微粒子化学发光技术检测核心抗体临床意义的探讨

杨森，局军，张兴旺，郭瑞

(甘肃省人民医院临床检验中心，甘肃 兰州730000)

CMIA技术具有灵敏度高、线性宽、检测快速等优点已应用于对乙肝病毒血清学感染指标的检测，并以S/CO值半定量的方式作为结果。在检测核心抗体方面使用原倍血清，其阳性率相比稀释之后的检测方法存在一定的差异[1-3]。国内目前多采用ELISA 1：30倍稀释方法检测HBcAb，其结果具备一定的临床诊断参考价值[4-6]。在表面抗原阴性模式中CMIA方法所检测的阳性核心抗体是否都具备临床意义？本研究根据CMIA方法所测HBcAb阳性标本利用ELISA1：30倍稀释方法分析比对，以期能寻找到CMIA检测HBcAb具有临床意义的S/CO值范围。

1 材料与方法

1．1 研究对象 标本来源于2013年11月至2014年3月本院门诊和住院患者，选择CMIA方法所检测的HBsAg阴性、HBcAb阳性标本。共收集标本654例，男性372例，占56．9%，女性282例，占43．1%。

1．2 仪器与试剂 美国雅培微粒子化学发光仪i2000SR及其配套的试剂，校准品及北京康切斯坦质控品。上海科华核心抗体ELISA方法检测试剂盒。丹麦雷杜RT2100C酶标仪。

1．3 方法 根据雅培i2000SR微粒子化学发光仪所检测乙肝五项指标结果，筛选HBsAg阴性、HB-cAb 阳性标本（HBsAg S/CO 值＜0．05IU/ml为阴性，HBcAb S/CO值≥1．0为阳性结果）。标本无明显溶血及黄疸。符合条件即可收集标本血清约0．5ml于Eppendorf管中，密封保存于-20℃冰箱内，仪器的日常维护，质控管理，样本测试均严格按照试剂说明书及相关的SOP文件执行。根据ELISA试剂盒说明书，采用酶标仪对所收集标本进行1：30倍生理盐水稀释检测HbcAb。

1．4 统计学分析 采用SPSS 18．0统计软件对所得数据进行统计分析。所收集标本采用四分位数描述其结果。利用ROC曲线分析评价CMIA法HB-cAb S/CO值对ELISA检测结果的诊断价值，P＜0．05具有统计学意义。

2 结果

2．1 对ELISA三组数据的年龄和核心抗体S/CO值进行正态性分析，统计结果为右偏态分布 （表1）。偏度和峰度是以数学矩原理检测得到的结果，当两者都为0时才能满足正态分布的要求。本文数据偏度为负数，表示数据分布偏右，峰度＞0表示数据分布曲线峰峭比较尖，＜0表示曲线比较平阔。

表1 HbcAb数据正态性检验表

2．2 本文HBcAb的S/CO值数据经正态性分析为偏态分布，故以P50(P25，P75)四分位数表示资料的分布情况。根据ELISA方法所检测核心抗体的结果，将其分为ELISA阴性组和阳性组，见表2。

根据CMIA检测HBcAb的S/CO值高低，将其分为三组， 低值组 （1．00～3．99）、 中值组 （4．00～6．99）、高值组（7．00～9．99），三组 ELISA 检出 HB-cAb阳性标本的比例有明显的差异见表3。

表2 HBcAb标本基本情况

表3 各组ELISA检出HBcAb阳性率情况

2．3 利用ROC曲线分析并得到HBcAb S/CO值为7．79作为具有临床诊断意义的临界值其曲线下面积为 0．922，95%可信区间为（0．900，0．944），灵敏度为 79．2%， 特异度为 93．1%，Yunden 指数为 0．72，P=0．000，有统计学意义，见图 1。

图1 HBcAb S/CO值ROC曲线

3 讨论

乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染作为一种社会性疾病在世界范围内分布广泛，是常见的感染性疾病之一，据流行病学调查研究显示目前全球HBV慢性感染患者已超过3．5亿[7]，1992年流行病学调查显示人群携带率约为10%，其中1-59岁年龄段携带率约为9．8%。此后由于国家推行乙型肝炎疫苗接种计划，表面抗原携带率有所下降，根据2006年国家流行病学调查研究显示1-59岁年龄段携带率约为7．2%，5岁以下儿童携带率已控制在 1．0%左右[8，9]。

本文根据ELISA复检结果将其分为阳性组、阴性组。 阳性组四分位数 8．26（7．77，8．59）高于阴性组及总体标本。四分位数的意义是组内有n个变量＜PX，7．77 为较小四分位数 P25， 组内＜7．77 的数值占25%，＞7．77的数值占75%，表明ELISA阳性组内的标本多位于CMIA检测核心抗体S/CO值较高的范围之内。

经ROC曲线分析，本文选择CMIA检测核心抗体S/CO值7．79作为具有临床诊断参考价值的界点，其灵敏度为 79．2%，特异度为 93．1%，Yunden指数为0．72；Yunden指数为判断界点诊断效用的综合指标，其取值范围在-1～1之间，越接近1说明诊断的效用越好。而且7．79恰好位于ELISA阳性组四分位数 8．26 （7．77，8．59） 范 围之 内， 接 近P257．77。

本文另收集ELISA手工方法一周内所检测表面抗原阴性、HBcAb阳性标本，共100例（核心抗体均为1：30倍稀释后检测），利用CMIA技术对其分析，共检出核心抗体阳性标本92例，其S/CO值的中位数（M）为 9．30，高于本文界定值 7．79，分析可能有以下三点原因，第一：由于654例标本的存储时间较长等人为影响因素，可能导致本文所得结论相对偏低；第二：ELISA检测核心抗体均为1：30倍稀释后检测，而雅培化学发光采用原倍浓度检测，两种方法检测原理的不同也可能导致所得结果有所差异；第三：ELISA核心抗体检测试剂盒为国产科华试剂，雅培化学发光所用试剂为美国进口，两种试剂的不同，也可能造成结果之间有所差异。但两种方法所得核心抗体结果的S/CO值都处在较高范围内。并且92例阳性标本中S/CO值≥7．79的标本约占 77．2%，也证明 ELISA与CMIA这两种方法在检测HbcAb方面具有一定的一致性，在此条件下也反向说明本文所得结果CMIA技术检测HbcAb的S/CO值≥7．79具有一定的临床诊断参考价值。

CMIA方法所检测HbcAb的S/CO较高值对于提示机体是否存有潜在的HBV复制或感染，一方面需要结合患者的临床病史和其它相关抗原抗体的检测情况；另一方面则需要观察患者的HBVDNA检测结果[10，11]。针对传染性疾病，临床医生对患者疾病状况的诊断以及在观察治疗效果期间，需要综合分析相关检测指标，而我们检验工作者对仪器的准确度，方法学的敏感性和特异性更要了然于心，阳性和阴性虽是一个字的差别，但它却造成患者在精神和心理方面沉重的负担[12]。本文也希望通过这些论证最终得到的结果能有益于临床医生和检验工作者，更希望我们临床和医技之间能多些沟通和交流，增加彼此的信任，以使更多患者受益，造福人类。

本文实验尚有不足之处：本文所得结论与患者病情的相关资料未能做一比较，两者如能联系，可进一步完善本文的论证。在ELISA手工操作环节，检测结果不能避免人为因素的影响。应当增加观察标本数量进一步证实CMIA检测HBcAb的临床诊断界点，以映证本文所得结论。

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