MS-222对日本对虾麻醉效果的研究

平洪领，史会来，余方平，张涛

（浙江省海洋水产研究所，浙江省海水增养殖重点实验室，浙江 舟山 316021）

日本对虾（Penaeus japonicus）俗称花虾、竹节虾、车虾，隶属于甲壳纲，十足目，对虾科，对虾属，其分布地域广、体色艳丽、肉味鲜美，是我国近海尤其是东海区拖虾作业的重要捕捞对象[1]。近年来，由于环境污染以及过度捕捞等原因，近海渔业资源严重衰退，渔获组成低龄化、小型化、低值化日趋加剧，渔业生产效率和经济效益大幅度下跌，严重影响到渔业经济的可持续发展。日本对虾已成为我国港湾生态系统重要的增殖放流对象[2-4]。自20世纪70年代以来，随着人工育苗技术和配合饵料的开发和应用，日本对虾养殖产业也得到了快速发展。目前对日本对虾的基础研究资料大多集中于繁育生物学[5-7]、增养殖技术[8-9]及营养价值分析[1]等方面，但尚未开展有关日本对虾麻醉效果的研究报道。其实，在对日本对虾进行科学研究和增养殖生产过程中，对虾常因捕捞的伤害、挣扎造成应激性反应而受伤死亡。因此，寻求一种对日本对虾有效的麻醉药物并确定其适宜的麻醉剂量，对日本对虾开展研究和运输工作具有重要的意义。

MS-222（鱼安定）是一种易处理、效力迅速、操作简便、安全的渔用麻醉剂，是当前世界各国广泛应用在水产动物中最安全、最可靠、最有效的麻醉药物，并且经过美国食品和药物管理局（FDA）认可，用于鱼虾类麻醉运输[10-11]。MS-222已被广泛应用在我国多种水产动物的麻醉过程中[10,12-14]。科学合理地使用麻醉剂，能够较大程度降低水产动物的应激反应，减少不必要的伤害，同时方便人工操作。本文研究采用不同浓度MS-222对日本对虾进行麻醉试验，通过分析日本对虾在不同浓度下麻醉效果及离水操作时间，探讨合适的麻醉浓度、麻醉时间及离水操作时间。以期为MS－222应用于日本对虾麻醉提供参考资料，初步了解MS-222对日本对虾的麻醉机理，为科学使用MS-222麻醉剂奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验用虾 试验所用的日本对虾为全人工繁育的同批次群体。选择健康无病、活力强的个体，体长为（13±0.5）cm，体质量为（12±0.8）g，试验开始前 7 d暂养在水泥池（180 cm×150 cm×60 cm）中，水深40 cm。每个试验组设置10只重复。

1.1.2 养殖用水 经过沉淀、砂滤及曝气的自然海水，pH 值为 6.8～7.2，盐度为 28，溶氧量为 7～8 mg/L，水温为自然海水温度（20±0.4）℃。

1.1.3 麻醉试剂 MS-222购自上海晶纯生化科技股份有限公司，为白色粉末，易溶于水。

1.2 试验方法

1.2.1 MS-222对日本对虾的麻醉效果分期 根据日本对虾在MS-222溶液中的麻醉行为反应以及在清水中苏醒的行为反应，参考相关研究文献[15-16]，将MS-222对日本对虾的麻醉程度分为6期（表1）。到达轻度麻醉、中度麻醉、深度麻醉和复苏所需要的时间分别为A2、A3、A4和R3。用玻璃棒碰触对虾，观察日本对虾的反应情况，用以判断所处的麻醉阶段。麻醉时间为试验对虾被放入MS-222溶液中开始计时到麻醉A4期为止。复苏时间为麻醉对虾进入清水中开始计时到复苏R3期为止，1h内未苏醒判定为死亡。根据Marking等[17]认定的理想麻醉浓度标准，结合试验对虾的实际情况，本试验的有效麻醉浓度设定为：3 min之内麻醉、5 min之内复苏、15 min之后成活率是100%的浓度。

表1日本对虾的麻醉和复苏阶段的行为特征

1.2.2 麻醉和复苏时间的测定 将日本对虾分别放入浓度为4、5、6和7g/L的MS-222溶液中，设置不加MS-222的空白对照组。观察麻醉情况，参照麻醉分期表，分别记录对虾到达各麻醉状态所需要的时间。然后，将麻醉后的麻醉后日本对虾放入曝气的海水中，记录每个个体入水至完全苏醒所需要的时间。确定理想麻醉浓度。

1.2.3 露空时间对复苏率的影响 按照试验步骤1.2.2得到的结果，依据Marking等[17]规定的理想有效浓度，即3 min内麻醉并在5 min内苏醒这一标准配置MS-222的理想麻醉浓度。将麻醉后的日本对虾放在湿纱布上，分别在空气中曝露0、2、4、6、8 min后，放入海水中复苏，记录苏醒所需要的时间。以日本对虾出现各麻醉特征的时间反应麻醉效果，以各复苏特征出现的时间衡量复苏情况。试验结果表示为平均值±标准差。复苏率（%）=（完全复苏的个体数/各组试验对虾总数）×100%。

2 结果与分析

2.1 不同浓度MS-222对日本对虾麻醉和复苏效果的影响

在不同浓度MS-222条件下，日本对虾进入不同麻醉程度的时间、复苏到不同阶段的时间及复苏24h后的存活率见表2所示。

由表2可知，在0～7g/L的浓度条件下，日本对虾的麻醉时间随MS-222浓度的升高而缩短，而复苏所需的时间不断延长，在此浓度范围内均能完全复苏，并且复苏后24 h内的存活率均达到100%。本试验中日本对虾的理想麻醉浓度为6 g/L。到达轻度麻醉、中度麻醉、深度麻醉和复苏所需要的时间分别为 69.0、104.8、159.6 和 221.6 s，存活率达到100%。

