阴性种猪免疫猪繁殖与呼吸综合征活疫苗抗体变化

许光勇,王朝军,杨汉春

(1.中国农业大学动物医学院,北京 海淀 100193;2.北京养猪育种中心,北京 海淀 100194)

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),俗称“猪蓝耳病”,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种临床上以妊娠中后期母猪流产、早产,窝均产木乃伊胎、死胎和弱仔数增多,生长猪伴随呼吸道疾病等为主要特征的病毒性传染病[1]。自1987年PRRS首次在美国发生开始,相继于1990年在以德国为代表的欧洲国家暴发或出现,1995年在中国出现,随后以日本、韩国等为代表的亚洲国家也陆续报道,直至2006年PRRS在中国呈现大面积暴发与流行,使中国养猪业损失惨重,近10年来PRRS持续并长期影响中国养猪业发展[2-5]。由于国内养殖环境相对复杂,PRRS防控一般都是采取综合措施,疫苗干预就是其中一项重要举措,故探索PRRS活疫苗接种阴性种猪群后抗体变化规律具临床应用价值。

1 材料与方法

1.1 试验猪 2016年3月北京养猪育种中心新引进800头祖代后备种猪,经疾病筛查表明PRRS抗体阴性。按猪舍内均匀分布采样原则,挑选110～230日龄后备公、母猪各75头进行连续追踪前腔静脉采集血液。鉴于肢蹄问题、自然死亡、育种规划等原因淘汰,截止2017年12月3日,剩余公猪36头,母猪57头。

1.2 方法 2016年4月11日对全部后备种猪肌肉注射PRRS活疫苗(ATCC VR-2 332株)1头份,2017年1月20日母猪二免PRRS活疫苗1头份。

公猪于首免后3、6、10、20、27、33、39、43、59、70 周和85周前腔静脉采血,母猪于首免后3周、6周、10周、20 周、27 周、33 周、39 周以及二免后 3、16、30、46周前腔静脉采血,分离血清并于-20℃冰箱保存。

1.3 PRRS抗体检测 PRRS X3抗体检测试剂盒,美国IDEXX公司,批号J661。参照试剂盒说明书进行操作,试验成立条件：阳性对照平均值减去阴性对照平均值必须大于或等于0.15,同时阴性对照平均值必须小于或等于0.15。结果判定：如果S/P值低于0.40,样品判定为PRRSV抗体阴性;如果S/P值大于或等于0.40,样品判定为PRRSV抗体阳性。S/P值=(样本A650- 阴性对照平均值)/(阳性对照平均值 - 阴性对照平均值),CV值又称离散度=(标准偏差/样本平均值)×100%。

2 结果与分析

2016年4月至2017年12月试验期间,试验猪共采血11次,分离血清进行PRRS抗体检测,结果见表1～4。

表1 公猪PRRS抗体统计结果

由表1可知,公猪接种PRRS减毒活疫苗,S/P平均值3周为1.51,20周为0.56,27周为0.27;PRRS抗体阳性率3周为100%,20周为61.11%,27周为22.22%;S/P平均值和抗体阳性率均随时间逐渐降低。因此,公猪免疫20周能提供有效地抗体保护。CV值3周为40%、再逐渐升高并于39周达到峰值123%,之后维持在90% ～112%。

表2 母猪PRRS抗体统计结果

由表2可知,母猪首次接种PRRS减毒活疫苗,S/P平均值3周为1.61,39周为0.39;PRRS抗体阳性率3周为100%,20周为73.68%,27周为47.37;S/P平均值和抗体阳性率也随时间逐渐降低。综合S/P平均值和抗体阳性率,认为母猪首免提供有效地保护时间为20～27周。CV值3周为34%,再逐渐升高并于27周到峰值96%。间隔40周二免PRRS减毒活疫苗,S/P平均值和抗体阳性率再次升高,即二免3周升高至0.73和64.91%,随后逐渐下降,16周降为0.31和26.32%;二免3周CV值保持在75%,之后维持在62% ～66%。所以,二免能够提高母猪S/P平均值和抗体阳性率。

表3 公猪PRRS抗体S/P值区间分布

由表3可知,公猪接种PRRS减毒活疫苗,S/P值高于2.5仅出现于3周,比例为8.33%。20周以内S/P值在0.4～2.0比例超过60%。S/P值小于0.4所占比例随时间逐渐升高,85周达100%。

表4 母猪PRRS抗体S/P值区间分布

由表4可知,母猪接种PRRS减毒活疫苗,首免3周、6周以及二免3周都出现了S/P值高于2.5。首免20周、27周以及二免3周S/P值在0.4～2.0比例分别为71.93%、45.61%和61.4%。S/P值小于0.4所占比例随时间逐渐升高,二免3周有一次降低。

