血清胃泌素释放肽前体31～98片段和神经元特异性烯醇化酶联合检测在小细胞肺癌诊断中的临床价值

尚鹏超 ，谢慧波 ，徐继业 ，尚勇 ，闫登峰 ，张晓展

(1、周口市中心医院检验科，河南 周口 466000；2、罗氏诊断产品（上海）有限公司，上海 200131；3、周口市中心医院肿瘤内科，河南 周口 466000；4、周口市中心医院心胸外科，河南 周口 466000；5、周口市中心医院呼吸内科，河南 周口 466000；6、郑州大学第一附属医院检验科，河南 郑州450000)

增殖早、恶性程度高的未分化型小细胞肺癌（SCLC）约占年新发肺癌20%左右；及时发现、诊断和治疗是提高SCLC患者5年生存率的关键。本研究旨在探讨评价胃泌素释放肽前体 （ProGRP）31-98片段和神经元特异性烯醇化酶(NSE)作为小细胞肺癌（SCLC）诊断指标在SCLC诊断中的临床价值。

1 对象与方法

1．1 对象 收集2014年6月-2016年5月间在周口市中心医院呼吸内科、心胸外科、肿瘤内科首次就诊并确诊的SCLC患者49例，非小细胞肺癌患者172例 （上述病人穿刺病理活检或内镜组织病理活检或手术后组织病理学确诊）；良性肺病患者（临床诊断上呼吸道感染患者）100例；健康者100例 （均来自周口市中心医院同期体检健康人群）。且排除以上人群无肾病（尿检、血清肌酐、血清尿素氮、血清尿酸、B超检查结果正常）、无其他原发肿瘤对ProGRP（31-98）检测的干扰。

1．2 方法

1．2．1 标本采集 分离胶生化试管采集外周血5ml，1h内用 Roche cobas671前处理离心机 25（℃）下10min分离血清，去除脂血、溶血标本。

1．2．2 仪器与试剂 仪器采用 Roche cobas e602；血清ProGRP（31-98）和NSE体外诊断试剂盒、标准品、质控品均购自Roche公司。

1．2．3 ProGRP（31-98）和 NSE 检测 在设备运行正常、通讯正常、室内质量控制在允许范围的情况下，严格按照SOP操作规程检测血清ProGRP（31-98）和NSE浓度。

1．3 统计学处理 IBM SPSS Statistics 19．0软件对数据进行统计学分析，计量资料采用均数x表示，多组间比较应用方差分析，各组之间两两比较应用q检验，ROC曲线分析评价临床应用价值，P＜0．05表示有统计学意义。

2 结果

2．1 两组血清 ProGRP（31-98）、NSE 水平比较

表1 两组血清ProGRP（31-98）、NSE中位数水平在（健康对照组、良性肺病组、NSCLC组、SCLC组）组间的比较

2．2 ProGRP（31-98）、NSE 以及 ProGRP（31-98）+NSE诊断SCLC比较 NSE诊断SCLC的ROC曲线下面积为 0．832，P=0．000，95%CI（0．754～0．911），以25ng/ml为临界点起敏感度和特异度分别为67．1%和 88．3%。 ProGRP （31-98） 诊断 SCLC 的ROC 曲线下面积为 0．864，P=0．000，95%CI（0．794～0．934），以80pg/ml为临界点起敏感度和特异度分别为 70．4%和 92．3%。 ProGRP（31-98）+NSE 联合诊断 SCLC的 ROC曲线下面积为 0．926，P=0．000，95%CI （0．877～0．976），ProGRP （31-98）以80pg/ml为临界点、NSE以25ng/ml为临界点敏感度和特异度分别为87．1%和96．7%。

图1 ProGRP（31-98）、NSE 以及ProGRP（31-98）+NSE 诊断SCLC的ROC曲线比较

3 讨论

临床诊断SCLC的主要方法有影像学、组织病理学、相关血清肿瘤标志物；由于SCLC发病以肺门部位居多以及微小未能成像等原因造成影像学不易发现，侵入性组织病理学检查有诸多禁忌症等原因，造成SCLC相关血清肿瘤标志物在诊断早期SCLC方面显得尤为重要；常用相关标志物有NSE 和 ProGRP（31-98）。

糖分解烯醇酶(2-phospho-D-glycerate hydrolase．EC 4．2．4．11) 由 α、β 和 γ 三种亚单位组成，α亚单位见于哺乳动物多种类型组织中，β亚单位则主要见于心脏和肌肉组织。神经元特异烯醇化酶（NSE）为αγ和γγ异构体，高浓度存在于神经细胞和神经内分泌细胞以及这些细胞所引发的肿瘤细胞中[1]，血清NSE现在主要用于SCLC(70%升高)的鉴别诊断、病情监测、疗效评价和复发预报。但由于NSE在红细胞中大量存在，标本溶血（0．1%的溶血度就可导致结果假阳性[2]）、未及时分离血清（Roche要求1h内分离血清）都是导致NSE结果假性大幅升高而造成临床误判以至诊断SCLC特异度不高的原因；血浆标本不可用导致其使用受限。本实验中1h内分离血清及除外溶血、脂血标本都尽可能避免了由此带来的结果干扰。

