Klk6、Her—2蛋白及Ki—67在子宫内膜癌中的表达及临床病理意义

邹云峰　熊雅波　杨春林

[摘要] 目的 探讨组织型激肽释放酶6（Klk6）、Her-2蛋白及Ki-67在子宫内膜癌中表达的意义。 方法 应用免疫組化检测正常增生期内膜、单纯性增生性内膜、复杂性不典型增生性内膜各19例和子宫内膜样腺癌38例中Klk6、Her-2蛋白、Ki-67的表达情况。利用统计学软件SPSS 17.0和Graphpad Prism 5进行统计学分析检测并探讨其意义。 结果 Klk6、Her-2蛋白、Ki-67在癌组织中表达高于其他病变（P<0.05），Klk6在不同肿瘤临床分期中表达有明显统计学差异（P<0.05）；而Klk6、Her-2蛋白在子宫内膜癌分级及淋巴结有无转移表达无统计学差异（P>0.05）。 结论 Klk6、Her-2蛋白、Ki-67在子宫内膜癌中的表达与肿瘤发生有一定的相关性，特别是Klk6与子宫内膜癌分期相关，对临床诊断、治疗及评估预后具有一定的价值。

[关键词] 子宫内膜癌；Klk6；Her-2蛋白；Ki-67；免疫组织化学

[中图分类号] R737.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）04-0025-04

[Abstract] Objective To investigate the significance of expression of tissue-specific kallikrein 6 （Klk6）， Her-2 protein and Ki-67 in endometrial carcinoma. Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of Klk6， Her-2 protein and Ki-67 in normal proliferative endometrium（n=19）， simple proliferative endometrium（n=19）， complex atypical hyperplastic endometrium （n=19） and endometrioid adenocarcinoma（n=38）. Statistical software SPSS 17.0 and Graphpad Prism 5 were used to detect and explore its significance. Results The expression of Klk6， Her-2 protein and Ki-67 in cancer tissues was higher than that in other lesions（P<0.05）. There was statistically significant difference in the Klk6 expression among different clinical stages（P<0.05）. There was no significant difference in the expression of Klk6 and Her-2 protein among different grades of endometrial carcinoma or in endometrial carcinoma with or without lymph node metastasis（P>0.05）. Conclusion The expression of Klk6， Her-2 protein and Ki-67 has some correlation with the occurrence of endometrial carcinoma， and has certain value for clinical diagnosis， treatment and prognosis evaluation， of which especially Klk6 is associated with staging of endometrial cancer.

[Key words] Endometrium carcinoma； Klk6； Her-2 protein； Ki-67； Immunohistochemistry

组织激肽释放酶基因家族（kallikreins，Klks）是广泛存在于人体各组织中编码丝氨酸蛋白酶的一组同源基因。现已发现Klks基因家族所编码的组织激肽释放酶共15种[1，2]，参与细胞到组织发生、发展的许多正常生理过程，如牙齿及神经、生殖系统的发育[3-5]等，此外，还与肿瘤的转移有关。大量研究表明Klks在许多肿瘤及非肿瘤疾病中有一定的表达差异，从而应用于临床诊断中，如Klk3即前列腺特异性抗原（PSA）已被广泛应用于前列腺腺癌的筛查，是诊断、预后、监测最重要的标记物之一[5，6]；也有研究表明Klk6在卵巢癌的发生发展、浸润转移等方面有一定作用[7]，但在子宫内膜相关病变中研究较少。Her-2基因是某些肿瘤分子靶向治疗检测基因之一，现临床对Her-2基因阳性的肿瘤分子靶向治疗具有良好的效果，如胃癌、乳腺癌等[8-11]。Ki-67是细胞增殖指数，对肿瘤预后的评估有一定作用。本实验通过检测正常增生期、良性增生及子宫内膜癌中的Klk6、Her-2蛋白的表达及Ki-67增殖指数，分析与临床病理参数的相关性，以探讨在子宫内膜癌发生发展中的作用，为子宫内膜癌的诊断、治疗、预后提供参考数据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集余姚市人民医院病理科2009年1月～2017年3月间存档资料，经病理明确诊断女性患者病例：增生期子宫内膜19例（A组），年龄30～54岁，平均（45.58±6.41）岁；单纯性增生19例（B组），年龄27～55岁，平均（46.21±6.59）岁；复杂性不典型增生19例（C组），年龄28～63岁，平均（50.50±9.68）岁；子宫内膜样腺癌38例（D组），年龄38～77岁，平均（59.15±9.45）岁。各组间年龄比较，差异无统计学意义（P>0.05）。38例子宫内膜样腺癌中：1级10例（D1）、2级11例（D2）、3级17例（D3）；淋巴结转移5例，无转移33例；27例Ⅰ期、4例Ⅱ期、7例Ⅲ期（按照2009 FIGO手术分期进行分期）。

