血府逐瘀胶囊对流产大鼠血瘀型产后恶露不绝治疗作用研究*

王 梓 ，王 帆 ，杨欣莹 ，康 利 ，王 蕾

产后恶露不绝指的是产后持续3周以上出现阴道不规则出血，伴血块或坏死蜕膜组织成分血液物质，中医认为，产后恶露不绝多因产后冲任不调，气血不足，气血运行不畅有关，导致瘀血内滞、新血不得归经[1－2]。血府逐瘀汤临床上可用于治疗血瘀等瘀症的治疗，本实验通过复制大鼠流产模型，观察血府逐瘀胶囊对流产大鼠血流变、血红蛋白、血小板聚集功能的影响，进一步探讨血府逐瘀胶囊对血瘀型产后恶露不绝的治疗作用和机制。

1 材料

1.1 实验药物及试剂 血府逐瘀胶囊药粉由天津宏仁堂药业有限公司提供，砖红色粉末，每袋2.5 kg，批号E03023。益母草膏：棕黑色膏状半流体，广西维威制药有限公司生产，批号160304。米非司酮片：每片25 mg，华润紫竹药业有限公司生产，批号：43160201。米索前列醇片：每片0.2 mg，华润紫竹药业有限公司生产，批号：43160315。胶原诱导剂：1 mL，HELENA，LOT4－16－5368,EXP11－17。ADP 诱导剂：1 mL，HELENA，LOT7－16－5366，EXP6－17。CD34抗体：0.1 mL，武汉博士德，批号10CM130。

1.2 实验动物 SD大鼠，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。许可证号：SCXK（京）2012－0001。雄性 30只（体质量 300～320 g），雌性 70只（体质量200～220 g）。动物饲养在具有实验动物使用许可证[许可证号：SYXK（津）2011－0003]的实验环境内，每日供给北京科澳协力饲料有限公司生产的普通鼠全价颗粒饲料，产品许可证号：SCXK（京）2014－0010。

1.3 实验仪器 全自动血球计数器，MEK－6318K，日本光电；血小板聚集仪，AggRAM，海伦娜；血流变仪，LG－R－80（A 型），北京世帝科学仪器有限公司；ASP200S自动真空组织脱水机；Leica EG1150H自动生物组织包埋切片机；HMIAS－2000高清晰度数码显微图像分析系统。

2 方法

2.1 造模方法 大鼠适应性饲养1周后，合笼当日的白天，雌鼠与雄鼠临笼摆放，当日下午5时将雌鼠与雄鼠以2∶1合笼，次日早晨进行阴道栓和阴道涂片检查，以发现阴道栓或者大鼠精子当天为受孕第1天，连续4 d，剔除4 d后未检出阴道栓或大鼠精子的雌性大鼠，选取10只受孕大鼠作为正常对照组，其他受孕大鼠于受孕第7天分别灌胃米非司酮（8.3 mg/kg，上午 8:00）和米索前列醇（0.1 mg/kg，下午5:00），灌胃体积10 mL/kg。给药第1天灌胃米索前列醇后，阴道内置干棉球1个，第2天以阴道有流血判断流产模型的复制成功。给药同时给予流产大鼠冷水浴，并适当断食，制备早孕流产血瘀大鼠模型[3-5]。

2.2 动物分组 将未流产大鼠作为正常对照组，将流产雌性大鼠按体质量随机分为5组（模型对照组、血府逐瘀高、中、低剂量组、阳性药对照组），每组10只，随机编号，用苦味酸在大鼠不同部位做标记进行区分。

2.3 给药方法 各组大鼠于受孕第8天开始按相应剂量灌胃给药，灌胃相应受试药液10 mL/kg，1 次/日，各剂量分别为 1.92、0.96、0.48 g 药粉/kg（分别相当于临床人用剂量24、12、6倍）。正常对照组、模型对照组灌胃等体积溶媒介质纯净水、阳性药对照组灌胃益母草膏3 mL/kg，相当于临床人用剂量12倍。连续给药7 d。

2.4 观察指标 造模期间观察大鼠生活状态，末次给药后1 h，腹腔注射4.5%戊巴比妥（1 mL/kg）麻醉，腹主动脉取血，部分以肝素1∶9抗凝，用于检测血流变指标；部分以3.8%枸橼酸1∶9抗凝，用于检测血小板聚集率[6-7]，另取10 μL用于血球计数检测。解剖子宫，并置于12%中性福尔马林中固定，HE染色及免疫组化法检测CD34抗原。

