CD133-2在急性白血病病程中的表达及意义

王述文，姚红霞，饶　若

(海南省人民医院血液病研究室，海口　570311)

CD34是目前公认的最主要的造血干/祖细胞表面标志物。CD133是继CD34之后新发现的比CD34更有价值的干细胞表面抗原标志[1]。CD133目前被发现的同源性抗原有两种，即CD133-1和CD133-2。研究表明在正常骨髓或外周血CD133-1，CD133-2表达一致，但是在急性白血病(AL)中CD133-2的表达水平明显高于CD133-1，存在统计学差异[2]。国内对于CD133-1的研究较多，但是对于CD133-2的研究较少，尤其是其在AL病程的不同时期有何变化尚未见报道。本研究应用直接荧光标记流式细胞术检测42例初治AL患者、15例完全缓解期(CR)患者及10例复发患者CD133-2的表达，以探讨其在AL不同病程中的表达及其临床意义。

1　材料和方法

1.1研究对象AL患者共67例，其中初治组42例，CR组15例，复发组10例；男性33例，女性34例，年龄18～83岁。对照组15例，为血小板减少、骨髓无明显异常的患者。全部病例的诊断标准均根据张之南主编《血液病诊断与疗效标准》[3]，其中CR期及复发期诊断标准参考国内疗效标准(形态学标准)。

1.2试剂和仪器鼠抗人CD133-2(293C3，IgG2b)及其同型对照均购自Miltenyi公司，检测仪器为BD AriaII流式细胞仪。

1.3方法采集患者经EDTA抗凝的骨髓1～2 ml，调整细胞浓度为1×106/ml。骨髓标记抗体后室温下避光反应15 min，溶血后用FCM检测。上机前均使用质控荧光微球校准仪器，用CD45/SSC设门，根据CD45表达程度和SSC颗粒度大小将细胞分为粒细胞群、单核细胞群、淋巴细胞群、红细胞和碎片群及原始幼稚细胞群，通过二维表型图谱，分析CD133-2抗原表达情况。根据AL免疫学特征欧洲协作组标准，≥20%细胞表达为阳性，<20%为阴性。

2　结果

2.1对照组和初治组CD133-2表达比较对照组、初治AL组CD133-2阳性率分别为0，52.4%，表达率分别为(2.2±3.9)%，(23.9±21.5)%，差异均有统计学意义(χ2=12.796，t=-0.642，P<0.05)。

2.2AL不同病程中CD133-2表达比较初治组CD133-2的阳性率为52.4%(22/42)，表达率为(23.9±21.5)%；CR组CD133-2的阳性率为0(0/15)，表达率为(5.0±6.0)%；复发组CD133-2的阳性率为40.0%(4/10)，表达率为(28.4±25.6)%。三组间CD133-2的阳性率及表达率差异均有统计学意义(χ2=12.777，F=5.906，P<0.05)。两两比较的结果为CR组的CD133-2阳性率及表达率均明显低于初治组和复发组。

2.3CD133-2与CD34的协同表达见表1。初治AL中，CD34+与CD34-患者均可表达CD133-2， 但是CD34+组的CD133-2阳性表达率(40.5%)高于CD34-组(7.1%)，差异有统计学意义(χ2=8.636，P<0.05)。

表1在AL中CD34+与CD34-患者CD133-2表达情况[n=42，n(%)]

CD34nCD133阳性阴性阳性阴性261617(40.5)3(7.1)9(21.4)13(31.0)

2.4CD133-2联合CD34与化疗疗效的关系见表2。化疗一个疗程后的CR率与CD133-2和CD34的表达有关(χ2=6.078，P<0.05)，其中CD133-2-/CD34-组的CR率明显高于CD133-2+/CD34+组，差异有统计学意义(P<0.05)，其它组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表2CD133-2联合CD34表达与化疗疗效的关系

组 别nCR数(n)CR率(%)CD133+/CD34+CD133-/CD34-其 它12128410533.383.362.5

3讨论CD133-2分子其基因定位于人类的2号染色体上，在正常造血和非造血组织中均有表达，随着细胞的分化成熟期表达减弱、消失[4]。越来越多的研究报道表明CD133-2在AL中有异常高表达，汪家敏等[5]报道了164例AL患者CD133-2的阳性率为47.56%，表达水平中位数为19.8%。本组的研究显示初治组CD133-2的阳性率为52.4%(22/42)，表达率为(23.9±21.5)%，与对照组比较存在显著的统计学差异，结果与前述报道一致。但是CD133-2的表达与CD34的表达是否有关联性，其高表达能否作为AL的一个不良预后因素目前尚存在争议。赵文理等[6]的研究认为儿童急性淋巴细胞白血病初诊患者CD133-2的表达与CD34表达水平有显著性差异，但是两者表达水平无相关性。大多数学者认为CD133与CD34有相关性，我们的结果表明CD34+组的CD133-2阳性表达率(40.5%)明显高于CD34-患者(7.1%)，差异有统计学意义，提示CD133可能表达于分化发育阶段较早的白血病细胞。Lee等[7]随访了41例AL患者发现，CD133+CD34+患者的治疗疗效及预后比CD133-CD34-患者差，CD133+组的早中期复发率比CD133-组的高，无病生存率(DFS)比CD133-组的低，因此认为CD133是AL的一个不良预后因素。在对CD133表达与化疗疗效的研究中，我们也发现CD133-2-/CD34-组的CR率明显低于CD133-2+/CD34+组，提示CD133-2/CD34共同高表达可能是AL的一个不良预后因素。

CD133-2在初治AL中的高表达比较明确，但是其在AL不同病程阶段变化的研究尚未见报道。本组结果显示在初治组和复发组中CD133-2的表达率和阳性率均显著高于CR组。由此提示CD133-2的表达随着AL病程的变化而变化，当治疗有效疾病处于完全缓解期时，CD133-2的表达随之下降，而当治疗无效复发时，CD133-2的表达随之升高。

急性白血病(AL)是一种进展迅速、预后很差的恶性血液肿瘤。近年来随着化疗水平的不断提高、造血干细胞移植的成熟应用，50%～80%的患者规范治疗后可以达到完全缓解，但是仍然有65%的患者最终在3～5年内复发，复发的根源是CR期的患者体内残留的白血病细胞，即微小残留病(MRD)[8]。因此动态监测MRD对于判定疗效、预测复发及指导个体化治疗均具有重要意义。应用多参数流式细胞术(MFC)检测白血病患者治疗前存在的白血病相关免疫表型(LAIP)是目前监测MRD最主要的方法之一[9]。应用于MRD监测的LAIP抗原一般具有以下特点之一：跨系表达，跨阶段表达，过度表达、低表达或缺失，非同步表达[10]。正是由于CD133-2急性白血病细胞的表达明显高于正常骨髓单个核细胞，并且随着治疗的有效缓解、无效复发的变化而降低或升高，提示对CR期的AL患者检测CD133-2的表达可以作为判断疗效及监测复发的指标之一。

CD133-2作为一种新的干细胞表面标识被发现，其在白血病的预后、疗效判断、复发监测、免疫治疗等方面的作用随着研究的不断深入将会越来越受到重视。

参考文献：

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Zhang ZN，Shen T．Diagnostic and therapeutic criteria for hematological diseases[M]．Beijing：Sciense Publishing House，2007：103-134．

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Zhao WL，Ne SS，Xu YY，et al．Expression of two subtype molecules of CD133 in childhood with B linage acute lymphoblastic leukemia and its clinical significance[J]．Journal of Experimental Hematology，2012，20(3)：536-540．

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