存放时间对代煎蒲公英汤剂质量的影响

2018-04-12孙文静杨慧彤石雪晶杨丽萍

中国医药科学 2018年5期

李青王慧孙文静杨慧彤石雪晶杨丽萍

1.河南中医药大学中医系，河南郑州 450000；2.河南中医药大学中西医结合基础学科，河南郑州 450046

中药汤剂是我国传统医学的精粹，至今也在疾病防治与治疗方面占据重要地位。在调查中发现，代煎中药已成为快节奏生活人群的主要选择[1]。由于代煎中药保存时间存在争议且无明确的相关研究，故代煎汤剂保存时间对其药效的影响值得探讨。本研究以单味代煎蒲公英汤剂为实验主体，以汤剂浓度[2]、pH值[3]、亚硝酸盐[4-5]、抑菌作用[6]四项内容探究随着存放时间的延长单味蒲公英汤剂的质量变化。

1　资料与方法

1.1　主要器材

紫外可见分光光度计1台（北京普析通用仪器有限责任公司，TU-1810）；pH计（安莱立思，PH-400型）；电热恒温水浴锅（北京长风仪器仪表公司，HH.SY21-Ni）；封闭式电夹板（上海雷韵，BGG-2.4）；低速离心机（北京医用离心机厂，LD4-2型）；全机械加码分析天平（万分之一）（上海新航仪器厂，TG328A）；游标卡尺（上海台海工量具有限公司，0～150mm）；生化培养箱（常州国华电器有限公司，250B）；手提压力蒸汽灭菌器（上海博讯实业有限公司，YXQ-SG46-280A 型）；麦氏比浊仪（北京亚欧德鹏科技有限公司，DP-MC1型）；麦氏比浊管（北京亚欧德鹏科技有限公司，18mm，6管/套）。

1.2　试剂

pH计标准缓冲液（浙江力辰仪器科技有限公司，pH4.00/500mL，pH6.86/500mL，pH9.18/500mL）；营养琼脂平面培养基（北京陆桥技术有限公司，CM107型号/250g）；氯化钡（国药集团化学试剂有限公司，500g/瓶）；硫酸溶液（国药集团化学试剂有限公司，500mL/瓶）；亚铁氰化钾（国药集团化学试剂有限公司，500g/瓶）；乙酸锌（国药集团化学试剂有限公司，500g/瓶）；硼酸钠（国药集团化学试剂有限公司，500g/瓶）；对氨基苯磺酸（山东浩中化工科技有限公司，100g/瓶）；N-1萘基乙二胺（天津市永大化学试剂有限公司，10g/瓶）；亚硝酸钠（国药集团化学试剂有限公司，500g/瓶）；冰乙酸（国药集团化学试剂有限公司，500mL/瓶）；盐酸（国药集团化学试剂有限公司，500mL/瓶）。

1.3　实验方法

1.3.1汤剂制备委托郑州市高新开发区九州通大学城大药房，机煎蒲公英全草600g，加水8000ml，机煎得浓度为0.1g/mL汤剂6000mL，取1600mL分别灌入容量为200mL的真空包装保存共8袋，200mL/袋。将剩余4400mL汤剂煎制成浓度为2g/mL汤剂220mL，分别灌入容量为200mL的真空包装保存共8袋，27.5mL/袋。

1.3.2不同存放时间汤剂浓度测定采用分光光度计法测定汤剂浓度。记录数据，观察每日各组汤剂浓度变化。

1.3.3不同存放时间汤剂酸碱度测定采用pH计法测定汤剂pH值。记录数据，观察每日各组汤剂酸碱度变化。

1.3.4不同存放时间汤剂亚硝酸盐含量测定用标准曲线法测定各组样品吸光度值，计算亚硝酸盐含量。记录数据，观察每日各组汤剂亚硝酸盐含量变化。

1.3.5不同存放时间汤剂抑菌效果测定采用抑菌圈大小评价法测定抑菌活性。记录数据，观察每日各组汤剂抑菌活性的变化。

1.4　统计学分析

采用统计学软件SPSS20.0版对数据进行统计分析，计量资料采用（x±s）表示，采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1　不同存放时间汤剂吸光度变化

代煎蒲公英汤剂浓度随时间整体呈上升趋势。与第0天组相比，各组差异均有统计学意义（P＜0.05）。说明存放时间对代煎蒲公英汤剂浓度有影响。见表1。

表1　保存时间对代煎蒲公英汤剂吸光度的影响（x ± s，n=3）

2.2　不同存放时间汤剂酸碱度变化

代煎蒲公英汤剂酸碱度随时间整体呈下降趋势。与第0天组相比，除1天组外，各组差异均有统计学意义（P＜0.05）。说明存放时间对代煎蒲公英汤剂酸碱度有影响。见表2。

表2　保存时间对代煎蒲公英汤剂pH值的影响（x ± s，n=3）

2.3　不同存放时间汤剂亚硝酸盐含量变化

代煎蒲公英汤剂亚硝酸盐含量整体随时间呈上升趋势。与第1天组相比，各组差异均无统计学意义（P＞0.05）。说明存放时间对代煎蒲公英汤剂亚硝酸盐含量的影响有限。见表3。