2.5 统计学方法 使用SPSS 17.0软件进行统计学分析，实验数据用平均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 血府逐瘀胶囊对产后血瘀大鼠存活状态的影响 与正常对照组相比，模型组对照组大鼠发生较大变化，主要表现为少动、精神不振、炸毛、体态偏瘦、部分有稀便。血府逐瘀高、中剂量组及阳性药组较模型组相比，大鼠生存状态有较大改善，趋近于正常组，低剂量组改善不明显。

3.2 血府逐瘀胶囊对产后血瘀大鼠血流变学及血小板聚集功能的影响 模型对照组大鼠与正常对照组相比，全血黏度、血浆黏度显著增加（P<0.05，P<0.01）。与模型对照组相比，血府逐瘀胶囊高、中剂量组可明显降低全血高切、低切、血浆黏度（P<0.05，P<0.01），从而改善大鼠血液黏浓凝滞的状态。在以ADP及胶原为诱导剂诱导下，模型对照组大鼠与正常对照组相比，血小板聚集率明显增大（P<0.01），说明模型对照组大鼠血液处于血小板功能亢进及高凝血因子状态。与模型对照组相比，血府逐瘀胶囊高、中剂量组可以不同程度的降低血小板聚集，尤以高剂量组为佳。见表1及图1、2。

表1 血府逐瘀胶囊对产后血瘀大鼠血流变学及血小板聚集功能的影响（x±s）Tab.1 Effects of Xuefu Zhuyu capsules on blood rheology and platelet aggregation function in abortion rats（x±s）

图1 以ADP为诱导剂的大鼠血小板聚集图Fig.1 Platelet aggregation of rats induced by ADP

图2 以胶原为诱导剂的大鼠血小板聚集图Fig.2 Platelet aggregation of rats induced by collagen

3.3 血府逐瘀胶囊对产后血瘀大鼠RBC及HGB含量的影响 与正常对照组相比，模型对照组红细胞及血红蛋白含量显著降低（P<0.05，P<0.01）。血府逐瘀胶囊高中剂量组可以显著增加模型大鼠RBC及 HGB 含量（P<0.05，P<0.01），能一定程度上改善产后血瘀大鼠血虚的状况。见表2。

表2 血府逐瘀胶囊对产后血瘀大鼠血液中RBC及HGB含量的影响（x±s）Tab.2 Effects of Xuefu Zhuyu capsules on the contents of RBC and HGB in abortion rats（x±s）

3.4 血府逐瘀胶囊对产后血瘀大鼠子宫MVD的影响 MVD是评估血管生成的指标之一，CD34标记血管内皮细胞的特异性高，在组织有血瘀的情况，经活血化瘀治疗后新生血管改善微循环，HE染色结合免疫组织化学染色标记CD34结果显示空白对照组子宫内膜组织排列好。与空白对照组相比，模型组子宫内膜和内膜下血管数量明显减少。与模型对照组相比，高、中、低及阳性组有不同程度改善，血管数量有所增加，以阳性组和中剂量组较为明显。见图3。

4 讨论

产后恶露一词源自汉代《金匮要略·妇人产后病脉证治》中“产后七八日，无太阳证，少腹坚痛，此恶露不尽”，提出了产后恶露不尽与产后瘀血内阻兼阳明腑实的证治观点[8]中医认为，产后恶露不绝发生的机制为冲任为病，气血运行失常所致，其病因主要是气虚、血瘀、血热[9-11]。产后血室正开，寒邪内侵胞宫与血相结，寒凝血瘀，或七情所伤，气滞血瘀，或气虚运血无力，余血滞留为瘀，或胞衣残留，影响冲任，总之瘀血不去，新血不得归经而出现恶露不绝。

图3 血府逐瘀胶囊对产后血瘀大鼠子宫MVD的影响Fig.3 The effects of Xuefu Zhuyu capsules on the uterus MVD of rats

血府逐瘀汤，中医方剂，为理血剂，具有活血化瘀，行气止痛之功效。该方是清代名医王清任所创，主治血瘀证等，药方始收于《医林改错·上卷》。全方由当归、生地等11味中药组成[12]。本实验通过复制的大鼠早孕流产模型，较大程度上模拟临床上产后血瘀所致的恶露不绝等临床症状。希望阐明血府逐瘀胶囊对产后恶露不绝的治疗作用及机制。

