Vav1蛋白在胃癌中的表达及其临床意义*

张明明，贾晓梅，高伟

（河北省人民医院 1.检验科，2.门诊办公室，河北 石家庄 050051）

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，易于复发，预后较差[1-2]。研究表明，Vav1蛋白与恶性肿瘤关系密切，具有促进肿瘤生长、侵袭及远处转移的作用[3-4]。但Vav1蛋白在胃癌组织及外周血中表达及意义的报道少见。本研究选取胃癌患者、胃癌复发患者及健康体检者，检测肿瘤组织及外周血中Vav1水平，分析两者的相关性，探讨其临床意义，为胃癌和复发患者的病情分析、复发预测提供依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2014年10月-2015年12月在河北省人民医院行胃癌根治术的患者200例作为手术组。其中，男性114例，女性86例；年龄29～72岁，平均（58.7±12.3）岁，均由术前活检和术后病理确诊。手术组患者中，淋巴结转移阴性38例，淋巴结转移阳性162例。同期就诊的术后复发患者62例作为复发组。复发组患者经病理证实，胃镜结合CT检查确诊为复发。选取年龄、性别相匹配的健康体检者100例作为对照组。所有患者自愿签署知情同意书，并经本院医学伦理委员会批准。

1.2 主要试剂及仪器

人Vav1癌基因酶联免疫吸附测定法（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）定量分析试剂盒（美国RD公司，批号：015828），Vav1一抗（美国Sigma公司），酶免之星全自动酶标仪（瑞士Hamilton公司），免疫组织化学法试剂盒（武汉博士德生物公司）。

1.3 标本采集

所有患者晨起空腹抽取静脉血5 ml，室温静置30 min后，3 000 r/min离心15 min，分离血清。手术组患者在术前1 d、术后2周各采血1次。复发组和对照组均采血1次。肿瘤组织石蜡标本来源于术中切除标本，肿瘤离体后置于4%多聚甲醛中固定，石蜡包埋。连续切片后行苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）染色、免疫组织化学SP法检测；于本院病理科取正常胃黏膜石蜡标本30例作为组织检测的对照，其标本来自胃镜活检组织，无癌及不典型增生组织。

1.4 ELISA

采用双抗夹心法，严格依据试剂盒说明书进行操作，检测血清Vav1的表达水平。板内变异系数＜5%，板间变异系数＜7%，在450 nm处测量Vav1的表达。

1.5 免疫组织化学法

严格按免疫组织化学法试剂盒说明书进行操作，逐步进行显色、复染及封片，染色后进行结果判断。染色结果由2位病理医师进行阅片。在400倍视野下，每张切片随机取5个视野，每个视野随机计数100个肿瘤细胞，参考文献[5]采用二次计分法计算目的蛋白的相对表达量。细胞膜或细胞浆内出现黄或棕黄色颗粒为染色阳性。细胞表达阳性的计分标准：阳性细胞＜10%为0分，10%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。染色强度的计分标准：无色为0分，浅黄色为1分，黄色为2分，黄褐色为3分。两者相乘≤2分为阴性，＞2分为阳性。

1.6 统计学方法

数据分析采用SPSS 16.0统计软件，计量资料以均数±标准差（±s）表示，用单因素方差分析或t检验，两两比较用LSD-t检验；计数资料以率（%）表示，用χ2检验，两两比较用校正检验水准法（检验水准α=0.0125）；相关分析用Spearman法，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组患者外周血中Vav1水平比较

手术组患者手术前后外周血Vav1水平分别为（196.57±16.82）和（10.21±1.17）ng/ml，对照组为（10.42±1.09）ng/ml，复发组为（227.45±20.67）ng/ml。手术组术前、复发组、对照组外周血Vav1水平比较，采用单因素方差分析，差异有统计学意义（F=6754.831，P=0.000）。进一步两两比较经LSD-t检验，复发组外周血Vav1水平高于手术组患者术前（t=11.936，P=0.000），手术组患者术前外周血Vav1水平高于对照组（t=110.464，P=0.000）。手术组患者手术前后外周血Vav1水平比较，经t检验，差异有统计学意义（t=1.4745，P=0.000），手术组术前高于术后。手术组患者术后外周血Vav1水平与对照组比较，经t检验，差异无统计学意义（t=-1.499，P=0.135）。对手术组患者术前外周血Vav1水平进行分析，淋巴结转移阴性者的外周血Vav1水平为（195.09±15.07）ng/ml，淋巴结转移阳性者为（199.38±15.97）ng/ml，经 t检验，差异无统计学意义（t=-1.140，P=0.256）。

2.2 胃癌肿瘤组织与正常黏膜组织Vav1的表达

手术组胃癌组织Vav1阳性表达率为82.5%（165/200），正常胃黏膜组织为13.3%（4/30）；复发组胃癌组织Vav1阳性表达率为95.16%（59/62）。3组患者Vav1阳性表达率比较，经χ2检验，差异有统计学意义（χ2=86.340，P=0.000）。其中，手术组胃癌组织Vav1阳性表达率与对照组比较，经χ2检验，差异有统计学意义（χ2=60.041，P=0.000），手术组高于对照组；复发组胃癌组织Vav1阳性表达率与手术组胃癌组织比较，经χ2检验，差异有统计学意义（χ2=6.119，P=0.013），复发组高于手术组；复发组胃癌组织Vav1阳性表达率与对照组比较，经χ2检验，差异有统计学意义（χ2=62.714，P=0.000），复发组高于对照组。见附图。

