血府逐瘀方不同制剂中挥发性成分的GC-MS分析*

于卉娟，杨　帆，江振作，王跃飞，杨欣莹

血府逐瘀方不同制剂中挥发性成分的GC-MS分析*

于卉娟1，2，杨帆1，2，江振作1，2，王跃飞1，2，杨欣莹3

（1.天津中医药大学，中医药研究院，天津市现代中药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地，天津300193；2.天津国际生物医药联合研究院，中药新药研发中心，天津300457；3.天津宏仁堂药业有限公司，天津300385）

［目的］研究血府逐瘀方不同制剂中的挥发性成分。［方法］采用顶空气相色谱-质谱联用法（HS-GC/MS）分析血府逐瘀胶囊、软胶囊、片剂及口服液中的挥发性成分，通过NIST-10标准谱库检索各挥发性成分，采用面积归一化法计算各挥发性成分的相对百分含量。［结果］血府逐瘀胶囊中鉴定了21个挥发性成分，主要为乙酸、苯甲醛、藁本内酯、2-甲基丁醛等。血府逐瘀软胶囊中鉴定了10个挥发性成分，主要为酯类化合物。血府逐瘀片中鉴定了22个挥发性成分，主要为柠檬烯、3-甲基丁醛、藁本内酯、2-甲基丁醛等。血府逐瘀口服液中鉴定了5个挥发性成分。［结论］构建的HS-GC/MS法可用于血府逐瘀方不同制剂中挥发性成分的分析，为血府逐瘀制剂质量控制研究提供依据。

顶空气相色谱-质谱联用法；血府逐瘀方；挥发性成分

挥发油是中药及复方中的一类重要成分，具有止咳、平喘、祛痰、抗菌、消炎、祛风、解热等作用［1］。李煌等［2］采用气相色谱-质谱联用法（GC-MS法）分析栝楼桂枝汤及其入脑的挥发性成分，认为挥发性成分可通过血脑屏障发挥治疗作用，间接改善脑卒中引起的肢体痉挛等症状。宿树兰等［3］研究报道，香附四物汤中的挥发性成分可显著抑制子宫平滑肌收缩。近年来，GC-MS法成为研究挥发性成分的重要手段，具有操作简单，分析速度快，灵敏度高，样品用量少等特点［4］。

血府逐瘀方始载于清代医家王清任的《医林改错》［5］，具有活血祛瘀，行气止痛的功效，由柴胡、当归、生地、赤芍、红花、炒桃仁、麸炒枳壳、甘草、川芎、牛膝及桔梗组成，主治气滞血瘀所致的胸痹、头痛日久、痛如针刺而有定处、内热烦闷、心悸失眠、急躁易怒等［6］。此方中多味药材含有挥发性成分，如当归、川芎、柴胡等［7-11］。此血府逐瘀方为基础，采用现代制药工艺研究开发了血府逐瘀胶囊、软胶囊、片剂、口服液等，广泛应用于临床心脑血管疾病的治疗。目前，血府逐瘀不同剂型中挥发性成分的研究鲜见报道。

采用顶空气相色谱-质谱联用法（HS-GC/MS）分析血府逐瘀胶囊、软胶囊、片剂及口服液中的挥发性成分，通过NIST-10标准谱库检索各挥发性成分，采用面积归一化法计算各挥发性成分的相对百分含量，为血府逐瘀不同剂型质量控制提供依据。

1　材料

1.1仪器BRUKER SCION 456GC-TQ型气相色谱-质谱联用仪（美国布鲁克公司），BRUKER顶空进样器（美国布鲁克公司），NIST-10标准谱库，中药粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司），AR-2140电子天平［奥豪斯仪器（上海）公司］。

1.2试药血府逐瘀胶囊（TJHRT，批号：E03066，标为HC），血府逐瘀片（SXHT，批号：140903，标为TA1），血府逐瘀片（CQXEA，批号：150103，标为TA2），血府逐瘀软胶囊（JLSHNSH，批号：20140903，标为SC），血府逐瘀口服液（JLADYB，批号：1412030，标为OL1），血府逐瘀口服液（SDHJT，批号：1404007，标为OL2）。

