PNPLA3 I148M基因多态性对乙型肝炎肝硬化的影响

于 红 孙 婧 辛永宁

(1.青岛大学医学院，山东 青岛 266021； 2.烟台市传染病医院肝病科，山东 烟台 264001；3.青岛市市立医院消化内科，山东 青岛 266021)

Patatin样磷脂酶域蛋白3 (patatin-like phospholipase domain containing 3, PNPLA3)基因主要在脂肪细胞和肝细胞中表达，编码脂肪滋养蛋白，该蛋白具有脂肪酶和甘油酯转乙酰酶活性，调节肝脏甘油三酯代谢[1-2]。PNPLA3 I148M (rs738409) 位点多态性是PNPLA3第148位的错义突变-胞嘧啶突变为鸟嘌呤(C/G)，编码发生异亮氨酸-蛋氨酸变异。近年来国内外多项研究表明PNPLA3 I148M基因多态性与NAFLD、酒精性肝病、丙型肝炎、慢性乙型肝炎等肝脏疾病密切相关，然而关于PNPLA3 I148M多态性与乙型肝炎肝硬化相关性的研究报道较少，本研究采用病例对照的研究方法通过对PNPLA3基因I148M 基因型检测和统计分析，探讨PNPLA3 I148M多态性对乙型肝炎肝硬化发病的影响。

1 资料与方法

1.1一般资料

选取2014年1月—2015年12月入住烟台市传染病医院肝病科病房的乙型肝炎肝硬化患者，同时排除其他原因引起的肝损害和肝硬化，诊断标准依据2000年西安全国病毒性肝炎及肝病学术会议《病毒性肝炎防治方案》[3]。对照组为2014年1月—2015年12月于该院健康体检无肝癌家族史及肝病病史的健康者150例。

1.2标本的采集

抽取肘正中静脉血4 ml，分装入两个EDTA抗凝管，-20℃冰箱保存，其中1管送博淼生物科技(北京)有限公司用于检测PNPLA3 I148M基因型，另1管进行生化指标检测。

1.3统计学方法

2 结 果

2.1研究对象基线资料

肝硬化组入组患者154例，其中男110例，女44例，年龄26～84岁，平均(52.75±9.590)岁，对照组为健康者150例，其中男92例，女58例，年龄30～67岁，平均(50.75±9.016)岁。两组研究对象的性别(χ2=3.473，P=0.062)、年龄(t=-1.872，P=0.062)比较差异均无统计学意义(P>0.05，表2)，具有可比性。

2.2乙肝肝硬化组与健康对照组的PNPLA3 I148M基因测序结果

I148M CC、GG和CG 3种基因型在乙肝肝硬化组和对照组中均被检出：乙肝肝硬化组CC型占31.17%，GG型占36.36%，CG型占32.47%；对照组CC型占45.30%，GG型占30.00%，CG型占24.70%，基因型分布差异有统计学意义(P<0.05, 表1)。结果显示与CC纯合子携带者相比，携带危险等位基因G的基因型增加乙型肝炎肝硬化的发生风险，P=0.011。

表1 两组的PNPLA3 I148M基因测序结果

注：以基因型CC(野生型)为参考。

表2 两组的临床特征及检测结果

注：a表示采用t检验，b表示采用卡方检验。

2.3乙肝肝硬化组与健康对照组的生化检测结果

分别对肝硬化组与健康对照组的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHOL)、血糖(GLU)水平进行了t检验(见表2)，经统计发现乙肝肝硬化组与健康对照组有明显的统计学差异(P<0.05)，提示乙肝肝硬化患者的生化指标明显高于健康对照组。

2.4乙肝肝硬化组与健康对照组PNPLA3基因多态性与各生化指标的logistic回归分析结果

分别对健康组的性别、年龄、生化指标与PNPLA3 I148M基因型进行了logistic回归分析，经分析发现，在健康组中，无论是性别、年龄，还是ALT、AST、TBIL、TG、CHOL、GLU水平均与PNPLA3 I148M基因型无相关性(P>0.05,表3)。而乙肝肝硬化组，经logistic回归分析发现性别、年龄、AST、TBIL、TG、GLU、WBC、PLT、HBeAg、HBVDNA水平依然与I148M基因型无相关性(P>0.05，表4)，而ALT、CHOL、CHE、HBsAg滴度、E值均与PNPLA3基因型具有显著相关性(P≤0.05,表4)。