2.3 手术组和复发组患者外周血与肿瘤组织中Vav1表达的相关性

Spearman相关分析显示，手术组外周血与肿瘤组织中Vav1表达呈正相关（rs=0.345，P=0.000）。复发组外周血与肿瘤组织中Vav1表达也呈正相关（rs=0.443，P=0.000）。

附图 3组患者Vav1蛋白的表达 （SP×400）

3 讨论

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，发病率居恶性肿瘤前列，可发生于胃的各个部位，容易向胃壁及周围组织侵犯，而且症状不典型，早期不易发现，容易误诊、误治，失去手术机会[6-7]。及时准确的判断肿瘤状态，尽早预测复发对指导临床综合治疗有重要意义。

Vav1又称鸟苷酸转换因子，具有鸟苷酸释放因子活性，有助于小G蛋白上的二磷酸鸟苷和三磷酸鸟苷相互转换，从而活化Ras和Rho等小G蛋白。Vav1主要表达于造血系统、造血细胞。Dbl家族中还有2个与Vav1结构相同的蛋白——Vav2和Vav3，其在人体中的表达比较广泛。Vav1蛋白结构较为复杂，由DH、PH、CH、AC、SH2及SH3结构域组成，各结构域功能相辅相成，DH结构域起催化作用，PH和AC结构域可调节蛋白活性，CH结构域使Vav1处于失活状态，SH2和SH3结构域主要介导Vav1与其他蛋白的相互作用。有研究显示，Vav1蛋白在许多恶性肿瘤中表达升高，具有促进肿瘤生长、扩散、侵袭及远处转移的作用，其表达与肿瘤的恶性程度呈正相关[7-8]。本研究发现，Vav1在胃癌肿瘤组织中的表达强于正常胃黏膜组织，说明Vav1蛋白表达与肿瘤发生、发展关系密切。研究结果还发现，复发组肿瘤组织Vav1表达也增强，甚至高于手术组胃癌组织，说明Vav1表达在肿瘤复发过程中进一步增强，提示Vav1可能对胃癌的复发有促进作用。但本研究也发现，术前有无淋巴结转移者外周血Vav1水平无差异，提示Vav1水平可能与胃癌淋巴结转移情况无关。

实验结果表明，手术组患者术前外周血中Vav1水平高于对照组，根治性手术去除肿瘤后Vav1水平降低，降至与对照组Vav1水平无差异。由此可见，外周血中Vav1水平高低与肿瘤组织的存续有十分密切的关系，肿瘤组织的存在与否直接影响Vav1水平的变化。对于复发组患者，外周血中Vav1水平升高，且高于手术组术前，说明Vav1水平与肿瘤的复发关系密切，笔者认为肿瘤的复发刺激Vav1水平升高，同时Vav1水平升高也通过某种机制刺激肿瘤的生长和复发。相关分析发现，手术组和复发组患者外周血与肿瘤组织中Vav1表达呈正相关，说明外周血中Vav1水平可以反映机体肿瘤组织状态。

综上所述，胃癌患者肿瘤组织Vav1过表达，外周血中Vav1水平升高，且外周血与肿瘤组织中Vav1表达呈正相关。Vav1与胃癌的关系十分密切，早期动态监测外周血中Vav1蛋白水平，可以及时准确地掌握肿瘤在患者体内的发展、变化，对预测术后生存率和肿瘤复发提供重要的参考价值。

[1] GHOSN M, TABCHI S, KOURIE H R, et al. Metastatic gastric cancer treatment: second line and beyond[J]. World J Gastroenterol,2016, 22(11): 3069-3077.

[2] CHEN X F, QIAN J, PEI D, et al. Prognostic value of perioperative leukocyte count in resectable gastric cancer[J]. World J Gastroenterol, 2016, 22(9): 2818-2827.

[3] QI Y, KONG F M, DENG Q, et al. Clinical significance and prognostic value of Vav1 expression in non-small cell lung cancer[J]. Am J Cancer Res, 2015, 5(8): 2491-2497.

[4] DU M J, CHEN X D, ZHOU X L, et al. Estrogen induces Vav1 expression in human breast cancer cells[J]. PLoS One, 2014, 9(6),DOI: org/10.1371/journal.pone.0099052.

[5] KATZAV S. Vav1: A Dr. Jekyll and Mr. Hyde protein--good for the hematopoietic system, bad for cancer[J]. Oncotarget, 2015, 6(30):28731-28742.

[6] DEGIULI M, de MANZONI G, DI LEO A, et al. Gastric cancer:current status of lymph node dissection[J]. World J Gastroenterol,2016, 22(10): 2875-2893.

[7] KHAN M K, SYED A A, KHATTAK S, et al. Surgical management of gastric cancer: single center experience from a developing country[J]. South Asian J Cancer, 2015, 4(3): 127-129.

[8] SEBBAN S, FARAGO M, RABINOVICH S, et al. Vav1 promotes lung cancer growth by instigating tumor-microenvironment crosstalk via growth factor secretion[J]. Oncotarget, 2014, 5(19): 9214-9226.