浅谈动物寄生虫病粪便虫卵检查技术
2018-02-14潘德彦
潘德彦
(辽宁省大连市普兰店区城子坦动物卫生监督所,辽宁 大连 116200)
粪便虫卵检查是寄生虫病、特别是蠕虫病生前诊断的重要方法,其原理是:大多数寄生性蠕虫寄生在消化道内,它们的卵、节片、幼虫或成虫随宿主粪便排至外界;某些寄生于呼吸道的蠕虫,它们的虫卵和幼虫随痰液到口腔又被动物咽下也随粪便排出;一些寄生于血液的蠕虫,它们的虫卵也可随血流到达肠壁,并进入肠腔而随粪排出.
1 应用范围
1.1 动物寄生虫病的生前诊断
适用于所有动物寄生虫病的诊断,尤其是不能剖检的珍贵和珍稀动物。
1.2 动物寄生虫流行区系调查
此项调查可确定感染率、感染强度,感染种类和优势虫种,为科学研究、监测预警、区域性寄生虫病防控服务。
1.3 驱虫效果评价
根据驱虫前后虫卵转阴率,判断驱虫效果。
2 仪器设备材料
2.1 器 材 铁架台、漏斗、粪筛、纱布、粪勺 、烧杯、玻璃棒、镊子、载玻片、盖玻片、粗天平、锥形瓶、吸管、铁丝圈等。
2.2 各种动物粪便
2.3 饱和食盐水溶液、自来水
2.4 普通显微镜
3 粪便的采集及保存
3.1 粪便采集的原则和方法
原则:新鲜未被污染。
方法:直肠采粪或排出的新鲜粪便,采集粪堆上面未被污染的部分。采集的粪便要装入洁净的容器中。
3.2 粪便的保存
采集的新鲜粪便应当天检查,不能当天检查的粪便要密封后放在4℃的冰箱中保存。如需转送别处检查,则可将粪样浸入5%~10%的福尔马林中,将虫卵固定,使其失去活力。
4 常用的粪便虫卵检查方法
4.1 粪便外观检查法
所有的吸虫、线虫的虫卵全部随着粪便排出体外,通过粪便外观检查,可以检出虫卵及成虫。
4.2 直接涂片法
适用于产卵量多的虫体的粪便检查,如球虫、消化道线虫卵等;本方法简便、快速,但检出率低。取1~2滴生理盐水放入载玻片上取少量被检粪便与之混合均匀,剔出粪渣加盖玻片镜检。
4.3 漂浮法
本方法适用于对大多数线虫卵、绦虫卵尤其是球虫卵囊,本法的应用原理是饱和盐水的比重(1.3~1.9)大于虫卵的比重(1.0~1.2)。
虫卵被漂浮在溶液的上层。操作方法:
(1)取粪:取5~10g粪便放入100mL烧杯中;
(2)化粪:加10~20倍的饱和盐水,用玻璃棒搅开;
(3)过滤:用3~4层纱布或铜筛网过滤;
(4)静置:40min左右;
(5)镜检:用直径0.5~1cm的金属环平着接触液面,提起后将液面抖落在载玻片上加盖玻片用显微镜检查。
4.4 自然沉淀法
本方法适用于各种蠕虫卵及幼虫检查,特别适用于比重较大的吸虫卵、棘头虫卵及比重较大的原虫卵囊。原理:虫卵的比重(1.2~1.5)大于水的比重(1.0),虫卵或包囊体沉于溶液的底部。
(1)取粪:取5~10克粪便放入100mL烧杯中。
(2)化粪:加10~20倍的自来水,用玻璃棒搅开。
(3)过滤:用 3~4层纱布过滤。
(4)静置洗涤:静置20min后,倒掉上清液,留取沉淀物,再次加水静置沉淀,每20min一次直至上清液透明为止。
(5)镜检:用吸管吸取沉淀物,将沉淀物滴1-2滴于载玻片上,加盖玻片用显微镜检查。
5 虫卵的基本形态结构
形状:圆形、卵圆形、椭圆形、三角形等。
结构:外层:2~4层膜,内层:有多个卵黄细胞和一个胚细胞。
颜色:黄褐色、黄白色等。
6 粪便虫卵培养技术
有一部分虫卵形态相似,在虫卵阶段很难区别,为了鉴定这些虫卵,需要做粪便虫卵培养。
培养条件:25℃恒温箱,有充足的氧气。
操作方法:培养皿底部加放滤纸一张,将粪便100g左右加水调成硬糊状并堆成半球形放在滤纸上,使半球形粪便顶部略高于培养皿高度,而后加盖另外一个培养皿,放入25℃恒温箱中一周左右,多数虫卵可以发育为幼虫,并集中在上面培养皿盖的水滴中,用吸管吸出幼虫在显微镜下检查鉴定。