1.2 免疫组化

Klk6抗体来自美国R&D;公司，Her-2、Ki-67抗体和SP免疫组化试剂盒均來自福州迈新生物技术开发公司。组织采用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，连续4 μm厚切片，采用链霉卵蛋白素染色（SP法）检测Klk6、Her-2、Ki-67蛋白。按SP免疫组化试剂盒（福州迈新生物技术开发公司）说明书进行基本步骤：切片脱蜡→冲洗→PBS稀释的山羊血清封闭→冲洗→加生物素标记二抗工作液→PBS冲洗→滴加适量的碱性磷酸酶标记的链霉卵白素工作液→PBS冲洗→DAB液显色→苏木精复染→梯度酒精脱水干燥→二甲苯透明→中性树胶封片→镜下观察。

1.3 结果判定

（1）Klk6蛋白染色结果判定标准：主要是子宫内膜腺上皮细胞质中呈棕色颗粒为阳性细胞，随机观察10个高倍镜视野（×400）并计数，每个视野至少计数100个细胞，取其平均值为该病例的细胞阳性率。视野中无细胞阳性着色或阳性细胞<10%为阴性（0），阳性细胞在10%～50%为阳性（1+），阳性细胞>50%为强阳性（2+）。（2）Her-2蛋白定位于细胞膜上，染色结果根据阳性信号强度及着色方式进行评估：无阳性细胞或膜阳性细胞<10%为阴性（0），>10%的细胞有微弱或难以察觉的膜着色或仅部分细胞膜着色为阳性（1+），>10%的细胞有弱或中等强度的完整“U”型膜着色为阳性（2+），>10%的细胞有中等或强的完整“U”型膜着色为阳性（3+）。Klk6及Her-2蛋白以免疫组化结果（1+）为阳性标准。（3）Ki-67定位于细胞核，胞核染为棕黄色或棕褐色视为阳性表达，Ki-67增殖指数评判标准：选择肿瘤细胞丰富、阳性细胞较多的热点区域，选择至少10个高倍镜视野，计算这些视野肿瘤细胞中阳性细胞的平均值（%），作为Ki-67的增殖指数。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0和Graphpad Prism 5软件进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Klk6蛋白在子宫内膜病变中的表达

Klk6蛋白在正常增生期子宫内膜，单纯性子宫内膜增生均不表达，阳性率分别为0（0/19）、0（0/19），复杂性不典型性增生阳性率100%（19/19），子宫内膜癌阳性率94.74%（36/38），Klk6蛋白在复杂性不典型性增生和子宫内膜癌中的表达水平明显高于良性子宫内膜病变（P<0.05）（表1，封三图4）。在子宫内膜癌1级、2级、3级中阳性表达无统计学差异（P>0.05）（表2）；在淋巴结转移与无转移之间表达无统计学差异（P>0.05）（表3）；但在不同临床分期中表达有明显统计学差异（P<0.05）（表4）。

