外周血T淋巴细胞亚群变化特点及血清因子表达水平的研究*

吴翠萍，赵 利

(山东省潍坊市益都中心医院 262500)

发热伴血小板减少综合征(SFTS)俗称“蜱虫病”，是由感染布尼亚病毒(SFTSV)引起的新发传染病，属自然疫源性疾病[1]。蜱为其主要传播媒介，但也有相关报道证实了人际间的传播，可能通过接触SFTS患者的血液而感染，裸露皮肤直接接触患者血液具有较高的危险性。SFTS患者的临床特征以发热、消化道症状、意识障碍、出血倾向、浅层淋巴结肿大伴外周血白细胞、血小板减少为主要特征，危重者可因休克、呼吸衰竭、弥散性血管内凝血及多器官衰竭而病死[2]。由于其传播媒介的独特，人群普遍易感，在丘陵、山林、森林等地区生活和生产的居民和劳动者，以及远赴该地区从事户外活动的人群具有较高的感染风险。流行病学资料显示，目前SFTS患者97%为农民，中老年居多，男性多于女性，我国已在河南、江苏、湖北、山东、安徽、辽宁等地区发现了SFTS，由于对其发病的机制尚不明确，有报道称与机体免疫损伤、免疫功能紊乱有关。 SFTS病死率约为10%[3-4]。现探讨SFTS患者外周血T淋巴细胞亚群变化特点及外周血清因子表达水平，为临床治疗及研究提供相关依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2013年5月1日至2016年12月1日该院确诊并治疗的SFTS患者138例，作为SFTS组，男84例，女54例，平均年龄(59.04±9.36)岁。另选取同期120例该院门诊健康体检者作为健康对照组，平均年龄(55.09±6.23)岁。

1.2纳入标准 依据流行病学史、实验室检测、临床表现进行确诊[5]：流行季节在丘陵、山林、森林等地工作、生活或旅行；发现前2周内有被蜱虫叮咬史或近2周内接触SFTS患者；病例标本分离出SFTSV；SFTSV标本核酸检测呈阳性；SFTSV免疫球蛋白M(IgM)抗体呈阳性；SFTSV IgM抗体阳转或恢复期滴度较急性期4倍以上增高者。

1.3方法

1.3.1T淋巴细胞检测 采集2组研究对象空腹外周静脉血5 mL,离心后取血清，-70 ℃冰箱保存，利用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞CD4+T细胞和CD8+T细胞，具体步骤如下[6]。(1)单细胞悬液制备：将(1×105)～(1×107)细胞置入1.5 mL离心管中3 000 r/min离心5 min，弃上清液；加入FACS缓冲液100 μL悬浮细胞。 (2)封闭表面Fc受体：在步骤(1)中加入Fc受体抗体0.5 μL(0.5 mg/mL)，水浴3 min。 (3)细胞与荧光抗体结合：在步骤(2)中加入荧光抗体1 μL(0.5 mg/mL)，水浴30 min。(4)洗细胞去除游离的荧光抗体：在步骤(3)中加入FACS缓冲液350 μL，轻轻混匀，3 000 r/min离心5 min，弃上清液，重复步骤(4)2次。 (5)上样前处理：取100 μL仪器缓冲液加入步骤(4)获得的细胞沉淀中，轻轻混匀悬浮细胞，将细胞悬液移入FACS专用管中，准备进行仪器检测和分析。

1.3.2外周血清因子表达水平检测 同时抽取患者空腹静脉血3 mL，运用酶联免疫吸附方法检测2组研究对象外周血清白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-β(TNF-β)、干扰素-γ(IFN-γ) 的表达水平。首先将血液经至少0.5 h凝集，然后取血清。将酶复合物用稀释液稀释后，加血清及阴性、阳性对照，经1 h孵育，然后洗板，加底物，0.5 h避光反应后加终止液即完成反应部分，然后读数并判断结果的阴性或阳性[7]。

