儿童急性髓细胞性白血病中B淋巴细胞瘤-2基因和P-糖蛋白表达的临床价值

(郑州市第一人民医院，河南 郑州 450004)

儿童急性白血病是儿童常见恶性肿瘤之一，对患儿的生命健康安全造成了严重威胁[1]。目前，急性白血病的发病机制不明确。B淋巴细胞瘤-2基因简称(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)属于凋亡抑制基因，与恶性肿瘤的发生发展关系密切[2]。P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)是经典的耐药蛋白[3]。研究[4-5]证实，Bcl-2和P-gp均可导致包括急性白血病在内的恶性肿瘤的耐药。本研究为进一步探讨儿童急性髓细胞性白血病的发病和耐药机制，采用免疫组化S-P法检测儿童急性髓细胞性白血病骨髓细胞中Bcl-2和P-gp蛋白的表达，并以非恶性血液病患儿作为对照，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料入组郑州大学第一附属医院、郑州市第一人民医院2016年1月至2018年1月收治的经病理证实的儿童急性髓细胞性白血病100例，其中男74例，女26例；年龄1.5～13.3岁，中位年龄6.9岁；所有患儿均为初诊未治患儿。并选择同期住院的非恶性血液病患儿50例作为对照，其中男31例，女19例；年龄1.8～13.0岁，中位年龄7.2岁；免疫性血小板减少性紫癜21例，缺铁性贫血18例，原发性血小板减少11例。2组患儿的性别、年龄等基线资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究已经获得医院伦理委员会的审核通过，入组患儿家属也均已签署知情同意书。

1.2主要试剂Bcl-2单克隆抗体购自美国SAB公司；P-gp单克隆抗体购自美国Biolegend公司；S-P免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3免疫组化S-P法检测儿童急性髓细胞性白血病骨髓细胞中Bcl-2和P-gp蛋白的表达[6-7]采用免疫组化S-P法检测100例儿童急性髓细胞性白血病和50例非恶性血液病患儿骨髓细胞中Bcl-2和P-gp的表达。具体方法：1)首先提取骨髓单个核细胞，并用质量分数4%多聚甲醛固定；2)常规S-P免疫组化步骤检测骨髓单个核细胞中Bcl-2和P-gp蛋白的表达，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4免疫组化结果判读[6-7]Bcl-2和P-gp蛋白免疫组化结果均采用半定量法进行判读。每张切片均随机选取5个高倍镜(×400)视野，分别按照染色强度和阳性细胞比例进行评分，然后两者乘积作为结果，0～1分为(-)，2～3分为弱阳性(+)，4～5分为中等阳性(++)，6～7分为强阳性(+++)，其中阴性(-)、弱阳性(+)为阴性结果，中等阳性(++)、强阳性(+++)为阳性结果。

1.5统计学处理采用SPSS 19.0进行统计分析，Bcl-2和P-gp蛋白的阳性表达率等计数资料用百分数表示，比较用χ2检验，Bcl-2和P-gp蛋白的相关性采用Spearman相关分析法分析，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1不同患儿骨髓细胞中Bcl-2和P-gp蛋白表达的比较100例儿童急性髓细胞性白血病骨髓细胞中Bcl-2和P-gp的阳性表达率分别为72.00%(72/100)和44.00%(44/100)，高于非恶性血液病患儿的4.00%(2/50)和6.00%(3/50)，差异均有统计学意义(χ2=61.664、22.371，P均<0.001)。

2.2儿童急性髓细胞性白血病骨髓细胞中Bcl-2和P-gp蛋白表达的相关性100例儿童急性髓细胞性白血病骨髓细胞中Bcl-2和P-gp的表达呈正相关关系(rs=0.373，P<0.001)。见表1。

表1 儿童急性髓细胞性白血病骨髓细胞中Bcl-2和P-gp蛋白表达的相关性 n

注：rs=0.373，P<0.001

3 讨论

儿童急性白血病是儿童常见的血液系统恶性肿瘤，一旦发病则会对患儿的生命健康安全造成严重威胁[1]。儿童急性白血病的治疗目前多以化疗和骨髓移植等为主[8]。然而随着化疗的进行，大多数患儿会出现耐药现象，因此，儿童急性白血病的发病和耐药机制的研究成为了近年来研究的热点。而Bcl-2和P-gp均可导致包括急性白血病在内的恶性肿瘤的耐药，是耐药机制形成过程中的关键蛋白[9-10]。郑转珍等[11]的研究证实，儿童急性白血病骨髓细胞中Bcl-2存在高表达，且与髓外浸润和患儿预后有关。饶若等[12]的研究证实，儿童急性白血病骨髓细胞中P-gp存在高表达。本研究结果显示，100例儿童急性髓细胞性白血病骨髓细胞中Bcl-2和P-gp的阳性表达率分别为72.00%和44.00%，高于非恶性血液病患儿的4.00%和6.00%，差异均有统计学意义(χ2=61.664、22.371，P均<0.001)。100例儿童急性髓细胞性白血病骨髓细胞中Bcl-2和P-gp的表达呈正相关关系(rs=0.373，P<0.001)。总之，儿童急性髓细胞性白血病的骨髓细胞中存在Bcl-2和P-gp蛋白的高表达，这可能有助于儿童急性髓细胞性白血病的诊断和预后判断。