表3　保存时间对代煎蒲公英汤剂亚硝酸盐含量的影响（x ± s，n=3）

2.4　不同存放时间汤剂抑菌效果变化

代煎蒲公英汤剂抑菌效果整体随时间呈下降趋势。与第0天组相比，除第1天组外，各组差异均有统计学意义（P＜0.05）。说明存放时间对代煎蒲公英汤剂抑菌效果有影响。见表4。

表4　保存时间对代煎蒲公英汤剂体外抑菌疗效的影响（x ± s，n=3）

3　讨论

中药汤剂是临床常用的剂型之一。在调查中发现，代煎药物[7]因其快捷深受欢迎，部分人群为节约时间甚至会一次代煎多付，自行保存5～7d。由于代煎中药的保存时间存在争议且无明确的相关研究，故代煎汤剂保存时间对其质量的影响值得探讨。蒲公英是常用中药之一，药理特性等相关研究较为全面。为减少实验变量，更好的探究存放时间对汤剂质量的影响，故选取疗效确切的单味蒲公英作为实验主体。

中药汤剂质量检测是一项很复杂的科学，国内尚无系统的现代科学仪器和先进的检测手段对其质量进行检测[8]。大众常靠汤剂浓度、气味[9-10]、酸度等判断中药汤剂质量变化，且绝大多数中药汤剂为水煎剂，现有研究表明水中含有微量亚硝酸盐[4-5]，因此汤剂中亚硝酸盐含量是否超标也关系到汤剂的质量。因此参考汉方浸膏制剂的部分实验项目[11]、中国药典[12]、食品安全国家标准中亚硝酸盐与硝酸盐[12-13]的测定。根据蒲公英杀菌的药理作用[6、15]等，故选取药物浓度、pH值、亚硝酸盐含量、抑菌活性作为质量检测指标。

传统经验上，常以汤剂的色泽浓度来判断其质量，缺乏一定的科学性，分光光度计法是经典的测量有色物质含量的方法，本研究发现：蒲公英汤剂浓度随药物存放时间的延长呈上升趋势。目前，pH计法是测定中药酸碱度的常用测量方法，已有实验[3]测定蒲公英提取物的pH值，表明蒲公英提取物的pH值为弱性且酸与其质量和疗效有关，证明蒲公英pH值的测定对评判代煎蒲公英汤剂质量和疗效有意义。本研究发现：蒲公英汤剂的pH值随药物存放时间的延长呈下降趋势。众所周知，过量的亚硝酸盐和硝酸盐摄入会对人体产生危害甚至致癌，而亚硝酸盐和硝酸盐广泛存在于自然界的土壤、水域及植物中。故本实验以此为基点，选取经典用于测定亚硝酸盐含量的常规方法—盐酸萘乙二胺法，测定汤剂中亚硝酸盐含量。结果表明：亚硝酸盐含量均随药物存放时间的延长呈上升趋势，但亚硝酸盐含量最大值0.0372g，均未超过0.2g的国家标准中毒量[16]。蒲公英具有明确的杀菌消毒的药理作用，现有研究表明蒲公英水煎剂对金黄色葡萄球菌有抑菌、杀菌效果[17]。证明蒲公英具有体外抑菌作用，故采用测定抑菌圈大小进行蒲公英汤剂药效测定。结果表明：抑菌圈直径随药物存放时间的延长显著减小。说明代煎蒲公英汤剂抑菌效果随存放时间的延长呈下降趋势。

综上所述，存放时间对代煎蒲公英汤剂浓度、pH值、抑菌效果均有影响。对临床常用的代煎药除了严格控制煎药流程外，还需要严格控制存放时间，一般不应超过3d。

[参考文献]

[1] 路璐.传统与现代煎药方法的对比研究[J].中国医药科学，2012，2（18）：45-46.

[2] 林评兰，谢瑞芳，唐志鹏，等.基于综合评分法的蒲公英药材质量控制研究[J].中国药师.2015，18（11）：1855-1858.

[3] 田晔，李朝品，邓云.蒲公英提取物体外抗毛囊蠕形螨活性及皮肤安全性的实验研究[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2007（2）：133-136.

[4] Blanco D.高效液相色谱法测定自来水和蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐[J].国外医学（卫生学分册），1996，（5）：65.

[5] 闫潇娟，严丽君，胡雪峰，等.蔬菜生长与储藏过程中硝酸盐和亚硝酸盐含量变化[J].上海大学学报（自然科学版），2015，（1）：81-87.

[6] 霍佳楠.蒲公英水提物对金黄色葡萄球菌生物膜的影响[D].哈尔滨：东北农业大学：动物医学学院，2014：1-45.

[7] 戴雪荣，梁妙莲.中药汤剂机器煎煮与传统煎煮方法的优劣探讨[J].中外医学研究，2012，10（16）：92.

[8] 刘安.中药饮片标准汤剂制备与质量标准研究方法概述 [J].中国实验方剂学杂志，2017，23（7）：1.

[9] 许广桂.基于仿生嗅觉的中药材气味指纹图谱研究[D].广州：广东工业大学，2008：1-70.

[10] 邹慧琴.基于“气”仿生嗅觉系统在中药品质整体评价中的方法学研究[D].北京:北京中医药大学，2013：1-105.