乙型肝炎病毒表面抗原低水平阳性与乙肝病毒核酸载量的相关性

杨正南

(江苏省南京鼓楼医院集团仪征医院， 江苏 仪征 211900)

乙型病毒性肝炎(viral hepatitis type B)又叫乙肝，是临床上常见的传染性疾病。此病是由乙肝病毒(HBV)感染引起的。目前，我国的乙肝病毒携带者约占全世界乙肝病毒携带者的47.24 %。乙肝表面抗原 (HBsAg)是乙肝病毒的外壳，本身不具有传染性，只具有抗原性。因此，当患者的HBsAg呈阳性或低水平阳性时，则表明其可能感染了乙肝病毒。但是，不同的实验室对HBsAg低水平阳性的检测结果存在较大差异，这就有可能造成不同的诊断结果[1]。而对HBsAg是否呈低水平阳性的判断，直接关系到患者的诊断结果和后续治疗。因此，临床上积极研究对HBsAg低水平阳性样本进行有效确认的方法，对降低乙型病毒性肝炎的误诊率具有十分重要的意义。基于此，笔者对2014年6月至2016年5月期间江苏省南京鼓楼医院集团仪征医院收治的80例疑似HBsAg低水平阳性患者进行了以下研究。

1　资料与方法

1.1　一般资料

本次研究的对象为2014年6月至2016年5月期间江苏省南京鼓楼医院集团仪征医院收治的80例疑似HBsAg低水平阳性患者。在这80例患中，有男性患者58例，女性患者22例，其年龄为18～70岁，平均年龄为（35.25±4.64）岁。此项研究已得到该院医学伦理委员会的批准，且患者均自愿参与本次研究，并签署了参与本次研究的知情同意书。

1.2　方法

1.2.1进行血清HBsAg检测的方法 1）在检测当日的清晨，抽取本组患者5ml的空腹静脉血。2）将血样放置1 h后，对血样进行10min左右的离心处理（处理速度为3000 r/min），并分离出血清。3）采用磁微粒化学发光法对这些患者的血清样本进行HBsAg检测。在检测期间，检验人员须严格按照乙型肝炎表面抗原定量试剂盒（产品批号：20170317）的操作规程进行相关操作。使用的仪器为Autolumo A200 型全自动化学发光测定仪，试剂盒与仪器均来自郑州安图生物工程股份有限公司。在检验人员完成相关操作后，仪器可自动完成检测并判断监测结果，当患者血清HBsAg的结果＞0.05 IU/mL时，即可判断其血清HBsAg呈阳性。

1.2.2进行血清HBV-DNA载量检测 1）对经使用磁微粒化学发光法检测出血清HBsAg呈低水平阳性的血液标本进行编号，并留取标本中HBV-DNA的成分，以做为进行血清HBV-DNA载量检测之用。2）采用PCR-荧光探针法对带有编号的血液标本进行HBV-DNA载量检测。在检测期间，检验人员须严格按照乙型肝炎病毒核酸定量试剂盒上荧光定量聚合酶链反应的说明书进行相关操作。使用的仪器为美国ABI 7000 型实时荧光定量PCR仪，HBV-DNA呈阳性的判断标准为[2]：每毫升核酸拷贝数（Copies/ml）＞500。

1.3　统计学方法[3]

将本次研究中的数据录入到SPSS 22.0软件中进行处理，计量资料用（±s）表示，采用t检验，计数资料用%表示，采用X2检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2　结果

采用磁微粒化学发光法对这80例患者进行HBsAg检测的结果显示，在这80例患者中，仅有23例患者的HBsAg呈低水平阳性（占28.75 %）。然后，再采用PCR-荧光探针法对上述23例患者进行HBV-DNA载量检测。结果显示，在这23例患者中，只有15例患者的血清中含有HBV-DNA（占65.22 %），其HBV-DNA的平均核酸载量值为7.306。