2　实验方法

2.1供试品的制备血府逐瘀胶囊：除去胶囊壳，取样品粉末3 g，精密称定，置于顶空进样瓶中，备用。血府逐瘀软胶囊：除去软胶囊壳，取样品溶液1g，精密称定，置于顶空进样瓶中，备用。血府逐瘀片：粉碎，取样品粉末3 g，精密称定，置于顶空进样瓶中，备用。血府逐瘀口服液：移取样品溶液2 mL，精密移取，置于顶空进样瓶中，备用。

2.2HS-GC/MS分析条件

2.2.1顶空条件顶空平衡时间：30 min，进样针温度：90℃，顶空震荡室加热温度：95℃。

2.2.2气相色谱条件色谱柱VF-5ms（30m×0.25mm× 0.25 μm，美国安捷伦公司）；程序升温：色谱柱初始温度40℃，保持3 min，以10℃/min升温速率升至280℃，保持8 min；接口温度：280℃；载气：高纯氦（纯度＞99.999%）；流速：1 mL/min；分流比为10∶1；进样量：1 mL；溶剂延迟：1.5 min。

2.2.3质谱（MS）条件电离方式：EI；能量：-70 eV；离子源温度：230℃；四级杆温度：220℃；全扫描模式，质量扫描范围：43～500 amu。

3　结果与讨论

3.1血府逐瘀不同制剂HS-GC/MS分析采用上述优化的HS-GC/MS条件，对血府逐瘀胶囊、软胶囊、片剂及口服液挥发性成分进行分析，图1 A、B、C、D分别是血府逐瘀胶囊、软胶囊、片剂及口服液HS-GC/MS总离子流色谱图。

通过对上述血府逐瘀不同剂型挥发性成分的分析，血府逐瘀胶囊中鉴定了21个挥发性成分，血府逐瘀软胶囊中鉴定了10个挥发性成分，血府逐瘀片（TA1）中鉴定了22个挥发性成分，血府逐瘀口服液（OL1）中鉴定了5个挥发性成分。血府逐瘀不同剂型中挥发性成分的差异较大，主要是由于不同剂型的生产工艺不同：血府逐瘀胶囊是取炒桃仁半量、当归、赤芍、麸炒枳壳、川芎、柴胡粉碎成细粉，与其余红花等5味及剩余炒桃仁的水煎液稠膏制成［6］。血府逐瘀片是采用部分药材打粉入药、部分药材经提取后入药方式制成。软胶囊及口服液采用复方中全部药材经提取后制成，挥发性成分损失较多［12］。因此，血府逐瘀软胶囊、口服液中挥发性成分较血府逐瘀胶囊、片剂中的少。

3.2血府逐瘀不同制剂挥发性成分分析血府逐瘀不同剂型挥发性成分经NIST-10标准谱库检索，同时查阅相关文献［13-16］鉴定，采用面积归一化法计算各挥发性成分的相对百分含量，结果见表1。

图1　血府逐瘀胶囊（A）、软胶囊（B）、片剂（C）及口服液（D）的总离子流图Fig.1　HS-GC/MS total ion chromatograms of Xuefu Zhuyu capsule（A），Xuefu Zhuyu soft capsule（B），Xuefu Zhuyu tablet（C）and Xuefu Zhuyu oral liquid（D）

血府逐瘀胶囊中挥发性成分主要是脂肪族、芳香族、内酯、单萜类等。内酯类（17.37%）主要包括藁苯内酯（12.52%）、洋川芎内酯（0.58%）、3-亚丁基-1（3H）-异苯并呋喃酮（2.64%）、丁基酚内酯（1.63%）。藁本内酯主要存在于川芎、当归等伞形科植物中，具有抗肿瘤、解热、镇痛消炎等作用［17］。单萜类（6.23%）主要包括α-蒎烯、柠檬烯、γ-萜品烯。血府逐瘀软胶囊中挥发性成分主要以醛类、丙三醇为主，主要包括乙酸乙酯（19.83%）、甲氧基乙酸丁酯（19.00%）、三乙酸甘油酯（14.76%）、丙三醇（18.26%）。不同厂家血府逐瘀片中挥发性成分基本一致，以醇、醛、酯、单萜类为主，主要包括巴豆醇、3-甲基丁醛、2-甲基丁醛、藁本内酯、三乙酸甘油酯、柠檬烯。由于制剂工艺的不同，血府逐瘀口服液中挥发性成分检出数量明显少于其他3种血府逐瘀制剂，主要包括醛和酯类。