模型大鼠经过血府逐瘀胶囊治疗后，经血流变和血小板聚集功能检查发现，血府逐瘀胶囊能较大程度改善流产大鼠血瘀等症状，降低模型组大鼠全血及血浆粘度，改善血液黏稠凝滞状态，纠正凝血功能，降低血小板聚集率，增加大鼠血液中血红蛋白和红细胞含量，改善大鼠血虚症状。

CD34抗原是一种阶段特异性白细胞分化抗原，分子量100-120KD，选择性表达造血干细胞、祖细胞及血管内皮细胞的表面。CD34是高度糖基化N型跨膜蛋白[13]，CD34在新生血管内皮中表达远远大于非新生血管内皮，提示高度表达应该和新血管生成有密切的关系，故CD34为比较敏感的血管内皮标志物[14]。采用CD34抗原免疫组化法测量子宫微血管密度，能较为直接地反映出流产大鼠经过治疗后的子宫血管再生功能[15-16]，经过血府逐瘀胶囊的治疗，HE染色结合免疫组织化标记CD34结果显示血府逐瘀胶囊高剂量组大鼠与模型组相比，子宫膜组织排列较为整齐，子宫内膜和内膜下新生血管明显增多，微循环得到一定程度上的改善。

通过本实验研究，血府逐瘀胶囊具有除瘀血生新血的综合疗效，能改善血液浓、黏、滞的状态，改善红细胞变形能力，降低红细胞聚性，抑制血小板聚集从而改变产后瘀血症状，促进血管新生，对产后血瘀、恶露不绝具有较好的治疗作用。

[1]杨 兵.生化汤联合补中益气汤加减治疗气虚血瘀型产后恶露不绝42例的临床观察[J].陕西中医，2016，37(2):213-215.

[2]刘超萍.中医对产后病血瘀证的研究概况[J].湖南中医杂志，2010,26(1)：115-116.

[3]康旭亮，周爱康等.益母安宫胶囊对药物致早孕大鼠流产的影响[J].中国实验方剂学杂志，2006,12(7):49.

[4] 梁 杰，尹登科，李白坤,等.桃红四物汤对药物致不完全流产早孕大鼠的血管生成及Ang-1，Ang-2，Tie-2表达的影响[J].中国中药杂志，2013，38(21):3732

[5] 姚明辉，贡沁燕，陈林爱，等.米索前列醇与米非司酮对早孕大鼠和小鼠的流产作用[J]．新药与临床，1993，12(6):331-332.

[6] 彭 欣,夏 雷,李继贵,等.血虚大鼠血流变和凝血功能的变化研究[J].中国血液流变学杂志，2006,16(2):175-176.

[7] 彭 欣,秦 林,邓华亮，等，四物汤对血虚模型大鼠血流变和凝血功能的影响[J].山东中医药大学学报，2008,32(2):165.

[8] 陈宝艳，李坤寅，曾 蕾.从中医体质论治产后恶露不绝的临床研究[J]．辽宁中医杂志，2012,39(4):702-704.

[9]张 华，生化汤合补中益气汤治疗气虚血瘀型产后恶露不绝36 例[J].山西中医，2010,26(7)：24.

[10]张 兰，侯秀环.益宫颗粒治疗产后气虚血瘀恶露不绝100例[J].中医临床研究，2011,3(21)：61.

[11]胡 红.血府逐瘀汤治疗产后恶露不绝60例[J].中国中医药科技，2012,19(2):185.

[12]樊巧玲.血府逐瘀汤的应用与研究概况[J].上海中医药杂志,1987,5(33):43-45.

[13]柏树令，赵丹.CD34抗原的生物学特性及临床应用[J].解剖科学进展，2005，11(1):54-56,60.

[14]邹 萍，向建平，陈 志，等，急性髓系白血病细胞CD34抗原表达特点和临床意义[J].中华血液杂志，1994,15(7)：339-341.

[15]苌凤锦，梁 杰，彭代银，等,生化糖浆对药物致不完全流产早孕大鼠子宫内膜血管新生及作用机制研究[J].安徽医学，2015,36(12):1449.

[16]陈素琴，范秀华，尹桂然，等.放置IUD出血子宫内膜中血管内皮生长因子及CD34含量的研究[J].中国妇幼保健,2006,21:391-392.