释板中按1∶100分别稀释阳性对照和阴性对照血清。 二抗稀释：用样品稀释液按1∶50～100稀释酶标二抗。取抗原包被板，分别将稀释好的待检血清和对照各取100 μL加入到抗原包被板孔中，待检样品做1孔，阴性对照和阳性对照各设2孔，每孔100 μL。轻轻振匀孔中样品(勿溢出)，置37 ℃温育60 min。甩掉板中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200 μL，静置3分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共洗5次。每孔加入稀释好的兔抗山羊酶标二抗100 μL，置37 ℃恒温箱温育60 min。洗涤5次,方法同前。每次在干净吸水纸上拍干。每孔先加底物液A50 μL、再加底物液B 50 μL，室温避光显色10 min。每孔加终止液50 μL，10 min内测定结果。

结果判定：在酶标仪上测各孔OD450nm值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD450nm值≥0.6，阴性对照孔平均OD450nm值<0.3。样品OD450nm值>0.6，判为阳性；样品OD450nm值<0.3，判为阴性；0.3～0.6之间为疑似。

2 结果

2016年本省级动物疫控机构共检测24个县(市、区)免疫包虫羔羊血清960份，合格784份，合格率81.67%，见表1。

表1 2016年青海部分地区羔羊细粒棘球绦虫疫苗免疫抗体检测结果 单位：份

3 讨论

根据本次羔羊血清检测，羔羊免疫血清抗体24县总体达到81.67%，达到国家规定的70%免疫抗体标准要求，总体上西宁、海东市等农区都达到了抗体合格标准，但是牧区海西州都兰县、海北州门源县、海北州刚察县、玉树州称多县、杂多县、海南州兴海等6县未达到国家规定免疫抗体合格70%标准，占被检测24个县的25%，我们分析原因：一是农业区犬少于牧区，羊感染包虫机率低；二是牧区犬的控制存在一定困难，特别是流浪犬，无法对其驱虫，扑杀又有当地牧民阻拦，很不好处理；三是牧区不达标的这6县，乡镇兽医站归乡镇府管理，对羔羊的包虫免疫疫苗注射可能不到位，需要对这6个县的包虫羔羊免疫加强补免工作，落实责任，不留死角。我们一定要将此项工作做细，早日完成中央和省政府安排部署的包虫病防控工作，为下一步完全控制青海省内动物包虫病的流行而努力。

参考文献：

[1] 李祥瑞.动物寄生虫病彩色图谱[M].北京：中国农业出版社，2004：36-38.