2 结 果

2.12组研究对象外周血T淋巴细胞亚群结果比较 SFTS组患者外周血CD4+T淋巴细胞数量明显减少，为(22.69±5.02)%，健康对照组CD4+T淋巴细胞数量比SFTS患者多，为(56.11±4.14)%，差异有统计学意义(P<0.05)；SFTS组CD8+T淋巴细胞数量明显增多，为(39.03±4.09)%，健康对照组CD8+T淋巴细胞数量比SFTS患者少，为(24.51±4.82)%,差异有统计学意义(P<0.05)。SFTS组CD4+T/CD8+T感染SFTSV后明显降低。见表1和图1。

表1 2组研究对象外周血T淋巴细胞亚群结果比较

图1 2组研究对象T淋巴细胞亚群均数结果比较

组别IL-2TNF-βIFN-γSFTS组55.81±7.5272.91±6.0321.01±8.20健康对照组117.02±5.31112.84±4.91103.15±3.74t20.8114.8023.09P0.0020.0070.001

2.22组研究对象外周血清因子结果比较 SFTS组IL-2因子表达水平为(55.81±7.52)μg/L,健康对照组为(117.02±5.31)μg/L；SFTS组TNF-β因子表达水平为(72.91±6.03)μg/L，健康对照组为(112.84±4.91)μg/L；SFTS组IFN-γ因子表达水平为(21.01±8.20)μg/L，健康对照组为(103.15±3.74)μg/L；SFTS组患者感染SFTSV后IL-2、TNF-β、IFN-γ因子均明显下降，2组差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2和图2。

图2 2组研究对象外周血清因子表达水平均数结果比较

3 讨 论

SFTS是近年来出现的一种传染病，其发病机制缺乏系统研究，且该病临床症状与某些病毒性疾病相似，易发生误诊，影响患者临床治疗[8-10]。自2010年在河南地区1例SFTS患者分离出SFTSV后，临床诊断和实验检测才将SFTS和其他病毒性疾病进行区分。该病近年来发病率上升，目前尚无有效的疫苗和治疗药物，病死率高，已严重威胁生命健康，引起较多医学专家的关注[11-13]。老年群体对疾病及病毒的抵抗力较弱，感染SFTSV后自身免疫系统是否因病毒受到限制，损伤何种抗病毒细胞，将为SFTS的临床治疗提供思路。

T淋巴细胞是机体免疫系统内功能最重要的一大细胞群，正常机体内各个T淋巴细胞亚群相互使用，维持机体正常的免疫功能[14]。本研究结果表明，SFTS组患者外周血CD4+T淋巴细胞数量明显减少，约占健康者的50%，Th1为CD4+T细胞的一种重要细胞,主要分泌外周血清IL-2、TNF-β、IFN-γ因子，这些因子可促进机体免疫系统应答，病毒侵袭时第一时间进行防御和消灭。感染SFTSV后，CD4+T淋巴细胞数量减少，分泌外周血清IL-2、TNF-β、IFN-γ因子的能力减弱。本研究结果显示，SFTS组患者外周血清IL-2、TNF-β、IFN-γ因子表达水平与健康对照组比较，明显下降，差异有统计学意义(P<0.05);SFTS组T淋巴细胞亚群CD8+T淋巴细胞与健康对照组比较，显著上升(P<0.05)，因为在病毒侵袭时，机体因病毒刺激产生干扰素，干扰素是先天免疫系统的一部分，在干扰素的作用下，CD8+T淋巴细胞活性增强，说明CD8+T淋巴细胞具有抗病毒作用[15]。但CD4+T淋巴下降和CD8+T淋巴升高造成比例失衡，抑制免疫系统的正常工作。本研究结果表明，SFTS组CD4+T淋巴和CD8+T淋巴的比例为0.62±0.21，而健康对照组为2.15±0.72，差异有统计学意义(P<0.05)，说明了感染SFTSV后T淋巴细胞亚群出现变化和比例失衡。

综上所述，感染SFTSV后T淋巴细胞CD4+T明显降低，CD8+T淋巴细胞明显升高，2种T淋巴细胞比例失衡；外周血清IL-2、TNF-β、IFN-γ因子的表达水平降低。

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