2007-2016 年间山西鸡禽流感和新城疫的免疫状况调查分析＊

2018-04-16刘华栋王彩先唐娟陆冰洋李婷婷丁树荣詹丽娥

中国动物保健 2018年12期

刘华栋，王彩先，唐娟，陆冰洋，李婷婷，丁树荣，詹丽娥

（山西省农业科学院畜牧兽医研究所太原 030032）

新城疫在1927 年是由Doyle从英国的纽卡斯尔市（Newcastle）病鸡中分离到的病原，命名为新城疫。新城疫的病原为新城疫病毒（NDV），属于副粘病毒科、副粘病毒亚科、腮腺炎病毒属的成员，是一种急性和高度接触性传染病，对养鸡业造成了严重危害。国际兽医局将新城疫列为A 类疫病。本病自从传入我国后，在全国各地不断有发病的报道，已经成为危害我国养禽业，造成经济损失最严重的禽病之一。我国动物防疫与检疫名录也将其列为一类传染性疾病。

禽流行性感冒（简称禽流感，Avian Influenza，AI）主要的病原为流感病毒中的A 型流感病毒，其在感染后主要引起禽类的全身性或呼吸器官性传染病。本病于1878年在意大利首次暴发，现已遍布世界各地。高致病性禽流感已经被世界动物卫生组织列为A 类动物传染病，我国也将其列为一类动物疫病，禽流感的暴发和流行已经给家禽养殖业带来了巨大的经济损失。现已严重危害我国养殖业，并危及到人类安全。

本调查从不同的地区采样，对山西省不同市、区、县的鸡场进行抗体监测，通过数据的整理和总结，可以从这些数据中看出当前山西省内整体的鸡场禽流感和新城疫的免疫状况，并根据数据进行相关分析，结果可以为本省的养鸡场在这两种病的防控中提供一些思路和参考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 抗原和抗体新城疫抗原、禽流感H9 抗原和禽流感H5 抗原购于哈尔滨维科生物技术开发公司，禽流感标准阳性和阴性血清购于北京康农兴牧科技发展中心，新城疫病毒阳性血清和阴性血清购于哈尔滨兽医研究所。

1.1.2 血清样品 2007 年1 月—2016 年12 月，在山西不同地区不同规模的养鸡场/户按比例随机采集血清样品。

1.1.3 PBS缓冲液（p H7.0～7.2）称7.9g Na Cl，0.2g KCl，1.44g Na2HPO4和1.8g K2HPO4，溶于800mL 蒸馏水中，用HCl 调节溶液的p H 值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L。121℃高压灭菌20min，保存于4℃冰箱。

1.1.4 Alsever 液（阿氏液）葡萄糖 20.5g，柠檬酸三钠（Na3C6H5O7·5H2O）8.0g，氯化钠4.2g，柠檬酸0.55g，加蒸馏水至1,000mL，充分溶解后用滤纸过滤，加热溶解后将p H 值调到6.1，经过69k Pa，15min 高压灭菌，4℃贮存备用。

1.1.5 0.7%鸡红细胞悬液用注射器吸取阿氏液1m L，采集鸡血约2～4m L，与阿氏液混合离心。经过3 次洗涤后，弃去上清液，配成0.7%的红细胞悬液，4℃保存备用。

1.1.6 仪器与设备 96 孔V 型微量血凝反应板，稀释棒，滴管，微量振荡器，分析天平，普通天平，普通离心机，高压灭菌锅，普通冰箱。

1.2 方法

1.2.1 抽样方法和地区本研究的抽样方法为按照鸡群大小抽样，从中抽取0.5%～1%比例。抽样地区为山西省的不同地区，在不同年份中，抽样地区略有差异。本研究的抽样地区有：文水、清徐、祁县、太谷、原平、晋中、平遥、大同、运城、介休、太原、昔阳、长治、中阳、榆社、左权等16 个县市。

1.2.2 血清样品的采集及处理方法本研究采取血样的方法为：准备长约13cm 左右的输液管，将被采样鸡的翅下静脉刺破后收集到输液管中，而后对其一端进行火烧封口。封口后将其置于37℃恒温培养箱，观察血清析出情况，待析出血清后，置于4℃保存。

1.2.3 监测方法监测方法是使用血凝和血凝抑制试验进行，参考农业部1999 年颁布的14 种动物疫病检测方法中的红细胞凝集抑制试验（HI），微量法检测被检血清HI抗体效价。同一地区采样的抗体水平为其所有样品的平均值。

2 结果

1）通过试验对所收集到的样品进行抗体监测，结果见表1。

农业部标准规定鸡新城疫和禽流感的抗体≥4log2 时判定为合格，参照此标准对10 年间的抗体效价分析，可以看出NDV 在2007、2009 和2013 年都存在不合格的情况，尤其是2013 年，在左权县抗体水平最低，只有2.81log2。AIV（H5）抗体水平在2008、2012 和2016 年全部地区都合格，其他年份均有不合格地区。AIV（H9）抗体水平在2009、2010 和2013 年都存在不合格地区。

2）2007-2016 年抗体效价规律变化情况见图1。

表1 不同年份山西地区抗体效价汇总表

由图1 可见，经过整体分析NDV、AIV（N5、N9）三种抗体平均水平在10 年间呈现出上升趋势，但是在2009 和2013 年抗体水平迅速下降。特别是在2009 年AIV（H5）抗体平均水平下降到合格线以下，以后年份的抗体水平均值都在合格线以上。

