小鹅瘟实验室诊断及其生物制品

刘艳霞

（辽宁益康生物股份有限公司，辽阳 111000）

0 引言

小鹅瘟是由小鹅瘟病毒引起的一种雏鹅病毒性传染病，表现为急性或者亚急性败血症。该病具有高度的传染性和致死率，是目前困扰养殖户的一个重要疾病。小鹅瘟与鹅病毒性肠炎具有极为相似的临床症状以及流行特点，在诊断时较难区分，而且小鹅瘟如果与其他疾病发生混合感染，就更难以进行确切的诊断。因此，不能仅依靠其流行特点、临床症状以及病理解剖进行小鹅瘟的诊断，还需要采用实验室的诊断方法进行确诊。

1 实验室诊断

随着科学技术的不断发展，小鹅瘟病毒的实验室检测方法也取得了很大的进步，由原来传统的检测方法逐渐向分子生物学技术快速发展，为小鹅瘟的诊断提供了新的技术保障。小鹅瘟的实验室检测方法主要有病毒的分离与鉴定、电镜检测、PCR技术、胶体金免疫层析技术等。

1.1 病毒分离与鉴定

小鹅瘟病毒能在鹅胚以及番鸭胚细胞中增殖并导致细胞的病变。将疑似病鹅的肝与肠混合并充分研磨后溶解制成混合悬液，反复冻融，然后向混合悬液中加入青霉素，采用离心机进行高速离心，将离心后的上清液接种到鹅胚以及番鸭胚的原代细胞培养物中进行培养，一段时间后可以明显看到细胞出现病变。通过对细胞病变进行检测即可判断疑似病鹅是否患有小鹅瘟[1]。

1.2 电镜检测

对病鹅的肠内容物或者粪便进行负染色后采用透射电镜进行观察，发病初期病鹅的病料中可以观察到一定数量的病毒粒子，而发病后期的病鹅，其病料内的抗体与病毒粒子相结合形成了一种免疫复合物，这种免疫复合物会将病毒粒子聚集在一起，更容易通过电镜检测出来。

1.3 PCR技术

PCR技术是目前最常用的小鹅瘟病毒检测方法。通过PCR技术，可以在几小时内得到准确的检测结果，即使极其微量的小鹅瘟病毒也能够检测出来。但是运用PCR技术进行诊断时需要将鹅胚多次传代后进行细胞培养以及病毒的分离，这一过程有可能导致样品被感染而得到错误的检测结果。

1.4 胶体金免疫层析技术

胶体金免疫层析技术是一种将层析分析以及免疫胶体金技术结合形成的，通过肉眼观察显色结果的免疫学的快速检测技术。目前，利用单克隆抗体制备的小鹅瘟病毒的胶体金检测试纸条以及通过小鹅瘟的VP3蛋白建立的小鹅瘟抗体的胶体金检测方法已经成功上市。

1.5 免疫荧光抗体技术

免疫荧光抗体技术是指将抗体或者抗原用荧光素进行标记后，当其遇到相对应的抗原或者抗体会相互结合形成一种带有荧光素的复合物，通过显微镜对这种复合物进行观察达到检测的效果。如Holmes[2]等将抗番鸭的小鹅瘟病毒单抗腹水标记FITC制成了抗小鹅瘟病毒的荧光抗体，研制出了检测小鹅瘟病毒抗原的免疫荧光方法。

2 生物制品

小鹅瘟的生物制品根据用途的不同可分为预防用生物制剂、治疗用生物制剂以及诊断用生物制剂，下面对这3类生物制品的研究进展进行具体的介绍。

2.1 预防用生物制剂

小鹅瘟的预防用生物制品主要是指疫苗。

2.1.1 灭活疫苗

灭活疫苗是指选择人工培养的免疫原性优良的病原微生物，采用一定的手段杀死这些病原微生物的同时仍然保留其免疫原性，然后加入蜂胶、铝胶以及白油等佐剂制成的一种疫苗。用蜂胶制成的小鹅瘟灭活疫苗在注射5 d后就可以检测到抗体；用白油制成的小鹅瘟病毒油乳剂灭活疫苗在1—6个月内其保护率可以达到100%[3]。

2.1.2 活疫苗

活疫苗是指利用免疫原性优良的弱毒株制成的含有活病原体的疫苗，主要包括鹅胚化雏鹅疫苗、鹅胚化种鹅疫苗以及鸭胚化小鹅瘟疫苗。如陈伯伦等用鸭胚弱化的小鹅瘟病毒制成的弱毒疫苗对种鹅进行免疫接种后，其保护率为100%。

2.1.3 基因工程疫苗

基因工程疫苗是将抗原表位富集区的编码基因改造后插入真核表达载体并导入动物体内刺激机体的免疫系统，使机体产生免疫应答而对机体进行保护的疫苗。如Lousberg[4]等利用小鹅瘟的VP3基因制成了小鹅瘟VP3基因疫苗，该疫苗诱导机体产生的淋巴细胞免疫功能在不同时间段都显著高于普通活疫苗。

2.2 治疗用生物制剂

2.2.1 高免血清

高免血清又称为抗血清，是一种含有高效价的特异性抗体的动物血清，这种血清可以对相应的疾病进行被动免疫、治疗以及预防。小鹅瘟的高免血清对其发病具有非常好的治疗效果。如李琳等采用小鹅瘟抗原高免马匹后制得了小鹅瘟马源高免血清，试验结果表明，其对小鹅瘟的治愈率高达92.87%。

2.2.2 卵黄抗体

卵黄抗体是指从免疫注射的产蛋鸡生产的蛋黄中提取出的可以用于相应疾病预防以及治疗的抗体[5]。如刘力威等利用海兰蛋鸡制备了鸡抗小鹅卵黄抗体并对其治疗效果进行了测定，结果表明卵黄抗体对小鹅瘟具有良好的治疗效果。张英等通过对鹅免疫接种小鹅瘟强毒尿囊液后收集其免疫鹅卵并提取出卵黄抗体，通过对患病雏鹅进行卵黄抗体的治疗，发现卵黄抗体具有明显的治疗效果。

2.3 诊断用生物制剂

2.3.1 诊断抗原

诊断抗原是用已知病原微生物、寄生虫的组分、浸出物以及代谢产物制成的用于检测血液中相应抗体的抗原。利用这些抗原与相应抗体能够发生反应这一特性可以达到对疾病诊断的目的。郑大恒等制备了小鹅瘟病毒的沉淀抗原，这种沉淀抗原仅与小鹅瘟阳性血清能发生特异性反应。

2.3.2 诊断抗体

诊断抗体主要是指针对疾病标志物分子的抗体。诊断抗体被广泛应用于体外诊断试剂盒，如酶联免疫法、胶体金免疫层析技术等。

3 结束语

小鹅瘟作为一种具有高传染性与致死率的疾病，对其诊断以及防治尤为重要。目前，国内外科研工作者在小鹅瘟的实验室诊断方面取得了极大的研究进展，获得了电镜检测、PCR技术以及胶体金免疫层析技术等可以快速诊断小鹅瘟的检测方法。此外，小鹅瘟疫苗、高免血清以及卵黄抗体等生物制品的应用可以有效的预防和控制小鹅瘟这一疾病的发生和流行，为我国小鹅瘟的综合防控奠定了坚实的基础。