低MCV引起PLT计数假性增高的实验研究

荆　晶，胡恩亮，樊爱琳，郑善銮，郝晓柯

(空军军医大学西京医院检验科，西安　710032)

随着医学科技水平的发展，血细胞分析仪已是医院临床检验应用最广泛的仪器之一。其快速、易操作、重复性好等功能强大的特点，为临床提供不同层次有效的血细胞参数，已作为血细胞计数最常用的筛选方法[1，2]。血小板(PLT)计数作为血细胞检测中的一项重要指标，对临床疾病的诊断和治疗有极其重要的价值，与疾病的发展和预后密切相关。而在日常的临床检验工作中，血小板假性减低和假性增高却给临床诊治带来了极大的困扰。

Sysmex-NX9000血细胞分析仪采用电阻抗法进行PLT计数，其原理是仪器计数小孔内不定时的通过各类血细胞，各种血细胞体积大小不同，穿过小孔时其内、外电流和电压发生改变，而形成相应的脉冲变化与血细胞数量相当。由于血小板和红细胞计数区域常有交叉，当红细胞体积过小或有较多红细胞碎片时，其脉冲信号会被视为血小板信号，导致血小板计数假性增高[3～5]。这样的PLT计数结果如果不予以纠正，会给临床提供不准确的数据，从而导致误诊、漏诊，甚至造成不可挽回的生命财产损失。为了解小红细胞及红细胞碎片对PLT计数造成的影响，笔者对不同范围MCV值的标本分别进行电阻抗法(PLT-I)和荧光核酸染色法(PLT-F)的检测，比较两种方法PLT计数的差异。

1　材料和方法

1.1研究对象选择2017年3～10月西京医院门诊、住院患者及体检者466例，要求检验结果红细胞平均体积均小于正常范围(≤80fl)。按MCV分为3组，A组150例，MCV≤65fl，B组166例，65fl

1.2仪器与试剂Sysmex-NX9000五分类血细胞分析仪，XE2100五分类血细胞分析仪，SP90，SP89，SP10推片机，Cellavison自动阅片机及其配套溶血剂、稀释液、清洗液均为日本Sysmex公司生产，所有仪器都定期进行校准，各项指标均符合要求，室内质控均在控。双目光学显微镜CX-21(日本Olympus公司)；采血针及EDTA-K2血液抗凝真空管(广州阳普公司)；瑞氏-吉姆萨染液Ⅰ，Ⅱ(台湾贝索公司)。

1.3检测方法患者空腹状态下抽取静脉血2 ml，加入含EDTA-K2的真空抗凝管中，轻轻混匀，分别采用PLT-I和PLT-F法，在2 h内上机完成检测。每日检测标本前，用仪器原装质控品做质控，保证仪器相关监测指标在控的前提下完成标本检测。

2结果见表1。A组PLT-I与PLT-F两种检测方法比较，差异有统计学意义(t=6.799，P<0.05)，B组和C组两检测方法比较差异无统计学意义(t=0.693，0.583，均P>0.05)。

表1

不同检测方法血小板计数比较

3讨论现如今，血小板检测作为继白细胞之后最有力的诊断依据之一，临床上意义重大。在血液病、肿瘤、感染、创伤、骨折和心脑血管等疾病，都给临床提供着重要诊疗作用，同样也是临床研究凝血与止血功能的重要指标之一，是外科病人术前和内科病人输血前必查的检验项目。

