连翘花中连翘苷的超声提取工艺△

2018-03-09高首勤雒慧娟陈芳

中国现代中药 2018年1期

高首勤，雒慧娟，陈芳

(1.山西中医学院中药学院，山西晋中 030619；2.山西医科大学基础医学院，山西太原 030001)

连翘(Forsythia suspense)为木犀科连翘属的落叶灌木，在我国分布广泛，主要产地有山西、陕西、河南、山东等，而且其他各地几乎均有栽培。连翘的传统入药部位是果实，是经常使用的中药[1]。连翘最早记载于《神农本草经》，具有清热解毒、散结消肿之功能，主治痈疽、乳痈、瘰疬、痈疡肿毒、丹毒、高热烦渴、风热感冒、神昏发斑以及热淋尿闭等症[2]。近些年来，关于连翘果实与连翘叶的研究很多，包括有效成分和药理作用等方面。研究表明，连翘果实与连翘叶所含的化合物非常相似，均含有苯乙醇苷类、木脂素类、黄酮类以及三萜类等化学成分[3]，而且都具有降血脂、保肝、抗氧化、抗疲劳和抗肿瘤等作用[4]。然而相比之下，对连翘花的研究文献却甚少，连翘每年的花期为3—4月份，花期长、花量大，花色鲜黄且长时间不褪色，是一类及其丰富的资源，可以将其收集起来加以开发和利用。连翘苷是从连翘中提取分离出的一种活性成分，难溶于水，易溶于甲醇等有机溶剂[5]，具有良好的抗菌、抗炎、保肝、抗病毒和降血脂等功能[6-8]。根据宋小俊等[9]的报道，连翘花中也含有连翘苷且含量高于传统入药部位。但是目前关于连翘花中连翘苷的提取工艺研究报道却很少。

超声波提取法由于其具有费时短、低耗能、高效率、不破坏有效成分等优点，在中药化学成分的提取中表现出显著的优势。为了更加全面地开发和利用连翘花资源，本文采用正交试验法对连翘花中连翘苷的超声提取工艺展开了研究，为更有效地开发和合理利用连翘花资源提供依据。文献中提取的溶剂常用的有水、甲醇、乙醇等，其中对连翘花和叶的提取用甲醇的比较多，所以本文选取甲醇作为提取剂，当然提取成分用于药用要考虑到甲醇的毒性。

1 仪器和试剂

1.1 仪器

CP214电子天平(奥豪斯仪器有限公司)；UV-61005紫外可见分光光度计(上海元析仪器有限公司)；SB-5200DTDN型超声清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)；DE-200g万能高速粉碎机﹙浙江红景天工贸有限公司﹚。

1.2 试剂与药品

连翘花采于山西中医学院榆次校区本草园内，洗净，40 ℃烘干，粉碎备用；连翘苷对照品(上海融禾医药科技有限公司，批号：160403)；无水甲醇为国产分析纯试剂。

2 方法与结果

2.1 连翘花中连翘苷的提取

取新鲜连翘花，洗净，40 ℃烘干，粉碎，备用。准确称取连翘花粉末1.0 g，置于100 mL锥形瓶中，加入20 mL甲醇，浸泡1 h，超声波提取30 min，过滤，将滤液置于100 mL容量瓶中，定容，摇匀，作为样品溶液，备用。

2.2 连翘花中连翘苷的测定

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的连翘苷对照品5.00 mg，置于10 mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，定容，摇匀，得质量浓度为0.500 mg·mL-1的连翘苷对照品溶液。

2.2.2 检测波长的选择取2.2.1项中制备好的对照品溶液，在200～400 nm波长范围内进行扫描，在290 nm波长处有最大吸收且干扰小，故选择290 nm为测定波长。

2.2.3 标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL置于10 mL容量瓶中，定容，摇匀，以甲醇为空白对照溶液，在290 nm波长处测定吸光度，以连翘苷对照品浓度(X)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标得到回归方程：Y=8.476 2X+0.002 1，r=0.996 9，表明连翘苷对照品在0.01～0.07 mg·mL-1呈良好的线性关系。

2.2.4 精密度试验取配置好的对照品溶液在290 nm波长处测定吸光度值，平行操作6次，算得RSD值为1.05%，说明此仪器精密度良好。

2.2.5 稳定性试验精密吸取连翘花供试品溶液2 mL，定容到10 mL容量瓶中，在290 nm波长下分别间隔0、10、20、30、40、50、60 min测定吸光度值，计算得RSD值为1.28%，说明供试品溶液在1 h内稳定，所得连翘苷的稳定性良好。

2.2.6 重复性试验称取同一批药材样品，依据连翘花供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液，然后分别在290 nm处测定吸光度值，计算得RSD值为1.56%，说明此方法重复性良好。

2.2.7 加样回收率试验分别在6份已知含量的重复性样品中，精密移取连翘苷对照品溶液1.500 mg加入样品中，在290 nm波长处测吸光度值，结果见表1。

表1 加样回收率结果(n=6)

2.3 单因素试验

在其他条件相同时，分别选取甲醇浓度、超声时间和料液比3个影响提取效果的因素进行单因素试验，以期为正交试验中因素水平的设定提供参考。

2.3.1 不同甲醇浓度提取准确称取1.0 g连翘花粉末5份，以1∶20的料液比分别加入50%、60%、70%、80%、90%的甲醇，分别超声提取30 min。提取液过滤后，取2 mL滤液置于10 mL容量瓶中，定容，摇匀，在290 nm处测定吸光度值并计算提取率，见图1，使用70%的甲醇提取率最高。

2.3.2 不同时间提取准确称取1.0 g连翘花粉末5份，以1∶20的料液比分别加入70%的甲醇，分别超声提取20、30、40、50、60 min。提取液过滤后，取2 mL滤液置于10 mL容量瓶中，定容，摇匀，在290 nm处测定吸光度值并计算提取率，见图2，超声提取30 min时，提取率最高。

2.3.3 不同料液比提取准确称取1.0 g连翘花粉末5份，分别以1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30的料液比加入70%的甲醇，分别超声提取30 min。提取液过滤后，取2 mL滤液置于10 mL容量瓶中，定容，摇匀，在290 nm处测定吸光度值并计算提取率，见图3，料液比1∶25时提取率最高。