高效液相色谱法测定活血散中芍药苷的含量

2018-03-08陈丽艳

福建中医药 2018年1期

陈丽艳

（福建省福州市食品药品检验所，福建福州 350007）

活血散是福州市盘屿中医骨科医院的自制药品，由乳香、没药、赤芍等十几味中药经加工制成，具有舒筋活络、活血化瘀、行气消肿止痛的功效，用于治疗伤筋及骨折肿痛等。现行质量标准中没有含量测定项。赤芍为活血散的主药，在处方中起祛瘀止痛、凉血消肿之功效，其有效成分为芍药苷［1］。为了更好地控制该制剂质量，本文参考有关资料［2］，采用高效液相色谱法建立了活血散中芍药苷的含量测定，操作简便，重复性好，结果准确。

1 实验材料

1.1 实验仪器岛津LC-20A高效液相色谱系统（紫外检测器，自动进样器，柱温箱）（日本岛津公司）；KQ-500WDE三频数控超声波清洗器（昆山市超声仪器公司）；Milli-Q-Reference超纯水机（法国密理博公司）；BP211D电子天平（北京赛多利斯公司）。

1.2 试药与试剂芍药苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110736-201640，含量 96.4%）。乙腈为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯；活血散3批（福州市盘屿中医骨科医院，批号：161201、161203、161204）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：C18ODS柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，大连依利特）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（14∶86），流速：1.0 mL／min，检测波长：230 nm，柱温：35 ℃，进样量：20 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品的制备精密称取芍药苷对照品20.24 mg，置50 mL棕色量瓶中，加稀乙醇溶解，制成0.39 mg／mL的溶液，作为对照品贮备液。精密吸取该贮备液5 mL置50 mL量瓶中，用稀乙醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备取本品，混匀，取约1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，称定重量，超声（250 W，33 kHz）1 h，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备根据处方制备不含赤芍的阴性样品，按照供试品溶液制备方法制得活血散阴性对照溶液。

2.3 专属性考察取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按“2.1项”色谱条件进行测定，色谱图见图1～图3。结果显示供试品中芍药苷分离度好（分离度大于1.5），阴性溶液无干扰。

2.4 线性范围精密量取“2.2.1项”下的芍药苷对照品贮备液，用稀乙醇稀释成 3.90、7.80、19.51、39.02、58.53、78.04 μg／mL 梯度浓度溶液，分别进样20 μL。以芍药苷峰面积对溶液浓度进行线性回归，得回归方程 A＝2.595×104C－1.006×104，r＝0.9996。可见芍药苷溶液浓度在3.90～78.04 μg／mL范围内具良好的线性关系。

2.5 精密度实验取对照品溶液，连续进样6次，每次 20 μL，记录峰面积，RSD＝1.52%，表明精密度良好。

2.6 稳定性实验取同一份供试品溶液，每隔2 h进样1次，共进样6次，记录峰面积，RSD＝1.52%，由实验结果可见供试品溶液在12 h内是稳定的。

2.7 重复性实验取同一批号（批号161201）活血散样品，共6份，按“2.2.2项”的方法制备供试品溶液，进样，记录峰面积，结果芍药苷的平均含量为1.70 mg／g，RSD＝1.85%。

2.8 加样回收实验取同一批，6份已知含量的活血散0.75 g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入一定量芍药苷对照品，按“2.2.2项”供试品含量测定法依法测定，计算回收率。见表1。

2.9 样品测定取3批样品，按“2.2.2项”的方法制备供试品溶液，按“2.1项”的色谱条件进样，测定芍药苷含量，见表2。