Notch-1和TMEM16A在食管鳞癌组织中表达及临床意义

2018-02-27刘玉含康运凯

中国老年学杂志 2018年3期

刘玉含闫琛康运凯魏攀

(郑州人民医院检验科，河南郑州 450003)

食管癌主要类型为食管鳞状上皮细胞癌，约占90%。食管癌发生涉及多个原癌基因、抑癌基因及其相关蛋白质的改变〔1〕。Notch-1是Notch信号通路中4个Notch同源体之一，在细胞分化、发育、增殖和凋亡过程中起重要作用，在甲状腺癌等一些恶性肿瘤中呈现抑癌基因表达〔2〕。TMEM16A是TMEM16膜蛋白家族成员之一，是钙激活依赖性的氯离子通道分子基础，在结肠癌等一些恶性肿瘤中异常高表达〔3〕。本文旨在探讨Notch-1和TMEM16A蛋白在食管鳞癌发病机制中的作用及二者的相关性。

1 材料和方法

1.1材料 2012～2013年郑州人民医院存档的手术切除食管鳞癌标本共55例，术前均未接受放疗、化疗或免疫治疗。其中男35例，女20例；年龄<60岁为13例，≥60岁为42例。取距病变组织5 cm以上的食管正常组织55例为正常对照组。标本均经10%甲醛溶液固定过夜，次日取材、脱水、石蜡包埋，连续切片，行HE染色及免疫组化染色。

1.2主要试剂兔抗人TMEM16A多克隆抗体购自英国Abcam公司，羊抗人Notch-1多克隆抗体、免疫组化S-P试剂盒和DAB显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3方法采用免疫组化法对Notch-1和TMEM16A进行染色，操作步骤按照试剂说明书进行。用0.01 mmol/L的磷酸盐缓冲液(PBS，pH7.4)替代一抗为阴性对照。以英国Abcam公司提供的阳性切片为阳性对照。Notch-1主要表达于细胞质中，以细胞质内出现棕黄色或黄褐色颗粒判读为阳性细胞；TMEM16A表达于细胞膜上和细胞质中，以细胞膜上或细胞质内出现棕黄色或黄褐色颗粒判读为阳性细胞。

1.4评价标准观察并记录组织切片中的两项指标，染色阳性细胞占细胞总数的百分率和阳性细胞着色程度，综合评估试验结果。组织切片中阳性细胞占细胞总数的百分比可分为4级：阳性细胞<10%，0分；10%～25%，1分；26%～50%，2分；>50%，3分。组织切片中细胞染色强度分为3级：未着色，0分；淡黄色，1分；棕褐色2分。2项指标的结果相乘得到0分为(-)，≥1分为(+)。染色结果及评分由2位经验丰富的病理科医生独立操作进行。

1.5统计学分析采用SPSS13.0软件进行χ2检验、Spearman相关分析。

2 结果

2.1Notch-1和TMEM16A在正常食管和食管鳞癌中的表达正常对照组和食管鳞癌组Notch-1、TMEM16A阳性率分别为96.36%(53/55)、14.55%(8/55)；47.27%(26/55)、55.36%(31/55)；二者比较差异均有统计学意义(P<0.05)。

2.2Notch-1和TMEM16A表达与食管鳞癌患者临床病理特征的关系二者蛋白表达均与食管鳞癌分化程度和淋巴结转移有关；Notch-1蛋白表达还与TNM分期、浸润深度有关(P<0.05)。见表1。

2.3食管鳞癌组织中Notch1和TMEM16A蛋白表达的相关性 Notch1与TMEM16A阳性表达呈明显负相关(r=-0.497，P=0.001)。

表1 食管鳞癌组织中Notch-1和TMEM16A阳性表达在不同临床病理特征中的关系(%)

3 讨论

Notch基因最早是在果蝇中被发现，Notch信号通路是一种保守的信号转导通路，在多种组织及器官的早期发育过程中，可调节多种细胞的生长、发育、增殖和凋亡〔4〕。目前已发现的人Notch信号受体有4种(Notch-1、Notch-2、Notch-3和Notch-4)，其中最主要的为Notch-1，Notch-1信号激活可抑制血管内皮细胞萌芽及血管管腔扩大，从而抑制血管新生；信号阻断可诱发血管内皮细胞增生〔5〕。除了调控血管内皮细胞的增生和凋亡外，Notch-1信号异常表达还可诱导肿瘤。目前在人类的许多恶性肿瘤中均发现Notch-1受体的异常表达，但在不同组织的肿瘤及肿瘤发展的不同阶段，Notch-1的作用可能不同：在结肠癌〔6〕中，Notch-1呈高表达状态，可促进肿瘤生成，起癌基因作用，在肺癌〔7〕中，Notch-1呈低表达状态，起抑癌基因作用。

本实验结果提示Notch-1可能在食管鳞癌发病机制中起抑癌基因的作用。Notch-1有望成为食管鳞癌早期诊断和评估预后的辅助指标之一。

钙激活氯离子通道(CaCCs)是一类离子通道蛋白，广泛分布于人体的多种组织，尤其是分泌器官上皮细胞，如气管和消化道黏膜上皮〔8〕，在多种生理功能中发挥重要作用，TMEM16A是CaCCs的分子基础〔9〕。TMEM16A基因定位于人染色体11q13区域上，含有26个外显子，其编码的TMEM16A蛋白含有986个氨基酸，相对分子量为114 000 kD。研究发现TMEM16A高表达于结肠癌〔10〕、眼睑基底细胞癌〔11〕和胃腺癌〔12〕等多种恶性肿瘤组织中。

本实验结果提示TMEM16A可能与食管鳞癌的发生、发展相关。TMEM16A的高表达对判断食管鳞癌患者的肿瘤分化程度有重要的参考价值，TMEM16A可作为评价肿瘤预后的标准之一。

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11马浏莉.眼睑基底细胞癌术后组织中ILK、Tmem16a与Ki67表达的关系及意义〔J〕.青海医学院学报，2014；35(4)：272-5.