不同处理方式对血清中ALT检测结果的影响

刘建霞，宋凯霞

（山西大同大学生命科学学院，山西大同037009）

ALT是临床常用的血液检验指标，其检测值受血清处理方式的影响。血清的稳定性受到多种因素的影响，常见的有保存温度、保存时间、放置方式等等。本实验分析比较了上述影响因素对ALT检测的影响。

1 材料与方法

1.1 材料血样来源

按正规采血规范随机采集北京某医院同一天门诊患者的空腹静脉血40例于普通采血管内，要求无溶血、无脂血，于采集2 h内按照常规方法分离血清。

1.2 方法

1.2.1 血清样本处理

取血清样本于1.5 mL EP管中，在生化分析仪日立7180上测定ALT值，计算均值和标准差为即时ALT测定结果。然后将血清标本均匀分装于9个高压消毒的1.5 mL EP管中，每管200 μL，即分为9组，每组15份（包含每个人的血样）、编号。

将第1组标本密封置于常温17～28℃环境中（温度由空调控制）；第2组标本非密封置于常温17～28℃；第3组标本密封置于2～8℃冰箱；第4组标本非密封置于2～8℃冰箱；5～8组都密封置于-20℃冰箱内，其中6、8组的15份标本分别合并为1支样本为以后的反复冻融做准备；第9组密封置于-80℃冰箱内，整个过程在1 h内完成。

1、2组血清标本于存放2、4、8、24、48 h时间段测定ALT值；3、4组于存放2、4、8 h和1、2、3、7、10、14、21、28 d时间段测定ALT值；5～ 9组于存放1、2、3、7、10、14、21、28 d时间段测定，其中5、7组在 -20℃冰箱存放1周后开始做解冻实验，处理如下：第5组从冰箱中取出置于室温17～28℃（由空调调节）解冻10、20、40、60、90 min后，马上上机测定ALT值,第7组从冰箱中取出置于2～8℃冰箱下解冻10、20、40、60、90 min后，上机测定ALT值；6、8组在-20 ℃ 冰箱放置1、2、3、7、10 d时间段取出分别置于室温17～28℃、2～8℃冰箱下冻融，上机检测完后立即放回-20℃冰箱内保存，每次测定都在1 h内完成。各组在上机检测之前都在快速混匀器上混匀10 s。

1.2.2 检测方法

采用BCKMAN～7180全自动生化分析仪，以IFCC国际临床化学学会推荐的速率法测定谷丙转氨酶。每次检测前都进行校准品定标。确定校准值在规定范围内之后进行质控，再进行血清标本检测。ALT双试剂测定试剂盒、校准品、质控品均由九强生物技术公司提供。

使用全自动生化分析仪之前，擦拭探针，并对其比色杯及管道进行清洗，清除残留血液、蛋白质及其他杂物。

1.3 统计学方法

每次检测取3次检测结果的平均值。实验数据结果以±s表示。用SPSS24.0分析软件对数据进行分析，以0 h监测数据作为对照组。其余检测结果分别与对照组进行比较。利用单因素方差分析法进行分析，P＜0.05表示与对照组有差异。

2 结果与分析

2.1 不同保存温度对血清中ALT检测结果的影响

ALT对照组的检测值为（90.14±0.02）U/L，血清在-80℃下密封保存至28 d，检测值与对照组的差异均无显著性差异（P＞0.05）；血清于-20℃密封保存0～10 d，ALT检测值与对照组的差异无统计学意义，保存至14～28 d，ALT检测值均极显著下降，与对照组有极显著性差异；血清在2～8℃密封保存至3 d，ALT检测值与对照组差异不明显，无统计学意义，保存7～28 d，ALT检测值均极显著下降，与对照组有极显著性差异；血清在17～28℃密封保存0～1 d，ALT检测值于对照组差异无统计学意义，保存至2 d，检测值与对照组有极显著性差异，其中保存2～4 h内ALT检测值与对照组相比稍微变高，8 h之后ALT检测值呈下降趋势，见表1。