表1　血府逐瘀胶囊（HC）、软胶囊（SC）、片剂（TB）及口服液（OL）挥发性成分分析结果Tab.1　The results of the volatile constituents of Xuefu Zhuyu capsule（HC），Xuefu Zhuyu soft capsule（SC），Xuefu Zhuyu tablet（TB）and Xuefu Zhuyu oral liquid（OL）

4　结论

笔者构建的HS-GC/MS法能够应用于血府逐瘀胶囊、软胶囊、片剂、口服液中的挥发性成分的研究。血府逐瘀不同剂型中的挥发性成分差异明显，其主要原因在于生产加工工艺不同。该研究为血府逐瘀制剂的质量控制提供了理论依据。

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［3］宿树兰，段金廒，赵新慧，等.四物汤及衍化方香附四物汤挥发性成分与子宫平滑肌收缩效应相关性分析［J］.世界科学技术-中医药现代化，2008，10（2）:50-57.

［4］张军，车海先.浅议顶空气相色谱［J］.食品安全导刊，2012（5）: 48.

［5］邓秀娟.血府逐瘀片治疗冠心病心绞痛疗效临床观察［J］.中国现代医学杂志，2012，22（16）:82-83.

［6］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:693-694.

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（本文编辑：高杉，于春泉）

Identification of the volatile components in different preparations of Xuefu Zhuyu by GC-MS

YU Hui-juan1，2，YANG Fan1，2，JIANG Zhen-zuo1，2，WANG Yue-fei1，2，YANG Xin-ying3
（1.Tianjin State Key Laboratory of Modern Chinese Medicine-Province and Ministry Co-established State Key Laboratory Cultivation Base，Institute of Traditional Chinese Medicine，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2.Research and Development Center of Traditional Chinese Medicine，Tianjin International Joint Academy of Biotechnology and Medicine，Tianjin 300457，China；3.Tianjin Hongrentang Pharmaceutical Co.，Ltd.，Tianjin 300385，China）

［Objective］To identify the volatile components in different preparations of Xuefu Zhuyu，a rapid GC-MS method was established.［Methods］Headspace gas chromatography-mass spectrometry（HS-GC/MS）was employed for identification of the components in Xuefu Zhuyu capsules，Xuefu Zhuyu soft capsules，Xuefu Zhuyu tablets and Xuefu Zhuyu oral liquid.The volatile components were retrieved by NIST-10 library，the relative percentage contents of which were calculated by area normalization method.［Results］The 21 volatile components were identified from Xuefu Zhuyu capsules，including acetic acid，benzaldehyde，ligustilide and 2-methyl-butanal etc.The 22 volatile components were identified in Xuefu Zhuyu tablets，including limonene，3-methyl-butanal，ligustilide and 2-methyl-butanal etc.Ten and five volatile components were identified in Xuefu Zhuyu soft capsules and Xuefu Zhuyu oral liquid，respectively.［Conclusion］In this study，the method established can be used for the detection and analysis of volatile components in different preparation of Xuefu Zhuyu.The results could provide the basis for the quality control of preparation of Xuefu Zhuyu.

pace gas chromatography-mass spectrometry；Xuefu Zhuyu preparation；volatile component

R284

A

1672-1519（2016）02-0107-04

10.11656/j.issn.1672-1519.2016.02.12

国家自然科学基金资助项目（81202877）。

于卉娟（1988-），女，硕士研究生，主要研究方向为中药质量控制研究。

王跃飞，E-mail：wangyuefei_2006@hotmail.com。

（2015-10-13）