表2不同浓度MS-222下日本对虾的麻醉和复苏时间

2.2 空气中曝露时间对日本对虾复苏的影响

根据上文中试验结果得知，日本对虾在MS-222中的理想麻醉浓度为6 g/L。将在此浓度条件下麻醉的日本对虾，取出放到湿润的纱布上，在空气中曝露一定时间后，放入清水中复苏的时间及成活率如表3所示。由表3可知，随着在空气中曝露时间的增加，日本对虾复苏所需要的时间不断增长。在离水时间 0～4 min内，均能完全复苏，并且在24 h内的存活率为100%。但是当离水时间为6 min时，复苏24 h后的存活率为90%。当离水时间为8 min时，复苏过程无法达到完全恢复状态，而且复苏24 h后的存活率仅为65%。因此，日本对虾在MS-222理想浓度6 g/L深度麻醉后，适宜的离水操作时间应小于4 min。

表3麻醉后离水曝露时间对日本对虾复苏的影响

3 讨论

3.1 麻醉剂MS-222对不同虾类的麻醉效果

麻醉剂MS－222在水产领域麻醉剂已得到了广泛的研究和应用，主要集中在鱼类的催产和运输环节，但有关虾蟹类[15,18-19]麻醉方面的研究相对较少。MS－222水溶液可以通过鱼鳃及鱼体表的吸收，并传导至神经中枢使鱼类的活动能力和反射能力受到抑制，麻醉后鱼表现出呼吸频率降低、行动迟缓及排泄物减少，如果麻醉剂的剂量过大使其较长时间处于中度麻醉或深度麻醉状态，则会造成鱼类死亡[14]。本试验中，参照黄雪芹等[20]使用丁香酚麻醉中国对虾幼虾的方法，将MS-222对日本对虾的麻醉过程划分为6个阶段，复苏过程划分为4个阶段，并对各个麻醉和复苏阶段的行为特征进行了详细描述（见表1），准确地记录了麻醉和复苏到各阶段所需要的时间。

本试验研究结果表明，在一定浓度范围内，日本对虾随着麻醉剂浓度的增加，麻醉所需要的时间不断缩短，同时伴随着复苏时间的不断增加，这与刀鲚[12]、锦鲤[21]、大黄鱼[22]、大西洋鲑[23]、中国对虾[20]等的研究结果一致。参照Marking等[17]的理想麻醉标准，将日本对虾的理想麻醉标准制定如下：能够在3 min内完全麻醉，移入清水后5 min内恢复到正常状态，且要求在复苏24 h后的成活率为100%。根据日本对虾在不同浓度MS-222作用下麻醉时间、复苏时间及复苏24 h后的成活率情况，将日本对虾的有效麻醉浓度的参考值建议为6 g/L。另外，Coyle等[18]用MS-222、乙二醇苯醚、丁香酚、苯唑卡因等麻醉罗氏沼虾发现，100 mg/L浓度的MS-222、乙二醇苯醚对罗氏沼虾无麻醉作用，而只有100mg/L丁香酚在较长的时间内才使罗氏沼虾处于麻醉状态；何新龙等[19]开展对日本沼虾的麻醉效果研究，结果表明即使高浓度的MS-222、乙二醇苯醚和苯唑卡因也对日本沼虾无麻醉作用；谢慧明等[15]研究结果表明MS-222对克氏原螯虾无麻醉效果。这些研究说明了部分虾类对麻醉剂选择的狭窄性，同时也说明同种麻醉剂对不同物种的麻醉效果不同，麻醉能力具有选择性。这将为扩大MS-222在虾类麻醉效果的应用提供理论参考依据。

3.2 麻醉后离水曝露时间对日本对虾复苏的影响

影响麻醉剂药效的因素很多,因此除了选择正确麻醉剂量和麻醉时间还涉及其他很多因素：诸如温度[19,24]、离水时间[20,25]及个体大小[25]。本试验还对日本对虾离水操作的安全时间进行了研究。本试验研究表明，在理想麻醉浓度下，规格相同的日本对虾在空气中曝露不同的时间后，再放入清水中进行复苏，对复苏后恢复正常的对虾进行24h的观察，记录其成活率。麻醉后的对虾在空气中曝露0～4 min后，复苏率和成活率均达到100%，说明日本对虾可以进行短时间的离水操作。但是在离水时间为6 min时，虽然还可以完全复苏，但成活率降到90%。当离水时间为8 min时，已经很难恢复到正常状态，成活率更是降到了65%。同时，随着离水曝露时间的增加，对虾复苏时间显著延长。这可能与对虾的用鳃呼吸的方式有关，对虾在海水中的麻醉状态下，其呼吸并未完全停止，而在离水曝露条件下，鳃腔内水的交换量减少，呼吸活动难以持续[24]。在本试验中，日本对虾在麻醉初期心率为119次/min，处于深度麻醉状态时心率为95次/min，说明MS-222对日本对虾麻醉效果明显，能够有效降低对虾呼吸频率和新陈代谢，抑制对虾的呼吸，抑制效果随着MS-222浓度的增加而增强。在同样的离水时间下，MS-222浓度越高，日本对虾复苏所需要时间越长，进一步证明了MS-222对日本对虾是一种有效的麻醉剂，这与日本囊对虾[25]的麻醉研究结果一致。

因此，在实际操作过程中，要注意控制麻醉后的离水时间，尽量缩短在空气中的停留时间。准确掌握好麻醉剂的剂量、麻醉时间及离水操作时间，对避免麻醉过度引起对虾死亡，对提高成活率具有重要意义。

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