3）太谷县连续6 年来鸡群抗体水平变化情况见图2 和图3。

由图2 可见，太谷县10 年间血样抗体水平变化情况，在2007-2010 年NDV、AIV（H5、H9）三种抗体水平高低差距较大，禽流感不同的型AIV（H5）和AIV（H9）之间的差距很大，2011-2014 年三种抗体水平高低比较接近，2015 年三种抗体水平高低差距最大，AIV（H5）抗体水平出现10 年内的最低均值，为3.40log2，未达到农业部标准。2016 年三种抗体水平高低又接近。

太谷县鸡场10 年间抗体水平变化趋势，NDV 的抗体效价在2012年前呈现出上升趋势，2012-2014年出现抗体水平极速下降，2015 年又迅速上升，2016 年又开始下降。10 年整体来看，NDV 的抗体水平在6log2 上下，沿水平线发展。AIV（H5）的抗体水平在2012 年前也呈现缓慢上升趋势，2012-2015 年又出现缓慢下降，2015 年达到最低点，在4log2 合格线以下。2016 年抗体水平有所上升，达到4.14log2，超过了4log2 合格线。AIV（H9）的抗体效价则10年整体呈现下降趋势，已经从2007年的7.56log2 下降到2016 年的4.08log2，虽然在2008、2009、2012、2015 年都出现上升，但下降趋势更明显。NDV 和AIV（H9）的抗体水平在10 年间基本保持同升同降。

表1 （续）

图1 山西地区不同年份抗体效价图

图2 太谷县养殖场十年间三种抗体效价变化走势图

3 讨论

从各地区在10 年间NDV、AIV（H5、H9）抗体水平监测数据的平均值可以发现抗体水平呈现出波浪式的变化，但总体呈增长趋势，只有AIV（H5）在2007 和2009年的抗体水平平均值未达到农业部规定的抗体标准≥4log2，此后年份均未出现不达标情况。这与山西地区发展侧重具有相关性，山西地处中国中北部，地处黄土高原，多山地和丘陵地貌，不利于发展农业，由于地下具有丰富的矿产资源，所以一直以来以发展重工业为主导，导致农业发展相对滞后，农业中又以畜牧业发展较为缓慢。早期，畜牧业多分散在偏远的农村，以散养户为主，不成规模，养殖技术落后，没有科学的养殖方法，尤其是对疫苗免疫认识不足，甚至不接受疫苗免疫，有的养殖户虽然免疫，但没有科学合理的免疫程序，以及操作技术不当等原因，导致免疫效果整体不好[1]。随着养殖业的逐渐扩大，养殖场逐渐认识到免疫的重要性，抗体水平也呈现出上升趋势，但波动较为明显。很多因素在制约疫苗刺激机体产生保护力从而影响免疫效果。这就导致一些养殖场虽然免疫，但抗体水平较低。也可能是市场经济的影响导致养殖数量增减，养殖成本投入增减具有相关性。但整体上升趋势明显，说明养殖场的养殖水平在提高，观念在转变。

有研究表明在NDV 强毒流行的时候，没有抗体或HI 抗体效价很低的鸡群，通常会首先被感染，其感染后通过向周围排毒而使得抗体水平较高的其它鸡群也会感染发病[2]。农业部规定，以抗体水平达到24 为合格参考线。有人也进行了相关实验，当HI 滴度≤22，鸡100% 死亡；在22～25 时，10%死亡；在24～26，0% 死亡[3-4]。由此可以认为，HI 抗体水平的高低与鸡群受强毒攻击时的免疫保护力呈正相关。但也有学者认为不能仅靠HI 抗体水平高低来判断鸡群是否安全，认为HI 抗体水平与新城疫保护力两者之间不一致[5-6]。抗体水平较高并不能阻止病毒的感染和增殖[7]。于是就有人提出HI 抗体平均水平才是衡量鸡群免疫保护力的重要指标，并通过试验证明当HI抗体平均水平大于25，保护率可达90%～100%[8]。本调查采样的鸡群抗体平均水平在2009 年以后均达到24 农业部标准线，并未发现有任何临床症状，这与其他学者的研究相符。由此可见，做好家养禽新城疫的免疫仍然是控制新城疫疫情的有效手段[9]。

有学者研究禽流感的抗体效价和抵抗禽流感感染保护力的相关性，在试验中证明当HI 抗体临界值为5log2 时，能够抵抗致死剂量AIV（H5N2）的攻击[10]。本调查结果显示2011 年基本上可以作为一个分界，之前基本都不合格，在之后只有2015 年平均水平不合格，其他年份均达到5log2，说明随着年份增加，养殖场对AIV（H5）免疫的重视程度有所提高。

通过对太谷地区10 年的跟踪监测，可看出太谷县相同养鸡场在不同年间抗体水平波动较大，尤其是AIV（H9）的抗体水平在2009年最高达到10.09log2，到2016年达到最低点4.08log2，NDV 和AIV（H5）也呈现出类似的波动曲线，甚至在2015 年，AIV（H5）的抗体水平为3.4log2，下降到农业部4log2 的合格标准线以下。经过和养殖场管理人员沟通交流，确定这种抗体水平出现波动与市场行情变化导致管理人员的重视程度、饲养人员的流动以及疾病的流行情况有很大关系。