临床很多疾病都可以引起血小板的增高[6～8]，如慢性粒细胞性白血病、原发性血小板增多症、真性红细胞增多症；急性化脓性感染、大出血、急性溶血、肿瘤等也会引起PLT反应性增高；同样，还会有一些情况会引起血小板计数假性增高，如某些溶血性疾病，发生血管内溶血时，患者血液中出现较多的红细胞碎片时；部分慢性粒细胞白血病患者经过治疗后，血液内也会出现大量红细胞碎片；此外，临床某些患者静脉滴输脂肪乳后短时间采集静脉血做血细胞检测，乳糜颗粒会被血细胞分析仪误认为是血小板；以上这三种情况都可能造成PLT计数结果的不准确/偏高。因此，PLT计数的准确性就变得尤为重要。Sysmex-XN9000全自动血细胞分析仪采用电阻抗原理。根据颗粒的大小来区分细胞，与颗粒内容物性质无关。红细胞和血小板同在一个检测通道，血小板体积多分布在2～30 fl之间，而红细胞体积则分布在30～250 fl之间，机器把范围在2～30 fl的细胞判定为血小板，把范围在25～250 fl的细胞判定为红细胞，健康人群血小板体积和红细胞体积之间有一个明显界限[9，10]。但当患者血液中存在相当数量的小红细胞或细胞碎片时，仪器将其误认为血小板而使PLT计数结果假性增高。MCV越小，小红细胞数量越多，对PLT计数的影响就越大。Sysmex-XN全自动血细胞分析仪PLT-F利用荧光素对血小板进行染色，采用流式细胞数检测前向散射光(检测细胞大小)和侧向散射光(检测细胞内容物和颗粒)，根据检测数据绘制出二维散点图进行计数，这一方法有效避免了上述小红细胞或细胞碎片等因素导致的血小板假性增高或减低[11～13]，因此，本研究以PLT-F计数之PLT为基数，对由于低MCV结果而引起的假性PLT计数增高结果样本，进行PLT复检就显得尤为重要。

本研究是对可能影响血小板计数的小红细胞按其平均体积大小进行分组，分别采用电阻抗法(PLT-I)和荧光核酸染色法(PLT-F)进行五分类计数。正如实验结果所得A组：PLT-I值=(322.8±109.1)×109/L，PLT-F值=(282.60±100.5)×109/L，相比二者之间差异有统计学意义(P<0.05)；B组：PLT-I值=(305.7±111.7)×109/L，PLT-值=(304.8±112.3)×109/L，二者之间差异无统计学意义；C组：PLT-I值=(292.2±84)×109/L，PLT-F值=(291.6±84.4)×109/L，二者之间差异无统计学意义。本实验着重比较了传统的血小板检测方法(PLT-I)和荧光核酸染色法(PLT-F)抗小红细胞和红细胞碎片的干扰。实验表明，MCV在正常范围的标本即C组在PLT-I和PLT-F的检测结果十分接近，重复性良好，差异不具有统计学意义(P>0.05)。当65 fl0.05)。当MCV<65 fl时，PLT-I和PLT-F的测量结果间差异有统计学显著性意义(P<0.05)，PLT-I血小板结果假性增高。本实验室制定的血细胞检测复检规则中，就有PLT抗小红细胞和红细胞碎片的干扰：当MCV<70 fl时，需对标本进行Reflex(PLT-F)复检。本次研究结果也证实，当MCV<65 fl时，PLT进行PLT-I和PLT-F后，其PLT计数结果差异有统计学意义，且血小板直方图均表现为尾部抬高。因此，在MCV<65 fl时进行PLT-F复检，可有效避免小红细胞或红细胞碎片的增多引起的PLT计数假性增高。当机体PLT过低时，临床上会引起皮肤黏膜出血、鼻衄、脏器出血甚至脑出血等严重出血而危及生命[14]，若病人处于低血小板的状态，但由于体内小红细胞的干扰致使血小板计数在正常范围，这就会造成临床医生的误诊漏诊而影响病人生命财产安全，造成严重医疗纠纷。所以，当MCV<65 fl时，标本进行PLT-F复检是必要的。

参考文献：

[1]段浩，陈锋，顾彪，等．血细胞分析技术及其进展研究[J]．医疗卫生装备，2014，35(5)：108-112．

Duan H，Chen F，Gu B，et al．Study of hematology analysis technology and its development[J]．Chinese Medical Equipment Journal，2014，35(5)：108-112．

[2]肖木洲，张广聪，叶竟妍，等．全自动血细胞分析仪对形态异常血细胞检测功能的评价[J]．广州中医药大学学报，2006，23(3)：225-227．

Xiao MZ，Zhang GC，Ye JY，et al．Evaluation of automatic blood cell analyzer for detecting abnormal morphologic cells[J]．Jounal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，2006，23(3)：225-227．

