羔羊大肠杆菌病的诊断与防治

牛绪东,冯学俊,任 禾,张元瑞,李 根,刘建柱,,

1.山东农业大学动物科技学院,山东 泰安 271018;2.中国动物疫病预防控制中心,北京 大兴 100125;3.山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室,山东 泰安 271018;4.山东省畜禽疫病防制工程技术研究中心,山东 泰安 271018

羔羊大肠杆菌病是由肠杆菌科、埃希菌属、大肠埃希菌(俗称大肠杆菌)的某些致病性血清型引起羔羊的一种以剧烈腹泻和败血症为特征的急性传染病。本病主要发生于1～8周龄乃至13周龄的羔羊,有些地方也可发生于3～8月龄的绵羊和山羊,1周岁以上很少发生。笔者于2017年5月25日,在山东农业大学动物保健医院接诊了来自山东省莱芜市吕某某带来的3月龄左右的2只病羊(绵羊和山羊)及1只病死绵羊,经问诊病情并结合病理剖检变化和实验室检验,确诊为羔羊大肠杆菌病。该病例的诊断过程介绍如下。

1 发病情况

该养羊户共饲养6月龄以内的羔羊150只,其中绵羊120只、山羊30只,绵羊和山羊均有发病死亡,不分品种。绵羊发病36只,死亡9只;山羊发病7只,死亡2只。据统计,绵羊羔发病率30.00%,死亡率 7.50%,病死率 25.00%;山羊羔发病率23.33%,死亡率6.67%,病死率28.57%。该羊场总发病率27.33%,死亡率7.33%,病死率26.83%。本次病情主要发生于2～5月龄的羔羊。

2 临床症状

表现为先咳嗽,后出现呼吸困难、严重气喘,体温多在41.5℃左右。随后采食量减少至绝食,有的病羊出现结膜炎,多数呈现拉稀、脱水,站立不稳、行走摇摆、起立困难,随后卧地不起、头颈歪向一侧。个别病羊羔出现抽风的脑神经症状。经过3～5 d的病程,最后因脱水、衰竭及自体中毒而死亡。

3 病理剖检

尸体脱水、消瘦;瘤胃无明显变化,网胃和辦胃轻度水肿,真胃严重水肿(见图1),可见真胃浆膜与肌层之间出现一层明显的胶胨状水肿物(见图2);十二指肠靠近真胃处也有轻度水肿;气管黏膜出血,气管与支气管交界处有少量泡沫状液体,肺脏淤血、出血、水肿(见图3);心包内有少量积液,心冠处明显水肿,心外膜充血(见图4);肝脏肿大、出血(见图5),胆囊壁增厚(见图6);脾脏轻度肿大和出血,其被膜增厚(见图7);肾脏轻度肿大和出血(见图8);肠系膜淋巴结肿大,切面多汁。

图1 瘤胃无明显变化,网胃和辦胃轻度水肿,真胃严重水肿

图2 真胃浆膜与肌层之间有一层胶胨状水肿

图3 气管黏膜出血,气管下部有少量泡沫状液体,肺脏淤血、出血、水肿

图5 肝脏肿大、出血

图6 胆囊壁增厚且轻度扩张

4 实验室诊断

无菌取肝脏组织,于鲜血琼脂上进行划线接种,放在37℃条件下培养24 h,发现在培养基上长出灰白色、半透明的圆形凸起,表面光滑、湿润且不能够溶血的菌落(见图9)。挑取单个菌落涂片,首先用瑞氏、姬姆萨染色,镜检发现有蓝色且两端略深染的菌体(见图10);随之又挑取单个菌落涂片用革兰染色,镜检发现有两端钝圆、散在或成对的红色菌体(见图11)。最后,无菌挑取7株单菌落,经细菌16S rDNA通用引物PCR扩增,产物胶回收测序,测序结果经NCBI进行BLAST,BLAST结果显示7株分离菌中有5株为大肠杆菌,1株为巨球菌,另1株为地衣型芽孢杆菌。而巨球菌为非致病菌,地衣型芽孢杆菌为益生菌。

5 诊断结果

根据发病情况、流行病学、临床症状及病理剖检变化,初步诊断为羔羊大肠杆菌病或巴氏杆菌感染。作者又进行了实验室检验,PCR检测,本次病例最后确诊为羔羊大肠杆菌病。

6 治疗

药物防治：作者参考蒋培红等(2016)[1]所做的药敏试验,对6月龄以内相对健康的羔羊,预防性肌肉注射丁胺卡那霉素,每日2次,连续3 d;对发病的羔羊除了注射丁胺卡那霉素以外,同时肌肉注射乳酸环丙沙星;对卧地不起或有脑神经症状的病重羔羊,进行强心补液(5%葡萄糖氯化钠注射液、复方氯化钠注射液和樟脑磺酸钠注射液)、解除自体中毒(25%葡萄糖注射液、维生素C注射液和地塞米松磷酸钠注射液)。

疫苗免疫：应用羊大肠杆菌灭活疫苗。为了防止本病的复发,对6月龄以内的羔羊普遍免疫注射1次;为了防止新生羔羊发病,对产前30～50 d的怀孕母羊及时进行免疫接种。

图7 脾脏被膜增厚且轻度肿大、出血

图8 肾脏轻度肿大、出血

图9 病料划线于鲜血琼脂培养基培养

图10 单个菌落涂片瑞氏染色

回访结果：作者1月后回访,畜主按照上述处理方案操作,病羊3 d后好转,7 d后基本痊愈,没有再出现病死羊,也没有再出现新的病例。

图11 单个菌落涂片革兰染色

7 小结

羔羊大肠杆菌病的临床诊断要点：精神沉郁、咳嗽、气喘、拉稀;剖检特点：真胃壁水肿(应是本病的特征性变化),肺脏淤血、出血、水肿及肠系膜淋巴结肿大、切面多汁;实验室诊断方法有细菌分离培养,大肠杆菌染色镜检,有条件时可进一步进行PCR检测等进行确诊。

确诊本病后,作者根据文献资料立即给畜主制定出防治方案,选用丁胺卡那霉素和环丙沙星联合给药,病重者结合强心补液解毒的方法,确实取得了满意的疗效。有条件的应该自己做药敏试验,方为最妥。

对于防制羔羊大肠杆菌病应以免疫接种为主,主要选用生物制品厂生产的羊大肠杆菌灭活疫苗,最好使用从本场自然死亡的患病羔羊体内分离到的大肠杆菌制备的灭活疫苗(自家苗)。怀孕母羊产前30～50 d进行免疫接种,使新生羔羊出生后就能获得有效保护[2];3月龄以上的羔羊群应进行免疫接种,保护期可持续5个月[3]。