角质细胞生长因子对人牙龈上皮细胞迁移的影响

刘延丰

（广东省江门市口腔医院 江门 529000）

角质细胞生长因子是一种特异性的高效促上皮细胞增殖的生长因子，在损伤修复的过程中存在重要作用。角质细胞生长因子最初是从人胚胎肺成纤维细胞的培养上清中分离并纯化的，是成纤维细胞生长因子家族中的一员[1]。本研究旨在探讨角质细胞生长因子对人牙龈上皮细胞迁移中的影响。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 材料收集和分离 选取1例下颌阻生牙拔除患者手术切除的健康牙龈组织，分为9块重复试验3次。经磷酸缓冲盐溶液冲洗后，置于中性蛋白酶（分散酶）中，于4℃坏境下过夜；收集皮片，置入0.25%胰酶与0.02%乙二胺四乙酸（比例为1∶1）混合液中，37℃环境中放置10～15 min，经吹打、过滤后收集单细胞悬液，并加入SKF上皮细胞培养液中，以10×104/ml的密度接种于培养瓶中；细胞铺满80%的培养瓶时，采用0.25%胰酶消化后接种传代。本研究选择第2～3代细胞进行试验。

1.2 细胞培养 于6孔板中接种牙龈上皮细胞，细胞铺满后，制备一个80 μm宽的划痕并标记，作为细胞迁移基点。用磷酸缓冲盐溶液清洗细胞3次，去除划下的细胞，加入培养基，观察组培养基中加入角质细胞生长因子15 ng/ml，对照组不添加。两组培养基均置于37℃、5%CO2的培养箱继续培养。

1.3 观察指标 于48 h、96 h、144 h后，每组取10个迁移距离最大的不同点进行测量，以平均值作为牙龈上皮细胞迁移距离。

1.4 统计学分析 数据处理采用SPSS20.0统计学软件，计量资料以表示，采用t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 细胞培养结果分析 原代培养人牙龈上皮细胞3～5 d后，可见细胞贴壁生长，细胞展开后为多角形，呈典型铺路石样，上皮细胞的培养特征较为明显。

2.2 两组人牙龈上皮细胞迁移距离比较 观察组在48 h、96 h、144 h后的人牙龈上皮细胞迁移距离均大于对照组，P＜0.05，差异具有统计学意义。见表1。

表1 两组人牙龈上皮细胞迁移距离比较（μm，x±s）

3 讨论

划痕实验是体外试验中最常用的一种检测创伤愈合的模型，能够有效模拟创伤愈合初期由细胞伸展、增殖、迁移覆盖创面的过程[2]。因此本研究选择划痕实验观察角质细胞生长因子对人牙龈上皮细胞迁移中的影响。

角质细胞生长因子具有促进小鼠角质细胞有丝分裂的作用，因此被定名为角质细胞生长因子[3]。此外，角质细胞生长因子具有肝素结合特性，经基因测序证实为成纤维细胞生长因子家族的第七个成员，因此被称作为FGF-7，其受体主要分布于上皮细胞。研究证实[4～5]，胚胎、新生儿及成人上皮细胞起源的成纤维细胞和来自皮肤、角膜、肺、乳腺、肝、肾、胃肠道、膀胱、卵巢、前列腺等器官的间质细胞以及血管内皮细胞、平滑肌细胞均可表达角质细胞生长因子，但单核细胞、淋巴细胞、巨噬细胞、黑色素细胞、内皮细胞不表达[5]。杨云[6]研究显示，角质细胞生长因子可有效促进表皮细胞迁移、增殖，利于皮肤创伤愈合。

本研究结果显示，原代培养人牙龈上皮细胞3～5 d后，可见细胞贴壁生长，细胞展开后为多角形，呈典型铺路石样，上皮细胞的培养特征较为明显；观察组在48 h、96 h、144 h后的人牙龈上皮细胞迁移距离均大于对照组（P＜0.05）。综上所述，角质细胞生长因子可促进人牙龈上皮细胞增殖和生长，但目前对于角质细胞生长因子促进细胞迁移的机制尚未明确，有待进一步研究。

[1]Katsirntaki K,Mauritz C,Olmer R,et al.Bronchoalveolar sublineage specification of pluripotent stem cells:effect of dexamethasone plus cAMP-elevating agents and keratinocyte growth factor[J].Tissue Eng Part A,2015,21(3-4):669-682

[2]白燕青,徐倩,曾通旭,等.携带低氧诱导因子-1α及角质细胞生长因子的减毒沙门菌TPHK的构建及其在低氧应激大鼠胃肠组织中的表达[J].中国生物制品学杂志,2017,30(2):137-140

[3]邱其周,程贵辉,熊伟,等.角质细胞生长因子对吸入高体积分数氧新生大鼠肺转化生长因子β1表达的影响[J].中华实用儿科临床杂志,2015,30(14):1080-1082

[4]宗宪磊,陆海滨,祁佐良,等.合成角质细胞生长因子活性短肽促进表皮细胞增殖的实验研究[J].组织工程与重建外科杂志,2016,12(1):1-5

[5]杨婷.KGF-2体外促角膜上皮细胞和角膜基质细胞增殖及迁移作用研究[A].中国生物工程学会2014年学术年会暨全国生物技术大会论文集[C].浙江:中国生物工程学会,2014

[6]杨云.角质细胞生长因子促进表皮细胞迁移研究[J].卫生职业教育,2016,34(13):98-100