3　讨论

在临床上，采用磁微粒化学发光法对患者进行HBsAg检测，并得出COI（乙肝表面抗原定量）的水平在1.00～50.00之间，即可认定其HBsAg呈弱阳性。虽然采用磁微粒化学发光法检测HBsAg结合了机体的抗体、抗原免疫反应与发光原理，具有检测的速度快、敏感度高、线性范围宽、试剂贮存期较长、操作简单等操作优势，但一旦遇到HBsAg的检测表现在弱阳性灰区时，就不能准确地判断患者是否感染了乙肝病毒。患者在感染了乙肝病毒之后，形成病毒的完整颗粒需要由病毒蛋白和核酸共同进行编码复制，而在HBV 编码的5个开放阅读框架中，HBsAg的编码区位于第3个阅读框架，HBsAg只是HBV-DNA的外壳蛋白，而其中是否含有HBV，并不能确定[4]。当HBV感染人体后，还存在一段时间的“窗口期”，即当人体感染HBV后，其机体的免疫功能会产生免疫反应，消灭HBV，但不能产生HBsAb (乙型肝炎表面抗体)。而HBsAb一般在患者感染急性乙肝病毒的后期或者HBsAg 消失一段时间后才会出现，但在这个“窗口期”内HBsAg和HBsAb 都无法被检出。即使PCR实时荧光定量检测技术可以准确、及时的诊断感染性疾病，但依然无法突破“窗口期”这个病毒复制与人体免疫机制的难题。

HBsAg 的出现常伴随HBV的存在 , 因此 HBsAg 是已感染 HBV 的标志。通常情况下，HBsAg存在于HBV感染患者的血液、唾液、乳汁、汗液、精液、阴道分泌物及其他分泌物中。一般在感染乙肝病毒2～6个月后，到其谷丙转氨酶合成量升高前的2～8 周这段期间内，可在患者的血清中检测出 HBsAg呈阳性。如果此时患者的HBsAg呈现出低水平阳性，则可使用PCR实时荧光定量检测仪来进一步检测其体内HBV-DNA的具体含量[5]。PCR实时荧光定量检测技术可以直接测定病毒核酸载量，它有效地融合了光化学技术、基因扩增与分子杂交机理，检测的灵敏度较高，可以充分实现对扩增产物的自动分析，并反映出HBV的实际感染状态。在本次研究中，笔者通过分析HBsAg 低水平阳性与HBV-DNA载量之间的关系可以准确诊断出HBsAg低水平阳性的HBV感染患者的感染情况，为医生的临床诊断提供有效、可靠的数据支撑，从而避免在无法准确诊断的情况下，使乙型肝炎病毒通过输血、器官移植等途径传播感染。

相关的临床研究结果表明，当患者HBsAg呈现低水平阳性，且其HBV-DNA载量的均值＜500时，即可表明其体内存在HBV的外壳，但不存在HBV-DNA，故不具有病毒的复制性和传染性；但是，当患者HBsAg呈现弱阳性或者阳性，且其HBV-DNA载量的均值＞500时，即可诊断其已经感染了HBV，其体内存在完整的HBV, 且具有病毒的复制性和传染性[6]。本次研究的结果显示，采用磁微粒化学发光法对这80例患者进行HBsAg检测的结果显示，在这80例患者中，仅有23例患者的HBsAg呈低水平阳性（占28.75 %）。然后，再采用PCR-荧光探针法对上述23例患者进行HBV-DNA载量检测。结果显示，在这23例患者中，只有15例患者的血清中含有HBV-DNA（占65.22 %），其HBV-DNA的平均核酸载量值为7.306。这说明，通过磁微粒化学发光法检测出的HBsAg低水平阳性患者，其体内不一定含有乙肝病毒，只能表明他们体内含有乙肝病毒的蛋白外壳或者呈现假阳性，也有可能其正处于乙肝潜伏期或慢性乙肝发展期，而蛋白外壳中是否含有乙肝病毒核酸，则需要进一步结合PCR-荧光探针法进行检测诊断。

[1]周丽英,蒋理.乙型肝炎病毒核酸载量与乙型肝炎病毒大蛋白的相关性研究[J].中华疾病控制杂志,2014,18(01)：39-42.

[2]李小永,温怀凯,陶洪群,等.乙型肝炎患者病毒核酸载量与乙型肝炎病毒外膜大蛋白含量相关性的研究[J].中国卫生检验杂志,2013,20(04)：793-794.

[3]赵倩瑜,张俊峰,卫红伟.乙型肝炎病毒表面抗原低水平阳性血清的病毒核酸载量分析[J].中国现代药物应用,2014,25(15)：28-29.

[4]黄劲松,张军霞,刘世国,等.乙型肝炎病毒表面抗原低水平阳性血清的病毒核酸载量分析[J].检验医学与临床,2014,23(06)：782-783.

[5]黄学忠,林佩佩,陈晓飞.乙型肝炎病毒核酸载量分析与血清标志物检测的应用评价[J].临床和实验医学杂志,2013,19(04)：311-312.

[6]赵碎娟,孙根妹,郑明波.HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗中血清表面抗原大蛋白水平与乙型肝炎病毒核酸之间的关系[J].中国卫生检验杂志,2012,14(04)04：818-820.