CIN及宫颈癌患者外周Treg/Th17细胞的表达及意义

陶 陶，高 嵩

(中国医科大学附属盛京医院，辽宁 沈阳 110000)

宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)作为临床上一类发病率较高的妇科恶性肿瘤，其发病率呈逐年上升趋势，且逐渐呈现出低龄化，对患者的生活质量造成了较大的影响。目前，临床上较为常用的CIN的方法较差，即需要采取积极有效的方法进行解决[1]。由于CIN存在着自然逆转、持续不变或者进展成为宫颈癌的三个阶段，而其中CIN及宫颈癌的免疫状况则是将细胞免疫耐受作为主体，外周Treg/Th17细胞参与并维持着免疫平衡方面的作用，当这免疫平衡方面失去原有的平衡之后，则会导致患者的自身免疫性疾病以及肿瘤开始发生发展[2]。Treg能够通过分泌出白细胞介素10(interleukin-10，IL-10)及转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)等多种细胞因子，Th17能够分泌IL-17，IL-6则在Th17 细胞的分化形成过程中起着积极的促进作用，中国医科大学附属盛京医院针对收治的CIN患者展开研究与分析，针对其外周Treg/Th17细胞的表达水平进行探讨，结果报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取中国医科大学附属盛京医院自2015年4年至2017年4月收治的30例CIN患者作为CIN组以及35例宫颈癌患者作为宫颈癌组，均经过病理实验检查后证实，术前均未接受常规放疗及化疗治疗，同时也未服用过其他类型的药物。另选择同时收治的32例健康女性作为对照组，CIN组年龄在35～60岁，平均年龄为(47.1±3.9)岁，宫颈癌组年龄在33～62岁，平均年龄为(46.9±3.2)岁，对照组年龄在34～61岁，平均年龄为(46.3±3.5)岁，三组一般资料无明显差异，具有可比性(P>0.05)。

1.2方法

采用流式细胞术对三组人员外周血单个核细胞中Th17细胞及Treg细胞的表达情况进行检测，另采用酶联免疫吸附法对外周Treg/Th17细胞相关因子IL-23、IL-10、IL-17、IL-6及TGF-β的浓度进行测量。Th17细胞的检测方法为：将外周血单个核细胞提取出来后，进行RPMI1640培养，接种在24孔培养板后，向其中加入PMA刺激剂、离子霉素、蛋白质转运剂等[3]。放置在37℃、5%的CO2培养箱中进行培养4h后，向其中加入FIFT-CD4抗体，给予避光孵育30min，行PBS洗涤2次，加入至固定液室内给予避光孵育30min，接着洗涤2次，最后向其中加入PE-IL-17抗体，并进行同型对照，于室温条件下避光30min，使用破膜剂后上机检测[4]。Treg细胞检测方法为：取300μL的外周血，向其中加入8mL的红细胞裂解液，共裂解12min后，给予离心处理，共离心5min，将上层清液去除后，加入2mL磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution，PBS)冲洗液，摇均匀后，离心处理，1 500r/min，离心5min后，去除掉上层清液，摇匀后完成加入抗体、固定、破膜、封闭剂、孵育等一系列过程中，上机检测[5]。外周Treg/Th17细胞相关因子的测量方法为：取得外周血标本2mL后，肝素抗凝处理，放置在离心机中，给予离心处理，离心速度为2 500r/min，共离心15min，后将上层清液放置在80℃的冰箱中保存[6]。采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)法对血浆中IL-23、IL-10、IL-17、IL-6及TGF-β的浓度进行测量，测量的步骤严格按照说明书进行。

1.3统计学方法

2结果

2.1 Treg与Th17细胞在CIN及宫颈癌患者外周血中的表达水平

CIN组与宫颈癌组分别与对照组相比CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞水平较高、CD4+IL-17+/CD4+T细胞表达水平较低，宫颈癌组与CIN组相比CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞水平较高、CD4+IL-17+/CD4+T细胞表达水平较低，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

Table 1 Expression levels of Treg and Th17 cells in peripheral blood in CIN and cervical cancer patients(%,±S)

