聚乙二醇干扰素α-2b治疗慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群和血清细胞因子水平变化*

罗丹，陈勇，陈清，万十千

临床常用的治疗CHB患者的抗病毒药物为α-干扰素和核苷（酸）类[1]。很多指南已将α-干扰素作为治疗CHB患者的一线药物推荐[2，3]，停药后持续性病毒学应答率（SVR）较高[4]。近年来，随着免疫学的不断发展，不断丰富了对CHB患者整体免疫调控网络失衡理论的认识[5]。本研究应用聚乙二醇干扰素α-2b治疗184例CHB患者，观察了疗效及其外周血T淋巴细胞亚群和血清细胞因子水平的变化。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2014年1月～2016年1月我科收治的CHB患者184例，男性101例，女性83例；年龄18～68岁，平均年龄（45.31±9.24）岁。病程 2～32年，平均病程（18.64±5.34）年。符合2010年发布的《慢性乙型肝炎防治指南》[7]的诊断标准，血清HBeAg阳性91例，患者在半年内未接受过免疫调节剂治疗。排除标准：①合并肝硬化或肝癌；②严重的肾功能不全；③孕产妇或哺乳期孕妇；④伴有原发性精神障碍或痴呆。本研究经我院医学伦理委员会批准同意。患者给出知情同意书。

1.2 治疗方法 将患者分成两组，分别给予恩替卡韦（中美上海施贵宝制药有限公司）0.5mg口服，1次/d或者在恩替卡韦治疗的基础上加用聚乙二醇干扰素α-2b（佩乐能，默沙东公司，批准文号：S20140 016）80 μg皮下注射，1次/w。干扰素治疗48 w，在停药后随访24 w。

1.3 相关指标检测 使用美国 Coulter公司生产的流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群；采用放射免疫法检测血清IL-6、INF-ɑ、IL-4（北京福瑞润康生物技术有限公司）；采用酶联免疫吸附法检测血清IL-17、TGF-β1和HBV标记物（上海恒远生物有限公司）；采用荧光定量PCR法检测血清HBV DNA、核转录因子 RORγt、Foxp3、IL-17mRNA；使用DIRUI-CS400b全自动生化分析仪检测肝功能指标。

2 结果

2.1 两组血清HBeAg和HBV DNA变化比较 在停药随访 24 w，联合组与恩替卡韦组血清HBV DNA阴转率分别为86.96%（80/92）和84.78%（78/92）（P＞0.05）；联合组血清 HBeAg阴转率为 28.89%（13/45），与恩替卡韦组的15.22%（7/46）比，无显著性差异（P＞0.05）。

2.2 两组血生化指标比较 治疗前，两组患者血清肝功能指标比较无显著性差异（P＞0.05）；治疗后，联合组患者血清TBIL、ALB、PTA水平与恩替卡韦组比较无显著性差异，ALT水平显著低于恩替卡韦组（P＜0.05，表1）。

2.3 两组治疗前后外周血T细胞亚群和NK细胞变化比较 治疗前，两组患者外周血CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞和CD4+/CD8+比值比较无显著性差异（P＞0.05）；治疗后，联合组患者 CD3+、CD4+细胞百分比和CD4+/CD8+比值显著高于恩替卡韦组（P＜0.05），CD8+细胞百分比显著低于恩替卡韦组（P＜0.05），两组患者NK细胞百分比无显著性差异（P＞0.05，表2）。

表1 两组血生化指标（±s）比较

表1 两组血生化指标（±s）比较

与恩替卡韦组比，①P＜0.05

例数 TBIL（μmol/L） ALT（U/L） ALB（g/L） PTA（%）联合组 治疗前 92 22.6±11.1 145.4±23.6 117.5±18.4 55.9±11.7治疗后 92 21.61±7.9 34.6±11.6① 40.7±8.4 79.4±15.8恩替卡韦 治疗前 92 21.6±10.8 143.61±24.3 115.9±16.6 54.8±10.5治疗后 92 19.1±12.6 64.6±20.5 41.5±11.2 81.7±12.4

表2 两组T细胞亚群和NK细胞(±s）比较

表2 两组T细胞亚群和NK细胞(±s）比较

与恩替卡韦组比，①P＜0.05

例数CD3+（%）CD4+（%）CD8+（%）联合组 治疗前 92 64.2±12.7 32.1±5.6 36.5±9.7治疗后 92 75.6±14.5① 42.7±10.3① 29.3±7.3①恩替卡韦 治疗前 92 63.6±11.4 31.6±5.0 37.8±10.2治疗后 92 66.8±14.4 36.7±8.5 34.8±8.5 NK（%）17.6±5.7 18.6±6.3 17.5±5.1 18.1±6.2 CD4+/CD8+比值1.9±0.5 1.4±0.6①1.1±0.4 1.0±0.5

2.4 两组血清细胞因子水平比较 治疗前，两组血清IL-6、IL-17、IL-4、INF-ɑ 和 TGF-β1 水平比较无显著性差异（P＞0.05）；治疗后，联合组血清 IL-6和INF-ɑ水平显著高于恩替卡韦组（P＜0.05），IL-17和IL-4水平显著低于恩替卡韦（P＜0.05），两组血清TGF-β1水平比较无显著性差异（P＞0.05，表3）。

