海棠果提取液对亚硝酸盐清除作用的体外试验研究

陶银华+石娜娜+高清山

摘要 本文研究了海棠果提取液对亚硝酸盐的清除作用，通过正交试验研究了反应温度、反应时间、添加量对亚硝酸盐清除率的影响。结果表明，当反应温度为60 ℃、反应时间为60 min、海棠果待测液添加量为10%时，亚硝酸盐的清除率可达96.53%。

关键词 海棠果；亚硝酸盐；清除作用

中图分类号 TS201.1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）02-0253-02

Study on Scavenging Effect of Malus prunifolia Extract on Nitrite in vitro

TAO Yin-hua SHI Na-na GAO Qing-shan

（Weifang Engineering Vocational College，Qingzhou Shandong 262500）

Abstract This paper studied the scavenging effect of Malus prunifolia extract on nitrite.The effect of reaction temperature，reaction time and amount on nitrite scavenging rate was studied by orthogonal experiment.The results showed that when the reaction temperature was 60 ℃，the reaction time was 60 min，Malus prunifolia liquid dosage was 10%，the nitrite scavenging rate could up to 96.53%.

Key words Malus prunifolia；nitrite；scavenging effect

海堂果（Malus prunifolia），原名红厚壳，又名海棠木、琼州海棠、君子树等，为蔷薇科乔木，分布于我国河北、山东、山西等省区。海棠果实中含有香豆素类、口山酮类、黄酮类、萜类等化合物[1]，具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌消炎、保护毛细血管等功能[2-6]。众多学者对海棠果有效成分的含量[7]、活性物质提取[8-9]、抗氧化活性[10]等方面进行了深入的研究，但关于海棠果清除亚硝酸盐的研究鲜见报道。本文研究了海棠果乙醇提取液清除亚硝酸盐的能力，以期为海棠果的开发利用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

试验材料：八棱海棠果（2016年10月采自潍坊工程职业学院校区）；芦丁（试剂有限公司，纯度99.9%）；抗坏血酸（AR）；亚硝酸钠（AR），对氨基苯磺酸（AR），盐酸萘己二胺（AR），柠檬酸（AR），盐酸（AR）。试验仪器：UV-1600型紫外可见分光光度计（北京瑞利分析公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 海棠果提取液的制备。新鲜海棠果去核，切块，800 W、50 s微波灭酶，打浆，准确称取5 g，加入80%乙醇25 mL，浸提30 min，4 000 r/min离心10 min，取上清液，重复2次，合并滤液。

1.2.2 体外亚硝酸盐清除率的测定。准确移取pH值为3.0的柠檬酸-柠檬酸二钠缓冲液10.00 mL置于50 mL容量瓶中，分别加入100 μg/mL NaNO2溶液2.00 mL，一份加入一定量的海棠果待测液，摇匀，恒温水浴反应一定时间，另一份作空白试验。精密吸取上述反应液2.00 mL，分别加入0.4%对氨基苯磺酸2 mL，摇匀，静置5 min；再加入0.2%盐酸萘乙二胺1 mL，摇匀，静置15 min，于538 nm处测定吸光度，分別为A1、A0[11]。试验重复3 次。按下式计算海棠果液对亚硝酸盐的清除率。

亚硝酸盐清除率（%）=[（A0-A1）/A0]×100

式中：A0为未加海棠果待测液的标准管吸光值；A1为加入海棠果待测液的吸光值。

2 结果与分析

2.1 单因素试验

2.1.1 反应温度对亚硝酸盐清除率的影响。设定反应时间60 min，待测液用量10 mL，考察反应温度对亚硝酸盐清除率的影响，结果见图1。由图1可以看出，亚硝酸盐的清除率随着反应温度的增加而增加，当反应温度>50 ℃时，清除率增加较为明显，当反应温度<40 ℃和>60 ℃时，亚硝酸盐清除率变化不明显。因此，最佳反应温度为60 ℃。

2.1.2 反应时间对亚硝酸盐清除率的影响。由图2可以看出，随着反应时间的增加，亚硝酸盐的清除率增加较快，当反应时间>60 min时，亚硝酸盐清除率的增加变慢。因此，最佳反应时间为60 min。

2.1.3 海棠果待测液用量对亚硝酸盐清除率的影响。由图3可以看出，亚硝酸盐的清除率随着海棠果待测液添加量的增加而增加，但当待测液的添加量>8 mL时，亚硝酸盐清除率的斜率明显降低，亚硝酸盐清除率提高幅度变缓。考虑到溶剂回收及体系稳定等因素，确定最佳待测液添加量为8 mL。

2.2 正交试验

在单因素试验的基础之上，设计3因素3水平的L9（33）正交试验，因素水平见表1，正交试验结果见表2，方差分析见表3。

由表2、3可以看出，各因素对亚硝酸盐清除率的影响大小依次为反应量>反应时间>反应温度，清除亚硝酸盐的最佳条件为反应温度60 ℃、反应时间60 min、海棠果提取液添加量10%。经验证，该条件下亚硝酸盐的清除率可达96.53%。

3 结论

通过单因素试验，考察了反应时间、反应温度、海棠果提取液对亚硝酸盐清除率的影响，并在单因素确定的范围内，通过正交试验考察了各因素对亚硝酸盐清除率的影响大小，各因素对亚硝酸盐清除率的影响大小为反应量>反应时间>反应温度，确定了最佳清除条件为反应温度60 ℃、反应时间60 min、海棠果待测液添加量10%。endprint

4 参考文献

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