[3]郭玉娥，赵洪泉，赵志明．血细胞分析仪计数血小板的影响因素[J]．中国误诊学杂志，2005，5(1)：152-153．

Guo YE，Zhao HQ，Zhao ZM．The influence factor of counting platelets by blood cell analyzer[J]．Chinese Journal of Misdiagnostics，2005，5(1)：152-153．

[4]陈言伟，王朝鑫．光学法检测大血小板的临床应用价值分析[J]．实验与检验医学，2014，32(5)：643-644．

Chen YW，Wang CX．Analysis of clinical application value of optical method for detecting large platelets[J]．Experimental and Laboratory Medicine，2014，32(5)：643-644．

[5]李少芳，韦敏．用电阻抗法自动血细胞分析仪检测血小板的影响因素研究[J]．当代医药论丛，2017，15(12)：110-111．

Li SF，Wei M．Study on the influencing factors of platelet detection by electrical impedance automatic blood cell analyzer[J]．Contemporary Medicine Forum，2017，15(12)：110-111．

[6]崔颖鹏，陈维安，陈冬梅，等．两种常见妊娠合并症的血小板参数变化分析[J]．实用医学杂志，2003，19(3)：312-313．

Cui YP，Chen WA，Chen DM，et al．Analysis of platelet parameters in two types of common pregnency complications[J]．The Journal of Practical Medicine，2003，19(3)：312-313．

[7]Sawaidis A，Schuett K．Platelet fuction[J]，Der Diabetologe，2016，12(2)：102-108．

[8]Sasaki K，Kawai K，Tsuno NH，et al．Impact of preoperative thrombocytosis on the survival of patients with primary colorectal cancer[J]．World Journal of Surgery，2012，36(1)：192-200．

[9]梁巍，周艳丽，应媛媛，等．不同检测方法对大血小板计数的对比与心脑血管疾病的临床价值[J]．中国实用神经疾病杂志，2016，19(17)：60-61．

Liang W，Zhou YL，Ying YY，et al．Comparison of large platelet count by different detection methods and clinical value of cardiovascular and cerebrovascular diseases[J]．Chinese Journal of Practical Neruous Diseases，2016，19(17)：60-61．

[10]陈娟，董晶，彭赛辉，等．PLT-F计数低值血小板的准确性评价[J]．实验与检验医学，2016，34(3)：288-290，293．

Chen J，Dong J，Peng SH，et al．Accuracy evaluation of PLT-F method on low concentration of platelet counting[J]．Experimental and Laboratory Medicine，2016，34(3)：288-290，293．

[11]赵秀丽，黄晓燕，万振洲．XN-9000血液分析仪“低值血小板”检测通道的临床应用评价[J]．临床输血与检验，2016，18(6)：603-605．

Zhao XL，Huang XY，Wan ZZ．Clinical application evaluation of new fluorecsent method(PLT-F) on Sysmex XN-9000 hematology analyzer achieved higher accuracy in low platelet counting[J]．Jounral of Clinical Transfusion and Laboratory Medicine，2016，18(6)：603-605．

[12]徐文丽，李舟．XN-9000血细胞分析仪3种计数血小板方法结果差异分析[J]．临床血液学杂志，2017，30(2)：122-125．

Xu WL，Li Z．Differential analysis of the results of three kinds of platelet counting methods in XN-9000 sysmex blood cell analyzer[J]．Journal of Clinical Hematology，2017，30(2)：122-125．

[13]Wada A，Takagi Y，Kono M，et al．Accuracy of a new platelet count system(PLT-F) depends on the staining property of its reagents[J]．PLoS One，2015，10(10)：e141311．

[14]胡文静，周荣富，贾璐，等．不同血液病患者发生自发性出血事件时的血小板特征[J]．江苏医药，2016，42(11)：1258-1260．

Hu WJ，Zhou RF，Jia L，et al．Charactoristics of platelet in patients with different kinds of hematonosis during spontaneous bleeding[J]．Jiangsu Medical Journal，2016，42(11)：1258-1260．