表3 健康对照组NPLA3 I148M基因多态性与各生化指标的logistic分析结果

表4 肝硬化组PNPLA3 I148M基因多态性与各生化指标的logistic分析结果

3 讨 论

近年来，美国学者通过GWAS研究首次发现了PNPLA3基因多态性与NAFLD的相关性，此后，PNPLA3基因多态性与NASH、ALD、CHB、CHC、HCC等的相关性得到多项国外研究的进一步验证[4-8]，但是目前，关于PNPLA3基因多态性与乙型肝炎肝硬化的相关性研究缺乏相对大样本的循证医学证据。

本研究结果显示，在烟台地区的人群中存在PNPLA3 I148M多态性，包括CC、GG、CG三种基因型，且含有G等位基因的检出率明显高于CC纯合子。经统计学分析显示与CC纯合子携带者相比，携带危险等位基因G的CG、GG基因型增加乙型肝炎肝硬化的发生风险(P<0.05)，从某种意义上提示I148M基因多态性与乙型肝炎肝硬化的发生有关。

本研究发现乙肝肝硬化组患者的临床生化指标明显异常于健康人群，由于选取的健康组样本中排除了其他原因引起的肝损害和肝硬化的情况，所以在该组中，无论是性别、年龄，还是ALT、AST、TBIL、TG、CHOL、GLU水平均与PNPLA3I148M基因多态性无相关性(P>0.05)。同时在乙肝肝硬化组，经logistic回归分析发现性别、年龄、AST、TBIL、TG、GLU、WBC、PLT、HBeAg、HBVDNA水平依然与PNPLA3基因型无相关性(P>0.05)。在此之前，Mauro等[9]研究显示，62%的慢性乙型病毒性肝炎患者的PNPLA3 I148M 基因多态性与病毒HBeAg状态和HBVDNA载量无关。在乙肝肝硬化患者，无论是代偿期或者是失代偿期，由于肝功能储备能力下降，胆碱酯酶均有不同程度的下降，在本次研究也发现CHE与PNPLA3I148M基因多态性具有相关性(P< 0.05)，这就使得CHE成为肝硬化患者的一个重要临床生化指标。PNPLA3 I148M多态性与总胆固醇水平(P=0.032)的显著相关性在代谢综合征患者中已被证实[10]，本实验则证实了乙肝肝硬化患者的胆固醇水平与PNPLA3 I148M多态性也具有相关性，而且其是肝硬化的一个保护因素(P=0.032,OR=0.603，95%CI为0.308～0.959)。Krawczyk等[11]针对欧洲人的一项大样本的研究发现，携带PNPLA3 I148M基因型患者的肝脏硬度弹性与其它组相比有显著差异性(P=0.017)，且携带等位基因[G]的患者进展为肝纤维化的风险更高(OR=1.56，P=0.005)。本次研究中也发现E值(FibroScan)与PNPLA3 I148M的基因多态性有显著的相关性(P=0.01)，同时还发现PNPLA3 I148M的基因多态性与乙型肝炎肝硬化患者的HBsAg滴度有相关性，这项结论尚未得到其他临床数据的证实，需要我们进一步扩大样本含量进行充分论证。以上研究提示PNPLA3 I148M是乙肝肝硬化进展的一个重要因素，目前PNPLA3 I148M是西方国家肝脏疾病研究热点，在我国研究仍处在起步阶段。我们在今后的研究中应扩大样本含量、避免选择偏倚，尽可能在将来将PNPLA3 I148M多态性的评估应用到临床实践中以更好为临床工作提供帮助。

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[9] Mauro Vigano, Luca Valenti, Pietro Lampertico, et al. Patatin-Like Phospholipase Domain-Containing 3 I148M Affects Liver Steatosis in Patients With Chronic Hepatitis B[J]. Hepatology， 2013, 58: 1245-1252.

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