2.2 2种温度下不同密封状态对血清中ALT检测结果的影响

表1 不同温度、时间下血清中ALT检测结果/U·L-1

血清在2～8℃非密封保存0～8 h，ALT检测值呈现增高趋势，但与对照组的差异无统计学意义，1～14 d ALT检测值极显著增高，检测值与对照组的差异均有极显著性差异，其中1～10 d ALT检测值增高至10 d达到最高，14 d检测值下降；血清在17～28℃非密封保存0～2 h，ALT检测值与对照组的差异无统计学意义，4 h～2 d内ALT检测值与对照组的差异显著，其中4～8 h检测值呈增高趋势，至8 h达到最高，8 h之后检测值下降。正常血清为淡黄色透明液体，2 d后，血清标本因水分蒸发而浓缩，血清变浑浊，见表2。

2.3 不同解冻温度、解冻时间对血清中ALT检测结果的影响

表2 不同保存温度、密封状态下血清样本ALT检测结果/U·L-1

血清在-20℃保存7 d之后解冻。血清在2～8℃解冻10～90 min，ALT检测值与对照组的差异无统计学意义。其中，10～40 min检测值有下降趋势，40～60 min检测值升高，60 min之后检测值开始下降；血清在17～28℃解冻10～60 min，ALT检测值呈升高趋势，但与对照组的差异无统计学意义，至90 min，检测值与对照组有显著性差异，见图1。

2.4 不同解冻温度反复冻融对血清中ALT检测结果的影响

图1 ALT随解冻温度、时间变化图

血清在10d内于2～8℃和17～28℃反复冻融5次，ALT检测值与对照组的差异均无统计学意义，其中2～8℃和17～28℃反复冻融中，检测值均下降，2～8℃下降相对明显，见图2。

图2 ALT随反复冻融变化图

3 结论与讨论

血清内丙氨酸氨基转移酶活性测定方法（速率法）的原理：

NADH在340 nm处有特殊的吸收峰，ALT的活性由340 nm处吸光度的下降速率表示，血清中游离的丙酮酸又能消耗NADH[1]，使转氨酶的测定值偏高。

血清放置的时间、温度对其代谢动态变化影响很大。血清内的葡萄糖随着血清保存时间的延长逐渐降低[2-5]。并且随着温度的增加，葡萄糖酵解的速率增加，产生大量的丙酮酸[6]。丙酮酸增加，消耗NADH，使ALT的检测值增高。随着葡萄糖的消耗增加[7]，丙氨酸生成减少，进而影响ALT检测值的变化[7-8]；密封与非密封相比，检测结果偏高。原因可能是因为非密封导致样本内水分蒸发，ALT浓缩，浓度增大。且17～28℃环境与2～8℃环境相比，同一时间，密封情况下ALT浓度增加的快。

临床血液检验中，ALT检测值受到血清采集运输、血清保存方式、检验试剂种类、仪器的校准鉴定、参数设置、检测环境等多种因素的影响。其中，检验试剂种类、仪器的校准鉴定、参数设置可以通过实验室相应的控制措施将其误差降低到最小。谷丙转氨酶检测结果的准确性和稳定性与血清放置的温度高低、密封状态、时间长短、解冻方式有着紧密的联系。本实验以患者血清为材料，通过不同温度、时间、密封状态、解冻方式对血清进行处理来观察血清中ALT检测值的变化，从而找出适合血清的保存方式。研究表明：血清标本密封状态保存下，于17～28℃保存≤1 d；2～8℃保存≤3 d；-20℃保存≤10 d；-80℃保存≤28 d，对ALT检测结果无明显影响（P＞0.05）。血清非密封状态保存下，17～28℃保存≤2 h；2～8℃保存≤8 h，对ALT检测结果无明显影响（P＞0.05）；从-20℃冰箱转至2～8℃下解冻≤90 min或转至17～28℃ 下解冻 ≤60 min；17～28℃、2～8℃反复冻融5次，对ALT检测结果均无明显影响（P＞ 0.05）。

所以，为提高血清ALT测定结果的真实性和稳定性，血液标本采集后要尽早完成测定。若条件不许，应尽快分离血清较低温度保存。以确保ALT值的动态稳定性。

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