破壁式方法提取藤茶中二氢杨梅素的工艺研究

郑琳 龚自明

摘要：以湖北省恩施州富硒土壤上生长的藤茶（Ampelopsis grossedentata）为原料，开展破壁式提取二氢杨梅素的工艺研究。结果显示，破壁式辅助提取条件下，常温25 ℃，料液比1∶50（g∶mL），用100%纯乙醇溶液提取5 min，提取液中二氢杨梅素含量为15.172%。

关键词：藤茶（Ampelopsis grossedentata）;二氢杨梅素;破壁式提取;工艺研究

中图分类号：TS201.1         文献标识码：A

文章编号：0439-8114（2018）22-0118-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.22.032           开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Abstract： Using Ampelopsis grossedentata which is growing on the soil rich in selenium as material in Enshi of Hubei province，wall-breaking assisted extraction test of dihydromyricetin（DMY） was carried out. The results showed that under the condition of wall-breaking assisted extraction，5 min was extracted and the ratio of tea material to 100% pure ethanol solution was 1∶50（g∶mL） at room temperature（25 ℃），the content of DMY in tea soup was 15.172%.

Key words： Ampelopsis grossedentata; dihydromyricetin（DMY）; wall-breaking assisted extraction; process research

藤茶（Ampelopsis grossedentata）系葡萄科蛇葡萄植物顯齿蛇葡萄的茎叶，学名为显齿蛇葡萄，是一种多年生的藤本植物。藤茶有效成分主要是黄酮，是目前植物中发现黄酮含量较高的植物。藤茶黄酮主要成分为二氢杨梅素，具有抗氧化、抑菌消炎、止咳化痰、降“三高”、抗癌等功能[1-7]。研究发现，一定质量浓度的硒能促进藤茶中黄酮类物质的合成[8]，本研究以“世界硒都”-湖北省恩施州，富硒土壤上生长的藤茶为原料，用破壁式提取的方法提取其中二氢杨梅素成分，为工业化生产提供理论基础，为提高藤茶的利用率提供技术支撑。

1  材料与方法

1.1  材料

1.1.1  藤茶原料  原料来自湖北省恩施州来凤县金藤子专业合作社。

1.1.2  试验试剂  乙醇为分析纯（国药集团化学试剂有限公司），冰乙酸、乙腈为色谱纯（美国Fisher Chemical），二氢杨梅素标准品（上海源叶生物科技有限公司，纯度98%）。

1.2  方法

选用JHBE-50S型闪式提取器，其特点为基于组织破碎原理，将物料快速破碎至适当粒度，同时伴有高速搅拌、超强振动、负压渗滤等作用实现提取的目的，最大限度保留植物有效成分不会受热破坏，溶剂用量小，提取时间短，效率高。

单因素试验：破壁式提取时间选取1、2、3、4、5、6 min，乙醇体积分数选取0、20%、40%、60%、80%、100%，料液比选取1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70（g∶mL，下同），以此研究各因素的影响作用。

正交试验：通过单因素试验，分析各因素对二氢杨梅素提取量的影响，确定较佳的单因素试验条件范围，在此基础上，以提取时间、乙醇体积分数、料液比为主要影响因素，各选出3个水平，进行L9（34）正交试验分析（表1）。

1.3  高效液相色谱分析检测方法

色谱柱为Agilent TC-C18不锈钢柱（250 mm×4.6 mm）。流动相为甲醇-水（3∶7）（用冰乙酸调pH至3.5）。流速0.7 mL/min;检测波长292 nm;柱温35 ℃;进样量10 μL。

标准曲线：准确称取20 mg二氢杨梅素标准样品，溶解于上述流动相，精确定容至25.0 mL，得到0.8 mg/mL母液。然后取适量上述溶液，分别稀释至1、4、8、16、32倍，即得浓度梯度为0.800、0.200、0.100、0.050、0.025 mg/mL的标准溶液。将配制好的标准溶液用高效液相色谱法进行测定，以测定得到的色谱峰面积和已知标准溶液浓度进行回归分析，得回归分析曲线：y=（3e-8）x+0.012，R2=0.999，x表示峰面积，y表示样品浓度（mg/mL）。

2  结果与分析

2.1  单因素试验

图1表明，提取液中二氢杨梅素的含量随着提取时间的延长先升后降，提取时间为5 min时，提取含量达到最高，提取时间继续延长，二氢杨梅素因氧化等原因发生结构变化，含量反而下降。

图2表明，提取液中二氢杨梅素的含量随着乙醇体积分数的提高而增加，乙醇体积分数为80%与无水乙醇状态相差不大。

图3表明，在选取的料液比范围内随着提取用水量的增加，提取液中二氢杨梅素含量一直呈上升趋势，但当料液比达到1∶50后，再增加提取用水量，对二氢杨梅素的浸出影响不大，反而会因温度等原因加快二氢杨梅素的氧化，同时提高生产成本。

2.2  正交试验确定破壁式提取二氢杨梅素的最佳条件

根据单因素试验结果，提取时间选取3、4、5 min，乙醇体积分数选取60%、80%、100%，料液比选取  1∶40、1∶50、1∶60，正交分析结果见表2和表3。由表2可知，提取二氢杨梅素含量最高的处理组合为A3B3C2，分析各因素K的变化率得到的最优组合为A3B2C2，但由表3可知，A因素对结果的影响显著，B因素和C因素对结果的影响不显著。综合表2和表3结果，并经试验验证，得到最佳可行提取工艺组合为A3B3C2，即提取时间5 min，乙醇体积分数100%，料液比1∶50，此条件下提取液中二氢杨梅素含量为15.172%。

3  小结与讨论

破壁式提取条件下，最佳提取工艺组合为提取时间5 min，乙醇浓度100%，料液比1∶50，此條件下提取液中二氢杨梅素含量为15.172%。提取时间对提取液中二氢杨梅素含量的影响显著，乙醇体积分数和料液比的影响不显著。

破壁式提取方法批次处理量大，溶剂损耗较小，适用于工业化提取藤茶中二氢杨梅素成分。本研究以“世界硒都”-湖北省恩施州富硒土壤上生长的藤茶为原料，分析了破壁式提取方法对二氢杨梅素的提取效果，该方法绿色高效，对提高藤茶的利用率具有重要意义。

预计从两方面着手开展后续试验：一是放大验证该方法的提取效果，为工业化生产二氢杨梅素提供理论及技术支持;二是进一步筛选合适的树脂，纯化二氢杨梅素单体。

参考文献：

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[3] 罗文敏，孙  超，向  准，等.藤茶止咳化痰药效学研究[J].贵州科学，2014，32（6）：58-60.

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