香菇中粗多糖含量的测定的方法比较

◎ 宋三妹

（中检溯源华南技术服务（深圳）有限公司，广东 深圳 518001）

香菇具有化痰理气、治风破血的功效，经常食用能够有效预防人体各种皮肤炎症、毛细血管破裂以及佝偻病等。香菇主要含有抗坏血酸、核黄素等，最主要的活性成分为香菇多糖，近些年，相关人员研究发现多糖能够有效加强细胞免疫力，抑制癌细胞生产，对抗肝炎以及病毒皆具有积极作用。为此，加大对香菇中粗多糖含量的测定力度势在必行。当下测定香菇中粗多糖含量的常见方法有苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法，具体操作如下。

1 材料

1.1 原料和试剂

香菇来自药材公司，通过中药教研室鉴定为伞菌科香蕈。葡萄糖、水是重蒸水；其他试剂皆是分析纯。

1.2 设备

可见紫外分光光度仪、电子天平、多功能粉碎机、数控超声仪、数控超声波清洗器、离心机。

2 方法和结果

2.1 苯酚+硫酸法

2.1.1 曲线制备

（1）配制葡萄糖对照溶液。称取10 mg无水葡萄糖加入100 mL容量瓶中，添加适量的水溶解后定容，将其摇匀，即制得葡萄糖浓度的浓度为0.1 mg/mL。

（2）绘制标准曲线。量取对照溶液0.0、0.1、0.3、0.6、1.1 mL和1.7 mL分别加入试管之中，加水补充到2.0 mL，分别添加5%苯酚溶液1 mL，混合完全，迅速添加5 mL浓硫酸混合均匀，在恒温水中恒温反应15 min，再将其放置到冷水中进行冷却，阻断其继续反应；基于第一份为标准，依照分光光度法，在485 nm处测定吸光度，以葡萄糖的浓度为纵坐标，以吸光度为横坐标绘制回归曲线，结果得出回归方程为Y=6.371X+0.012，R2=0.998。

2.1.2 供试品溶液的配制与样品测定

取0.3 g的香菇粉，添加5 mL的水湿润样品，再添加20 mL 95%乙醇，混合均匀，超声提取30 min，过滤，利用少量的乙醇洗涤滤器，将滤纸与滤渣皆放到烧瓶之中，加入50 mL的水，加热回流2 h，趁热滤过，利用少量热水清洗滤器，合并洗液和滤液，放到冷却，移到100 mL的量瓶中，利用水稀释到刻度处，混合均匀，进而得到供试品溶液。量取2.0 mL供试品溶液，利用置具塞依法对吸光度进行测定，依据标准曲线计算多糖含量，得出每100 g香菇干品可获得5～8 g的粗多糖，经过纯化处理后，可提取1 g左右的纯多糖[1]。

2.1.3 优化提取方式

当前香菇多糖测定方法主要为提取方法的选取，基于此对提取方法比较与研究。

（1）醇提后水提法。准备香菇粗粉0.5 g，加入5 mL的水浸湿试样，再缓缓添加20 mL 95%乙醇，混合均匀，超声提取30 min，过滤，利用少量的乙醇洗涤滤器，将滤纸与滤渣皆放到烧瓶之中，加入50 mL的水，加热回流2 h，趁热滤过，利用少量热水清洗滤器，合并洗液和滤液，放到冷却，移到100 mL的量瓶之中，利用水稀释到刻度处，混合均匀，进而得到供试品溶液[2]。

（2）水提醇沉法。准备香菇粗粉0.1 g，加入50 mL的水，加热回流2 h，趁热滤过，利用少量热水清洗滤器，合并洗液和滤液，放到冷却，移到100 mL的量瓶之中，利用水稀释到刻度处，混合均匀，准确量取2 mL上述品液，加入10 mL的乙醇溶液，进行搅拌，离心10 min，提取沉淀物加水进行溶解，放到100 mL的量瓶之中，并稀释到刻度，进而得到供试品溶液。

