复配植物精油体外抑菌效果的研究

涂玉蓉 李美娣 陈素珍 武 力＊

（1.广州华农大实验兽药有限公司 广州 510642；2.广东省现代养猪数据化工程技术研究中心 广州 510642）

近年来，舌尖上的安全受到了严峻的威胁以及关注，将畜禽养殖过程中抗生素使用的规范性推到风口浪尖上，一些国家已经或正在研究禁止在畜禽养殖过程中使用抗生素，我国也出台了各种政策以加大抗生素使用规范性的监管力度。随着环保要求越来越严及2016年“禁抗令”的出台[1]，预示着寻找开发新型、绿色、安全抗生素，杜绝抗生素滥用已经是不可回避的事实，寻找抗生素的替代物已成为研究的热点。

植物精油属于天然、绿色、无残留物质，具有来源广泛、抗菌谱广、作用迅速、不易产生耐药性等特点。牛至油已被我国农业部批准作为一种可长期添加的药物饲料添加剂[2]，从而说明天然植物提取物有望替代抗生物，具有较大的市场潜力。本研究选取香芹酚、肉桂醛和麝香草酚对大肠杆菌标准株44102、大肠杆菌野毒株O78、鸡白痢沙门氏菌进行抑菌试验，并且对精油之间复配的协同作用进行研究。

1 材料与方法

1.1 供试菌种与培养基 大肠杆菌标准株44102、大肠杆菌野毒株O78、鸡白痢沙门氏菌为广州华农大实验兽药有限公司研发中心保存菌种。麦康凯营养琼脂培养基、MH琼脂培养基、MH肉汤为广东环凯生物科技有限公司产品。

1.2 主要仪器 超净工作台：苏州净化设备有限公司；立式压力蒸汽灭菌器：江阴滨江医疗设备有限公司；隔水式电热恒温培养箱：上海跃进医疗器械厂；生化培养箱：上海一恒科学仪器有限公司；8道F3移液器：美国热电；酶标仪：赛默飞世尔（上海）仪器有限公司；微型振荡器：上海沪西分析仪器厂有限公司。

1.3 菌悬液制备 将4℃斜面保存的大肠杆菌标准株44102、大肠杆菌野毒株O78、鸡白痢沙门氏菌活化，划线接种于新鲜的麦康凯培养基上，37℃培养24 h，挑取单个菌落接种于MH肉汤中，37℃培养24 h，以MH肉汤校正菌液浓度为106CFU/mL，备用。

1.4 药液制备 以乙醇：水溶液（1:1）为溶剂，将香芹酚、肉桂醛和麝香草酚配制成浓度为5 000 ug/mL 的母液[3]。

1.5 植物精油单成分的最小抑菌浓度 采用96孔板微量肉汤稀释法[4]，测定香芹酚、肉桂醛和麝香草酚单成分对大肠杆菌标准株44102、大肠杆菌野毒株O78、鸡白痢沙门氏菌的最小抑菌浓度（MIC）。

1.6 复配植物精油联合抑菌效果测定 植物精油的复配试验选择棋盘稀释法[5]，将香芹酚、肉桂醛和麝香草酚两两之间按1:1配比混合，母液中2种成分的浓度均为2 500 ug/mL。用96孔板微量肉汤稀释法测定复配精油对3种菌的抑菌浓度（MIC）。以分级抑菌浓度指数(FIC)作为联合抗菌试验效果的判定依据[5]，FIC的计算公式：FIC=MICA组分联合/MICA组分单用+MICB组分联合/MICB组分单用。

FIC指数的判断标准为：FIC≤0.5时为协同作用（S）；0.5＜FIC≤1 时为相加作用（A）；1＜FIC＜4 时为无关作用（I）；FIC≥4 时为拮抗作用（AN）。

2 结果与分析

2.1 植物精油单成分的最小抑菌浓度 采用96孔板微量肉汤稀释法测定香芹酚、肉桂醛和麝香草酚单成分对大肠杆菌标准株44102、大肠杆菌野毒株O78、鸡白痢沙门氏菌的最小抑菌浓度（MIC），结果见表1。

表1 植物精油单成分的最小抑菌浓度

3种植物精油对3种菌都表现出了抑菌作用，最小抑菌浓度在156.25 ug/mL～312.5 ug/mL。3种精油对鸡白痢沙门氏菌的抑菌效果都较好，最小抑菌浓度为156.25 ug/mL，对大肠杆菌野毒O78的抑菌效果稍差，最小抑菌浓度都为312.5 ug/mL。

2.2 复配植物精油联合抑菌效果测定 采用棋盘稀释法将香芹酚、肉桂醛和麝香草酚两两之间按1:1配比混合，测定复配精油对3种菌的最小抑菌浓度（MIC）。以分级抑菌浓度指数(FIC)作为联合抗菌试验效果的判定依据。复配植物精油联合抑菌结果见表2。

表2 复配植物精油对供试菌的FIC指数

香芹酚与肉桂醛复配对3种菌都表现出相加作用（0.5＜FIC≤1）；香芹酚与麝香草酚复配对大肠杆菌44102、鸡白痢沙门氏菌表现出相加作用 （0.5＜FIC≤1），而对大肠杆菌野毒O78表现出协同作用（FIC≤0.5）；肉桂醛与麝香草酚复配对大肠杆菌44102、大肠杆菌野毒O78表现出相加作用 （0.5＜FIC≤1），而对鸡白痢沙门氏菌为无关作用 （1＜FIC＜4）。

3 讨论与结论

本文研究了香芹酚、肉桂醛和麝香草酚对大肠杆菌标准株44102、大肠杆菌野毒株O78、鸡白痢沙门氏菌的抑菌作用。采用微量稀释法测定各成分对3种菌的最小抑菌浓度，各成分都对大肠杆菌、沙门氏菌有抑制效果。对植物精油之间的相互作用也进行了研究，香芹酚、肉桂醛和麝香草酚两两复配后各成分的最小抑制浓度有所降低，表明它们之间存在协同增效的作用。

[1]吴志刚,罗敏婷,魏浩.8种植物精油对肠道常见微生物体外抑菌效果的研究[J].现代食品科技,2017,33(6):133-141.

[2]韩飞,李瑾,潘悄悄,等.新型天然植物抗生素牛至油的研究进展[J].中国新药杂志,2015,24(3):303-308.

[3]王帆,杨静东,王春梅,等.复配植物源杀菌剂的开发研究[J].江西农业学报,2015,22(2):87-89.

[4]Cosention S,Tuberoso C I G,Pisano B,et al.In-vitro antimicrobial activity and chemical composition of Sardnian Thymus essential oils [J].Letters in Applied Microbiology,1999,29:130-135.

[5]赵丰丽,李洁荣,杨健秀.黄皮叶不同溶剂提取物抗过敏活性研究[J].食品工业科技,2009,30(1):110-112.