胃泌素释放肽（GRP）参与调节人体生理功能、病理状态等，由迷走神经节后纤维释放的一种胃肠激素，主要刺激胃的G细胞分泌胃泌素，参与平滑肌细胞的收缩、发挥存进细胞间的相互作用（上皮细胞增殖、转移、扩散）；大量分布在哺乳动物的神经系统、胃肠道、呼吸道。SCLC存在高水平的GRP表达和分泌、正常肺部上皮低表达或不表达、良性肺病低表达以及上皮来源肿瘤中的低表达使其成为SCLC诊断的重要肿瘤标志物。由于GRP的半衰期只有2min，稳定性差，体外实验难以检测[3]，有报道人工合成GRP的基因编码产物ProGRP（31-98）在血清中含量稳定，水平可代表GRP的水平以及GRP的基因表达，可临床用于诊断SCLC的肿瘤标志物[4-7]。52．2%慢性肾功能衰竭患者血清ProGRP（31-98）升高[8]，部分甲状腺髓样癌和前列腺癌患者 ProGRP（31-98）升高[9]，是造成 ProGRP假阳性的常见因素；

本实验中 NSE、ProGRP（31-98）、ProGRP（31-98）+NSE均能够有效地区分健康人、良性肺病患者、肺癌患者；且 ProGRP（31-98）+NSE 作为联合诊断（序列实验）指标与 ProGRP（31-98）、NSE 单诊断指标比较优势明显：ROCProGRP（31-98）+NSE(0．928)＞ROC ProGRP（31-98）(0．864)＞ROCNSE(0．832)；敏感度：ProGRP（31-98）+NSE（89．1）＞Pro-GRP（31-98）（70．4）＞NSE （67．1）； 特异度：ProGRP（31-98）+NSE（96．7）＞ProGRP（31-98）（92．3）＞NSE（88．3）。 与王敏[10]、杨兴[11]、刘运秋[12]倪军[13]张萍[14]张素真[15]报道结果一致。本研究采用的电化学发光法相比传统的酶联免疫吸附法优势明显：⑴标记物再循环利用，发光时间长、强度高、易于测定；⑵敏感度高(NSE 可达 ng/m、ProGRP（31-98）可达 pg/ml)；⑶线性范围宽；⑷18min以内可完成测定；结果相对更加可靠。

综上所述，ProGRP （31-98）、NSE 在 SCLC 的诊断和鉴别中，ProGRP（31-98）优于 NSE，但由于部分肿瘤单指标的低表达，联合应用可提高SCLC的早期诊断，电化学发光法的应用使本实验结果更具信服力；同时在试验前后应避免其他疾病和样本处理对实验结果的干扰。

[1]王颖颖，赵静．探讨肺癌肿瘤标志物联合检测在诊断中的意义[J]．实验与检验医，2016，34（5）：639-642．

[2]郭子健，刘中娟，张瑞丽，等．血清胃泌素释放肽前体和神经元特异烯醇化酶在小细胞肺癌的辅助诊断作用及影响因素[J]．协和医学杂志，2014，5（7）：259-263．

[3]Ischia J，Patel O，Shulkes A，et al．Gastrin-releasing peptide：Different forms，different functions[J]．Biofactors，2009，35(1)：69-75．

[4]Miyake Y，Kodama T，Yamaguchi K．Pro-gastrin-releasing peptide(31-98)is a specific tumor marker in patients with small cell lung carcinoma[J]．Cancer Res，1994，54(8)：2136-2140．

[5]Aoyagi K，Miyake Y，Urakami K，et al．Enzyme immunoassay of immunoreactive progastrin-releasing peptide(31-98)as tumor marker for small-cell lung carcinoma：development and evaluation[J]．Clin Chem，1995，41（4）：537-543．

[6]Yamaguchi K，Aoyagi K，Urakami K，et al．Enzyme-linked immunosorbent assay of pro-gastrine-releasing peptide for small cell lung cancer patients in comparison with neuron-specific enolase measurement[J]．Jpn J Cancer Res，1995，86（7）：698-705．

[7]Stieber P，Dienemann H，Schalhorn A，et al．Pro-gastrin-releasing peptide(ProGRP)-a useful marker in small cell lung carcinomas[J]．Anticancer Res 1999，19（4A）：2673-2678．

[8]Molina R，Auge JM，Filella X，et al．Pro-gastin-releasing peptide（pro-GRP） in patients with benign and malignant diseaes：comparison with CEA，SCC，CYFRA21-1 and NSE in patients with lung cancer[J]．Anticancer Res，2005，25(3A)：1773-1778．

[9]Inaji H，Komoike Y，Motomura K，et al．Demonstration and diagnostic significance of pro-gastrin-releasing peptide in medullary thyroid carcinoma[J]．Oncology，2000，59（2）：122-125．

[10]王敏，吕萌，史小芹，等．胃泌素释放肽前体和神经元特异性烯醇化酶对小细胞肺癌诊断的差异几联合检测[J]．中华检验医学杂志，2013，36（11）：1008-1012．

[11]杨兴，孙桂荣，丛培珊，等．胃泌素释放肽前体对小细胞肺癌的诊断价值[J]．中华检验医学杂志，2012，35（8）：736-741．

[12]刘运秋，李素芹，耿贺梅，等．血清胃泌素前体释放肽片段31-98和神经元特异性烯醇化酶水平与肺癌不同病理组织学类型的关系及临床意义[J]．中国综合临床，2009，25（9）：974-977．

[13]倪军，郭子健，张力．单独与联合检测四项肺癌血清肿瘤标志物在肺癌诊断中的价值[J]．中华内科杂志，2016，55（1）：25-30．

[14]张萍，王红义，杨迎桂．血清 CEA，ProGRP，NSE 和 CYFRA21-1联合检测在肺癌诊断中的应用研究 [J]．现代检验医学杂志，2016，31（2）；56-59．

[15]张素真，赵旭辉，李书君．多种肿瘤标志物联合应用在肺癌诊断与鉴别诊断中的价值分析[J]．河北医药，2016，45（1）：40-42．