准确2 mL的试品溶液，添加5%苯酚溶液1 mL，混合均匀，再迅速添加5 mL的浓硫酸，混合均匀，在恒温水中恒温反应15 min，再将其放置到冷水中进行冷却，阻断其继续反应；以空白调零，在485 nm波长处进行测定，展开3次平行试验，对多糖含量进行计算[3]。

2.1.4 重复性试验

依据供试品制备方式同时配制6份溶液，依法显色之后对其吸光度A进行测定，计算香菇内的多糖含量。结果重复性值为1.01%。结果显示，此法重复性较佳。

2.1.5 精密度试验

准备供试品溶液，依法显色之后对其吸光度A6进行连续测定。结果精密度值是0.65%。结果显示，该法精密度极佳。

2.1.6 香菇多糖含量测定

依据优选的供试品溶液制备方式，准备香菇依法进行测定。展开3次平行试验，对香菇的多糖含量进行计算，得出每100 g香菇干品可获得5～8 g的粗多糖，经过纯化处理后，可提取1 g左右的纯多糖[4]。

2.2 蒽酮-硫酸法

2.2.1 制备标准曲线

（1）配制葡萄糖对照溶液。取无水葡萄糖20 mg加入100 mL的容量瓶中，添加适量的水进行溶解，将水加到刻度处，将其摇匀，即葡萄糖的浓度为0.2 mg/mL。

（2）绘制标准曲线。量取对照溶液0.0、0.3、0.7、1.5 mL和2.0 mL，加水补充到2.0 mL，分别置于试管之中，分别添加5%蒽酮-浓硫酸溶液4 mL，混合完全，在沸水中恒温反应15 min，再将其放置到冷水中冷却，阻断其继续反应；基于第一份为标准，依照分光光度法，在615 nm处测定吸光度，以葡萄糖的浓度为纵坐标，以吸光度为横坐标绘制回归曲线，结果得出回归方程式 Y=3.105X+0.041，R2=0.997。

2.2.2 供试品溶液的配制

取0.3 g的香菇粉，确保称的精准度，添加5 mL的水湿润样品，同时添加20 mL 95%乙醇，混合均匀，超声提取30 min，过滤，利用少量的乙醇对滤器进行洗涤，将滤纸与滤渣皆放到烧瓶之中，加入50 mL的水，加热回流2 h，趁热滤过，利用少量热水清洗滤器，合并洗液和滤液，放到冷却，移到100 mL的量瓶之中，利用水稀释到刻度处，混合均匀，进而得到供试品溶液。量取2.0 mL供试品溶液，利用置具塞依法对吸光度进行测定，自分别添加0.5%蒽酮-浓硫酸溶液4 mL起，依法测定吸光度，依据标准曲线计算出供试品溶液内的多糖含量，得出每100 g香菇干品可获得5～8 g的粗多糖，经过纯化处理后，可提取1 g左右的纯多糖[5]。

2.2.4 重复性试验

依据供试品制备方式同时配制6份溶液，依法显色之后对其吸光度A进行测定，计算香菇内的多糖含量。结果重复性值是2.21%，此法重复性较佳。

2.2.5 精密度试验

准备供试品溶液，依法显色之后对其吸光度进行连续测定。结果精密度值是1.26%。结果显示，该法精密度极佳。

2.2.6 香菇多糖含量测定

依据优选的供试品溶液制备方式，准备香菇依法进行测定。展开3次平行试验，对香菇的多糖含量进行计算，得出每100 g香菇干品可获得5～8 g的粗多糖，经过纯化处理后，可提取1 g左右的纯多糖。

3 结语

不管是苯酚硫酸法，还是蒽酮硫酸法，对香菇多糖含量测定皆有显著效果，为此，相关人员需给予苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法高度重视，促使其存在的价值与效用在香菇多糖含量测定中充分的发挥出，为提高香菇多糖含量测定水平提供有利条件。