乳品中残留抗生素及检测技术

马泽宁

（山西省饲料兽药监察所，太原 030027）

0 引言

乳制品是我国社会大众的重要营养食品，乳制品中抗生素含量超标，会损害消费者的身体健康。同时乳制品抗生素残留，还会进一步降低我国乳制品在国际上的地位，引起贸易摩擦。采取有效的检测技术，及时发现乳制品中残留的抗生素就成为现阶段需要重点解决的问题。

1 残留抗生素种类

第一，β-内酰胺类抗生素。这些抗生素应用较为广泛的主要有青霉素类抗生素和头孢霉类抗生素，这2种抗生素经常用于牛等家畜的临床疾病治疗，主要会残留在牛乳中。第二，四环素类抗生素。应用较为广泛的主要有四环素、金霉素、土霉素和盐酸多西环素，这类抗生素属于广谱抗菌的抗生素。第三，氨基糖苷类抗生素。这类抗生素中比较常见的主要有庆大霉素、链霉素、新霉素和壮观霉素等，同样都是奶牛疾病治疗中经常使用的抗生素。第四，氯霉素类抗生素。这类抗生素主要涉及到氯霉素、甲砜霉素和富甲砜霉素。这类抗生素由于副作用和毒性较大，严格限制使用量。第五，大环内酯类抗生素。这类抗生素主要有红霉素、林可霉素、螺旋霉素和盐霉素等。第六，磺胺类抗生素。磺胺类抗生素是奶牛养殖中使用最频繁的一类抗生素之一，这类抗生素主要有磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲嘧啶和磺胺嘧啶等。

2 检测原理与技术

2.1 检测原理

传统检测技术的原理是基于乳制品中的抗生素能够对某些微生物产生一定的抑制作用，通过扩散或浑浊度的比较，对抗生素种类和含量作出大致的判断。在乳品中，抗生素浓度越高，某些微生物生长的异质性就越强，生长出来的菌落也就越小。而免疫检测法是基于抗生素抗体的一种检测方法。在动物体内，应用含量超标的抗生素后，会产生相应的应激变化，在体内形成抗体，通过使用抗原和抗体进行特异性反应，确定抗生素的种类和含量。该种检测方法是利用细胞质因子专一性的特点，能够和某些抗生素进行特异性反应，通过整个反应系统中酶活性的变化和基质电流的变化，判断检测物种是否存在抗生素，同时还能够对抗生素的浓度做进一步的推断。最终达到提高检测效率，缩小资金和成本投入的目的。而高效液相色谱和质谱检测技术，能够实现对乳制品中抗生素浓度和含量种类的定量定性分析判断，这2种方法主要是基于它们具有测定痕量物质的优越性。

2.2 检测技术

结合FDA兽医学中心的相关规定，乳品中残留抗生素检测技术，要确保敏感性强、特异性高。抗生素的检测方法，要想被认可，并形成统一的技术规范，对其检测标准值有很高的要求。某种检测技术的最低检测范围应该控制在95%以上。在对某种检测技术进行评价时，主要涉及以下几个方面。

第一，对检测技术的敏感性和特异性进行判断。在进行特异性判断过程中，所选择的乳制品要绝对不含有抗生素，体细胞数量要大于106个/mL，检测结果为阴性，由此能够证明，所选择的检测技术具有很好的特异性。在进行抗生素敏感性检测中，在鲜奶中添加MRL水平的抗生素，最终得出的结果是阳性。第二，乳品中抗生素残留最低浓度值检测。在进行最低浓度值测定中，会采集60个左右的样本进行检测。通过对60个样本进行全面检测，根据相应的浓度变化，绘制出检测标准曲线，反应乳品中最低浓度值。第三，评价因素。要选择含有内毒素，且体细胞含量在2×106～6×106 个/mL的乳品，要确保特异性结果高达90%以上。第四，现场检验。利用该种检测技术，在各个地区不同规模的养殖场，不同抗生素类型的奶样进行全面检测，将得到的检测结果和液相色谱分析法检测结果进行对照，查看两者之间的差异性[1]。

2.2.1 微生物检测法

微生物检测法是我国鲜奶抗生素残留应用最为常见的一种检测方法，该检测方法的原理是基于抗生素对某些微生物具有抑制作用。具体操作包含以下几个方面：在脱脂乳培养基上接种单菌种，7 ℃保温箱内培养，15 h后选择培养物，按照1∶1的比例进行充分稀释，作为待检溶液。将得到的溶液，在80 ℃环境下水浴，加热5 min，再冷却到37 ℃，然后向其中加入事先制备好的菌液，混合均匀后，按照上述的加热标准，再继续加热2 h，并向其中加入指示剂，按照上述温度继续加热30 min，如果整个溶液的颜色变成红色，则表明乳品中不存在抗生素，抗生素残留水平在该种检测方法的最低浓度以下；如果颜色不变，则表示待检溶液中存在两个抗生素，显示为阳性。微生物检测法在检测乳汁中青霉素、链霉素、庆大霉素、卡那霉素等方面具有较强的灵敏性[2]。该种方法具有操作简便，费用低，作用时间较长等特点。菌液制备是该种检测方法成功的关键。

2.2.2 戴尔沃检测法

戴尔沃检测法同样属于微生物检测法范畴。该种方法主要利用嗜热芽孢菌，通过2～3 h的培养后，会产生酸，而产生的酸会因为指示剂分解而呈黄色。具体操作方法如下：在无菌环境下，将相应的指示剂放入洁净试管内，然后向试管内加入待检乳品，恒温箱内64 ℃培养3 h，观察整个反应溶液颜色的变化情况。如果在试管底部，有超过2/3的固体介质呈现黄色，则可判定为阴性；如果变成紫色，则可判定为阳性。该种检测方法具有操作简便，检测时间短，成本低的特点。

2.2.3 酶联免疫吸附检测法

该种方法的基本操作是将待检的乳样放入到试管中，混合均匀，加热样品和检测板，作用5 min。向样品孔中加入待检乳汁，当激活圆环开始退却时，按Snap键，作用10 min后，使用读数仪器读取并打印结果，检测结果小于1.05 h为阴性，大于1.05 h为阳性，该种方法普遍应用到β-内酰胺类多种抗生素检测。该种检测方法操作时间短，在10 min以内即可以判断出乳汁中β-内酰胺类、四环素类、磺胺类等抗生素的残留量[3]。

2.2.4 现代仪器分析法

现代仪器分析法主要是利用抗生素分子中基因所具有的特殊反应或理化特性，通过利用现代分析仪器，对抗生素残留情况进行精确化分析的一种方法，如色谱法、荧光法、色谱质谱联用法，其中应用最为广泛的是色谱法。色谱法主要有气相色谱检测法、高效液相色谱检测法、反相高效液相色谱法等，它主要应用色谱理论，通过使用高精度的检测仪器对乳品中的抗生素进行精确检测，具有检测速度快、检测效率高、操作自动化的特点。整个检测流程包含样品提取、脱蛋白处理、离心处理、层析柱净化、衍生化等步骤。该种方法能够详细具体的检测出抗生素的具体含量。利用现代仪器分析法，具有快速分离、检测效率高、自动化程度高的特点，能够精确检测出抗生素的含量，灵敏性高，但整个操作过程较为繁杂，消耗时间较长，同时在操作中还需要相应的昂贵仪器设备和试剂，通常在大型实验室使用，不适合在基层快速检测应用。