2.5 两组血清Foxp3、IL-17和RORγt mRNA水平比较 治疗前，两组血清Foxp3、IL-17和RORγt mRNA水平比较无显著性差异（P＞0.05）；治疗后，联合组血清RORγt水平显著低于恩替卡韦组（P＜0.05），而Foxp3和IL-17 mRNA水平与恩替卡韦组比，无显著性差异（P＞0.05，表4）。

表3 两组血清细胞因子水平（pg/ml，±s）比较

表3 两组血清细胞因子水平（pg/ml，±s）比较

与恩替卡韦组比，①P＜0.05

例数 IL-6 IL-17 IL-4联合组 治疗前 92 2.1±0.3 4.2±1.2 5.6±1.5治疗后 92 6.8±1.2① 0.7±0.3① 1.4±0.5①恩替卡韦 治疗前 92 2.1±0.2 4.3±1.3 5.7±1.6治疗后 92 3.5±0.8 2.8±0.9 3.8±1.5 INF-ɑ 0.8±0.3 4.0±1.3①0.9±0.3 2.6±0.9 TGF-β1 25.1±4.3 25.6±5.0 25.2±4.2 25.4±4.8

表4 两组血清Foxp3、IL-17和RORγt mRNA水平（±s）比较

表4 两组血清Foxp3、IL-17和RORγt mRNA水平（±s）比较

例数 Foxp3 IL-17mRNA RORγt联合组 治疗前 92 4.32±1.02 0.12±0.10 1.76±0.54治疗后 92 4.52±1.85 0.10±0.01 0.86±0.31①恩替卡韦 治疗前 92 4.31±0.98 0.10±0.09 1.79±0.51治疗后 92 4.43±1.65 0.09±0.01 1.56±0.43

3 讨论

目前，全球CHB发病率高达3.5亿以上，并且据相关资料统计，在一些地区CHB发病率高居不下，严重威胁患者的生命健康。CHB治疗的关键是通过长期以及有效地抑制HBV DNA复制，从而达到治疗疾病的目的。临床上主要使用的抗病毒药物为核苷/核苷酸类药物和α-干扰素，而不少文献结果证明在合适的患者，干扰素治疗的临床疗效更佳[8]，而本文研究结果也证实了这一观点。

干扰素是上个世纪90年代初被批准开始在临床上使用的一种药物，其能在治疗病毒性肝炎时发挥抗病毒以及提高对免疫调控的作用。干扰素具有抗病毒作用的主要机制是其能与细胞膜上的干扰素受体相结合，诱导机体产生多种抗病毒蛋白，起到抑制病毒核酸表达，抑制病毒蛋白合成的作用，达到控制病毒复制的目的[9，10]。除此之外，研究发现干扰素还能增强细胞膜上人类白细胞抗原的表达，使细胞毒性T淋巴细胞易于识别和杀伤HBV感染的靶细胞，增强免疫细胞活性[11，12]。聚乙二醇干扰素α-2b由单聚乙二醇化的重组人干扰素α-2b组成，能抑制病毒的复制、抑制细胞增殖以及增强巨噬细胞吞噬活动、增强淋巴细胞对靶细胞的特异性细胞毒性等一系列免疫调控活动[13]。

近些年，随着免疫学的发展，整体免疫调控网络在CHB疾病进展中的作用逐步得到肯定，并逐渐得到完善[14]。有文献研究表明，在CHB患者外周血Th1/Th2细胞明显处于失衡状态，并且随着Th17细胞的发现和对其进行深入研究，发现其与各个T细胞亚群相互之间有些精细而复杂的平衡关系，并且构成了一个免疫调控网络[15]。也有相关研究表明，在CHB患者，外周血Th17细胞和血清细胞因子水平明显高于正常水平，并且Th17细胞百分比与肝脏炎症程度或肝纤维化程度存在着密切的相关性[16，17]。为此，本研究分析了聚乙二醇干扰素α-2b对CHB患者外周血CD4+T淋巴细胞整体免疫调控网络的影响。

诸多文献表明聚乙二醇干扰素对CHB患者具有较高的临床疗效，对病毒抑制的时间长，且安全性高[18，19]。在本研究结果中，治疗后联合组外周血CD3+、CD4+细胞百分比和CD4+/CD8+细胞比值明显高于恩替卡韦组（P＜0.05），CD8+细胞百分比明显低于恩替卡韦组（P＜0.05），证明聚乙二醇干扰素α-2b能提高CHB患者的免疫力，同时调节了患者免疫失调状态。并且，经过治疗后患者血清细胞因子水平明显下降，RORγt降低，从而改善了Th1和Th17细胞紊乱状况，从多个方面控制了整体免疫调控。

综上所述，聚乙二醇干扰素α-2b能通过调控细胞因子表达水平，从多个环节对CHB患者的免疫状态实现良好的调控，因而对CHB患者具有良好的临床运用价值。

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