3 讨论

S/P值一般用来评判阴性猪接种PRRS疫苗的免疫效果,阳性猪感染PRRSV程度。本试验后备种猪(包括公猪和母猪)接种PRRS减毒活疫苗前PRRS抗体均是阴性,S/P平均值首免3周公猪和母猪分别升至1.51和1.61,与胡成玉报道的免疫VR2332株PRRS活疫苗后21天S/P平均值为1.59基本一致[6]。S/P平均值首免6周公猪和母猪已分别降至1.10和1.16,之后随时间逐渐降低。由此可知,S/P平均值公猪和母猪均是首免3周最高,6周已下降,故初步判断公猪和母猪的S/P平均值应该在6周之前就已经达到峰值。公猪20周和27周S/P平均值分别为0.56和0.27,母猪39周S/P平均值为0.39,说明公猪和母猪S/P平均值降至0.4的临界值时间分别处于接种PRRS活疫苗第20～27周之间和39周。母猪间隔40周再次接种PRRS减毒活疫苗,二免3周S/P平均值升高至0.73,16周降至0.31,之后随时间逐渐降低,故初步判断母猪S/P平均值在二免16周之前就降到了临界值0.4。首次接种PRRS活疫苗后,公猪和母猪S/P平均值在6周之后均呈现下降趋势,但公猪S/P平均值始终较母猪要低,这可能是母猪比公猪对PRRS活疫苗产生的免疫应答更好。母猪二免后比公猪的S/P平均值明显要高,说明二免PRRS活疫苗能够有效提高猪群S/P值,本结果与施开创等报道的接种PRRS活疫苗能够提高抗体水平结果一致[4]。

抗体阳性率是指S/P值大于或等于0.4所占的比例,能反应疫苗免疫效果,猪只感染PRRSV情况。首免10周抗体阳性率始终保持在90%以上,与曾显成等报道的免疫猪场公猪阳性率最高为94.3%相符[7],与李明波等人报道的35日龄仔猪免疫后4周抗体阳性率为85%也有所差别[8],这些可能与采样时间和选择的试验猪种类不同所导致。随着时间抗体阳性率逐渐降低,公猪和母猪抗体阳性率分别于20周和27周降到61.11%和47.37%。母猪二免抗体阳性率会有一个上升阶段,之后再次下降。由表1和表2可知,母猪抗体阳性率较公猪始终要高。

CV值又称离散度,主要是指取值之间的差异程度,用来衡量风险大小。首免3周公猪和母猪CV值分别为40%和34%,均属最低水平,之后随着时间推移离散度越来越高,公猪于39周达到峰值123%,母猪于27周达到峰值96%。母猪二免后CV值处于62% ～75%,而同期公猪CV值维持在90%～112%高水平区间。若CV值以60%为临界值,公猪和母猪均于首免20周达到临界值,母猪二免后除3周外其他时间均处于60%附近。由此初步判断,公猪和母猪在首免20周以内抗体整齐度较好;母猪二免后CV值较公猪低,说明二免能够降低抗体离散度,使猪群抗体水平更加整齐。这与曾显成等报道的接种过PRRS疫苗的猪场抗体离散度明显低于非免疫猪场的结果一致[7],与李明波等人报道的CV值在48% ～56%有所差异[8],可能与猪场PRRSV感染背景有关,本试验猪场生物安全较高,不存在野毒感染情况。

猪只个体S/P值区间分布能更加精确辅助判定猪群感染PRRSV程度和猪群健康管理,其中S/P值小于0.4表明PRRS抗体阴性,0.4～2.0是阳性猪场比较理想的状态,2.0～2.5为选择性区间,高于2.5一般判定为感染PRRSV野毒或免疫了高致病性毒株疫苗。按照猪群健康程度,0.4～2.0还可细分为0.4～1.0、1.0～1.5和1.5～2.0区间,根据企业需求可以选择不同标准进行操作与分析。后备种猪接种PRRS减毒活疫苗后,公猪和母猪均于3周出现S/P值高于2.5的个体,但所占比例不高,并迅速下降。由表3和表4可知,首次接种PRRS活疫苗,公猪和母猪S/P值处于0.4～2.0比例都是先增后减的趋势,均于10周达到最大。公猪S/P值小于0.4所占比例在20周和27周分别达到38.89%和77.78%,说明首免后第20～27周时间有大量的公猪抗体变为阴性,并于85周完全转阴。母猪S/P值小于0.4所占比例在20周和27周也分别达到26.32%和52.63%,其变化规律与公猪基本相同;二免3周,母猪S/P值小于0.4所占比例再次降低至35.09%,随后逐渐升高,说明二免能够提高抗体阳性率。对比公猪和母猪免疫效果,母猪抗体阳性率较公猪始终要高,这与前面所提到的母猪比公猪对PRRS活疫苗的免疫应答更好是相吻合的。

本试验结果表明,阴性种猪(公猪和母猪)接种PRRS活疫苗,20周抗体阳性率维持在60%以上,S/P平均值处于0.4以上,CV值位于60%范围,S/P值处于0.4～2.0区间比例在60%以上,故认为阴性种猪接种PRRS活疫苗20周内免疫效果良好。