注：t1(P1)为对照组与CIN组相比.t2(P2) 为对照组与宫颈癌组相比.t3(P3)为CIN组与宫颈癌组相比。

2.2外周Treg/Th17细胞相关因子在CIN及宫颈癌患者外周血中的表达水平

CIN组与宫颈癌组分别与对照组相比IL-10、TGF-β水平较高，IL-17、IL-23及IL-6水平较低，宫颈癌组与CIN组相比IL-10、TGF-β水平较高，IL-17、IL-23及IL-6水平较低，差异均具有统计学意义(均P<0.05)，见表2。

表2 外周Treg/Th17细胞相关因子在CIN及宫颈癌患者外周血中的表达水平

注：t1(P1)：对照组与CIN组相比；t2(P2)：对照组与宫颈癌组相比；t3(P3)：CIN组与宫颈癌组相比。

3讨论

3.1 CIN及宫颈癌的发生发展与细胞免疫功能的关系

据调查资料显示，肿瘤的发生发展与人体的免疫功能具有密切的相关性，其中T淋巴细胞的存在在其中起到了重要的作用，而Treg细胞作为一类具有较强免疫抑制特性的T淋巴细胞亚群，能够在外周免疫应答的调节过程中发挥重要的作用，并具有一定的临床意义。有研究报道指出，CIN及宫颈癌的发病机制通常可受到机体的细胞免疫应答情况影响，能够表现出免疫耐受的情况，当CD4+T细胞中出现Th1/Th2平衡向Th2方向偏离时，则会导致NK细胞中所存在的抑制性受体与杀伤性受体发生明显的平衡失调的情况[7]。总结引起上述平衡失调的机制则在于Treg的调控作用，Treg的调控作用在于能够对免疫耐受进行有效的诱导，并可促进机体免疫应答能力的明显降低，同时促进增加炎症反应，并显著提高机体的防御反应等，一旦此种调节作用被打破，则易导致肿瘤的发生与进一步的发展[8]。

3.2 CIN及宫颈癌患者外周Treg/Th17细胞的表达及意义

Treg发挥其作用主要是通过分泌细胞因子中IL-10及TGF-β所完成实现，通过对NK细胞、树突状细胞及NKT等细胞进行有效的调节与触控，从而使得机体免疫应答水平明显降低[9]。而Th17细胞则通过产生大量的IL-6、IL-17等因子，促进机体免疫应答反应明显上调，并对初始T细胞分化成为Treg的过程进行有效的促进与诱导，导致Treg/Th17的平衡发生偏离[10]。而当Treg/Th17的平衡发生偏离时则会引起CIN的进展甚至导致宫颈癌的发生与恶化[11]。本次研究结果显示，CIN组与宫颈癌组分别与对照组相比CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞水平较高，CD4+IL-17+/CD4+T细胞表达水平较低，宫颈癌组与CIN组相比CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞水平较高,CD4+IL-17+/CD4+T细胞表达水平较低，差异具有统计学意义(P<0.05)。CIN组与宫颈癌组分别与对照组相比IL-10、TGF-β水平较高,IL-17、IL-23及IL-6水平较低，宫颈癌组与CIN组相比IL-10、TGF-β水平较高，IL-17、IL-23及IL-6水平较低，差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结果提示，当CIN向着宫颈癌的方向进展时，Treg相关细胞因子的浓度会逐渐升高，而Th17相关因子的浓度则会逐渐降低，进一步确定了宫颈病变及宫颈癌中Treg/Th17失衡的情况，原因是当这种情况失衡后，肿瘤生长的炎性反应则会逐渐减弱，这就对肿瘤生长提供了有利的环境。

综上所述，随着CIN向着宫颈癌方向的发展，Treg/Th17的平衡开始偏离，这就可能导致了CIN的进展以及宫颈癌的发生发展，可能与二者参与了肿瘤免疫内环境的调节相关。由于本次研究样本量较少，收集到的数据可能存在一定的差异，可通过进一步分析以获得精确的结论。

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