泰万菌素对白羽鸡鸡毒支原体阳性率控制试验

2018-02-19陆彦苑中奇牛志强王雨刘一闻张雯露李新国

中国动物保健 2018年11期

陆彦，苑中奇，牛志强，王雨，刘一闻，张雯露，李新国**

（1.北京农学院动物类国家级实验教学示范中心北京 102206；2.中牧实业股份有限公司北京 100070；3.焦作市农经管理站河南焦作 454002）

鸡毒支原体病是由呼吸道传染的一种鸡的慢性呼吸道疾病，并且可以遗传至下一代，饲养密集的鸡场更利于本病的扩散和传播。根据对中国20个省、市的血清学调查发现，鸡群中鸡毒支原体感染率接近80%，鸡毒支原体病己成为鸡场最难控制的疾病之一。鼻液增加，呼吸困难，产蛋率和蛋重下降，一侧或两侧眼萎缩或失明是本病的临床特征。在检测方面，因为平板凝集法同时具有准确、灵敏、检出率高的特点，而且可重复性高，所以临床上常用血清学检测中的平板凝集法（SPA）来检测鸡毒支原体。泰万菌素是治疗本病的特效药物，它与敏感菌的核蛋白体50S亚基结合，通过对转肽作用和mRNA位移的阻断，从而抑制肽链的合成和延长，影响细菌蛋白质的合成。泰万菌素具有高效、低毒、低残留等优点。主要用于防治猪流行性肺炎、鸡毒支原体病、猪痢疾、猪增生性肠炎等。本试验采用血清学平板凝集法检测白羽肉种鸡鸡毒支原体抗体水平，通过统计鸡毒支原体抗体阳性率的变化分析泰万菌素对白羽肉种鸡鸡毒支原体病的防控效果。

1 试验材料及方法

1.1 试验材料

泰万菌素，由中牧实业股份有限公司提供。鸡毒支原体虎红血清平板凝集试验抗原、鸡毒支原体标准阳性血清、鸡毒支原体标准阴性血清、待检血清。玻璃板、吸管、金属丝环（内径7.5~8.0mm）、酒精灯、2mL注射器、2mL离心管、枪头、消毒盘和酒精棉等。

1.2 试验动物及分组

河南省某鸡场54周龄白羽肉种鸡，每栋6,200羽；分别选取规模和日龄相同的白羽肉种鸡舍9栋、10栋作为试验组和对照组。

1.3 血清样品的采集

每组给药前1d及停药后1d随机抽检50只白羽肉种鸡（30只母鸡，20只公鸡），经翅静脉采血1~2mL注入离心管中，室温静置1h后在4℃冰箱中保存。在实验室对全血3,000rpm离心10min，取血清，标记后待检。采血时间分别为给药前1d及停药后1d，给药时间为5d。

1.4 血清平板凝集试验

在20~25℃环境条件下，用移液器吸取抗原25μL，垂直滴于玻璃板上，然后取25μL待检血清与抗原充分混合均匀，涂成直径约为1.5~2cm液面，摇动玻璃板，在2min内判定结果。发生50%（++）以上凝集，为阳性；不发生凝集，为阴性；介于二者之间，为可疑反应。每次检测均设阳性、阴性血清对照。在2min之内，阳性血清应出现（++）以上的凝集，阴性血清不凝集。

表1 试验组与空白对照组

1.5 数据分析

根据试验结果进行记录，统计数据并且比较分析。

2 试验结果

2.1 结果判定

凝集反应判定标准如下：

++++：出现大的凝集片或颗粒，液体完全透明。

+++：有明显的凝集颗粒，液体几乎完全透明。

++：有较明显的凝集颗粒，液体稍透明。

+：稍能见到凝集，液体混浊。

–：无凝集现象，液体均匀混浊。

2.2 血清平板凝集试验结果

9号鸡舍给药泰万菌素前公鸡鸡毒支原体血清阳性率45%，母鸡鸡毒支原体血清阳性率60%，总计鸡毒支原体血清阳性率54%；给药后阳性率分别为30%、37%和34%；给药前后阳性率比较分别下降15%、23%和20%。在数据上呈现明显的下降。