2.2 Her-2蛋白在子宫内膜病变上的表达

Her-2蛋白在正常增生期子宫内膜阳性率为47.37%（1+，9/19），单纯性子宫内膜增生阳性率47.37%（1+，9/19），复杂性不典型性增生阳性率26.32%（1+，5/19），子宫内膜癌阳性率73.68%（1+，13/38；2+，12/38；3+，3/38），Her-2蛋白在子宫内膜癌中的表达水平明显高于增生期子宫内膜和其他内膜病变（P<0.05）（表5，封三图5）。在子宫内膜癌不同分级、有无转移及不同临床分期间表达无统计学差异（P均>0.05）（表6～8）。

2.3 不同子宫内膜病变Ki-67增殖指数的表达分析

Ki-67增殖指数在增生型内膜平均阳性率56.84%，单纯性子宫内膜增生平均阳性率33.42%，复杂性不典型性增生阳性率46.47%，子宫内膜癌阳性率55.68%，虽然Ki-67增殖指数在子宫内膜癌中表达高于单纯性增生（P<0.05）（封三图6，表9），但在子宫内膜癌不同组织学分级、是否转移及不同临床分期中无明显统计学差异（表10～12）。

3 讨论

子宫内膜癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一。近年来子宫内膜癌的发生率有上升趋势[12]，多发生于绝经后妇女，发病高峰在50～70岁。其发病率增高原因有多种，如人类寿命的延长使高龄妇女增多，从而内膜癌高发年龄人群基数增大；良好营养使雌激素水平相对增高；此外，初潮年龄过早、绝经后延、未产、肥胖、高血压、糖尿病等都可以影响子宫内膜癌的发生。通过大量研究表明，雌激素水平的升高及子宫内膜长时间接受雌激素的刺激是引起子宫内膜癌发生的关键。

Klk6蛋白受类固醇激素调控，在乳腺癌、卵巢癌、睾丸癌和前列腺腺癌等激素相关的恶性肿瘤中异常表达[3-5]，有研究表明Klk6可引起宫颈癌细胞增殖及转移[13]。本研究发现Klk6在子宫内膜癌中阳性表达明显高于正常增生期子宫内膜和其他子宫内膜病变（P<0.05），在子宫内膜癌1级、2级、3级中阳性表达无统计学差异（P>0.05）；但在不同临床分期中表达有明显统计学差异（P<0.05）。提示Klk6在子宫内膜癌的发生发展中起到一定的作用，与临床分期有一定的相关性。与佟丽波等[14，15]研究Klk6及Klk7在子宫内膜癌中的意义相一致。

Her-2基因是某些肿瘤分子靶向治疗检测基因之一，如胃癌、乳腺癌等[8，16，17]，本实验发现Her-2蛋白在子宫内膜癌中的表达水平明显高于正常增生期子宫内膜和其他子宫内膜病变（P<0.05）。但在子宫内膜癌不同分级及淋巴结有无转移间无统计学差异（P>0.05），提示Her-2基因在子宫内膜癌发生的早期起到一定作用。

Ki-67可检测癌细胞增殖指数，表示癌细胞增殖活性，对内膜癌的诊断与预后的评估起到一定的作用[18，19]。本实验显示Ki-67增殖指数在子宫内膜癌中表达高于单纯性增生，具有统计学差异（P<0.05），而在其他子宫内膜病变无明显差异。

Klks家族主要是编码丝氨酸蛋白酶[3]，即一种重要的蛋白水解酶，其中Klk6作用是降解细胞外基质中纤维蛋白，加强肿瘤细胞转移的可能[20]。Her-2是表皮生长因子受体家族成员之一，主要是通过与EGF结合从而促进细胞增殖及转移[21]。我们设想Klk6和Her-2同时表达是否加强肿瘤转移的可能性，双重判断预后，但由于本实验样本数较少，暂时未做相关统计，有待后续进一步研究。

综上所述，本研究提示Klk6、Her-2、Ki-67对子宫内膜癌的发生发展起到一定的作用。并且Klk6与临床分期有一定的相关性，且提示Klk6有可能成为临床早期筛查子宫内膜癌重要标志物，可能成为肿瘤治疗的有效靶点。

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（收稿日期：2017-11-01）