10号鸡舍对照组公鸡鸡毒支原体血清阳性率45%，母鸡鸡毒支原体血清阳性率37%，总计鸡毒支原体血清阳性率40%；空白给药后对照组阳性率分别为50%、30%和38%；试验前后阳性率比较分别升高5%、下降7%和下降2%。数据上呈现变化不明显。

2.3 凝集试验结果分析

由图1可以看出，给药泰万菌素前鸡毒支原体血清阳性率普遍高于40%，给药后鸡毒支原体血清阳性率水平明显降低，阳性率下降幅度达20%左右；对照组在此期间鸡毒支原体血清阳性率变化不明显。

表2 给药前后鸡毒支原体阳性率变化

图1 泰万菌素对白羽肉种鸡鸡毒支原体阳性率控制试验结果分析

总体来说，泰万菌素组给药前鸡毒支原体血清阳性率54%，给药后鸡毒支原体血清阳性率下降至34%，下降幅度达20%；对照组给药前后鸡毒支原体血清阳性率分别为40%和38%，基本保持稳定。说明泰万菌素对白羽肉种鸡支原体防控效果明显。

2.4 试验结论

54周龄白羽肉种鸡给药泰万菌素后，能明显降低血清中鸡毒支原体抗体的阳性率，反映出泰万菌素对肉种鸡鸡毒支原体有很好的疗效。

2.5 试验讨论

在鸡血的采集和样品保存方面，为了保证待测血清充足，尽量采集1.5mL以上的全血，在实验室离心后得到100μL以上的血清用于检测以及重复验证；血样采集后采用常规的血清分离方法，为保证样本的准确性，在血样采集保存和血清分离过程中并未添加抗凝剂和防腐剂，因此部分血样在运输和保存过程中产生溶血现象，致使分离出的血清呈现红色。但轻度溶血组标本与对照组标本在检查结果上的差异无统计学意义。所以溶血的血清基本不会对本试验的结果产生影响。试验材料选取的是隶属于中国兽医药品监察所北京中海生物科技有限公司生产的鸡毒支原体虎红血清平板凝集试验抗原、标准阳性血清及标准阴性血清，在每次试验前恢复至室温，并且进行标准血清检查，检测结果与标准血清结果一致后进行样品检测，以保证试验结果的准确性。可重复的原则是科学事实成立的重要判据，是科学确定性、普遍性的奠基石。但是对于已经产生抗体的机体来说，产生治疗效果的机体抗体水平下降需要一定的时间，因此在给药后通过鸡毒支原体抗体阳性水平的变化来评价药物的治疗效果，可能不能及时地反映出药物的真实治疗效果，所以在样品检测过程中如遇到可疑结果，有充足的待测血清进行重复验证，重复结果一致后进行样品的判定。建议可以在给药后分不同时间对鸡毒支原体抗体水平进行检测，并通过其他检测方法同步验证鸡毒支原体抗原及抗体水平的变化。最后，分组是科研设计的重要环节。分组合理与否，直接影响结果的可靠性，分组处理是为了进行比较，为了做出合乎于逻辑的判断，也是为了从比较中验证研究的目的。在本试验采集的200个样品中分析给药泰万菌素对鸡毒支原体的血清阳性水平的控制作用，设置了对照组100个样品，在对照组、给药组的试验样品一致的前提下进行结果判定，保证试验结果的科学性。大样本时随机化分组是适宜的，而小样本时随机化不能保证组间一致,所以小样本时要用人为加随机的方法来保证组间一致性,其实质是更好地体现随机化原则。设置公鸡母鸡不同性别的对照使得试验结果更加精细，但使得同级比较的数量减少，造成数据统计结果误差可能增大。结合本试验各项数据结果可以发现：当药物浓度达到250ppm饮水给药时，由中牧实业股份有限公司提供的泰万菌素对鸡体内的鸡毒支原体有良好的抑制作用，本药物能显著降低鸡体内的抗体阳性率。