延胡索醋炙前后饮片和煎剂中延胡索乙素含量变化对比

孟德阳

（漯河市第六人民医院药剂科，河南 漯河 462300）

延胡索是罂粟科植物延胡索的干燥块茎，主要功 效为活血、行气、止痛，在胸胁、脘腹疼痛、经闭痛经、跌扑肿痛等的治疗中得到了广泛应用[1]。现代药理学研究证实[2]，延胡索的主要有效成分为生物碱类成分，其中延胡索乙素的镇痛及解痉作用明显。传统用药经验认为[3]，延胡索醋炙后能够促进其药效的增强。通过酸性燃料比色法、酸碱滴定法等化学分析发现，延胡索醋炙后，和生品相比，水煎液中具有显著较高的总生物碱含量，发生这一现象的原因可能是其含有的脂溶性生物碱在醋炙过程中能够结合醋酸成盐，从而促进其在水中溶解度的提升。本研究运用高效液相色谱法测定延胡索醋炙前后饮片和煎剂中延胡索乙素的含量变化，从有效成分角度对延胡索醋炙的意义进行进一步探讨，现报道如下。

1 材料

所用仪器包括美国Waters公司生产的e2695 高效液相色谱仪，上海雷磁公司生产的PHS-3B酸度计，梅特列-托利多公司生产的AB204-S/A电子天平。所用药品及试剂包括亳州中药材市场提供的延胡索药材，其属于罂粟科植物延胡索的干燥块茎，鉴定主体为河南省漯河市药品检验所鉴定；中国药品生物制品鉴定研究院提供的延胡索乙素对照品，供含量测定用，批号为110726-200609；江苏恒顺醋业股份有限公司生产的食用香醋作为炮制用醋，生产批号为：20170312；水、甲醇、其余试剂分别为高纯水、色谱纯、分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 将规格为4.6 mm×250 mm，5 μm的Hypersil ODS柱作为色谱柱；将pH值为6.0的甲醇-0.1%磷酸溶液作为流动相，调节pH值过程中将三乙胺充分利用起来；将流速、检测波长、柱温、进样量分别设定为 1.0 mL/min、280 nm、室温、20 μL。

2.2 对照品溶液的制备 将4.1 mg延胡索乙素对照品精密称取出来，在10 mL容量瓶中放置，对其进行溶解，在此过程中将甲醇充分利用起来，然后将其向刻度定容，摇匀将延胡索乙素对照品溶液制备出来，浓度为0.4 mg/mL。

2.3 供试品溶液的制备

2.3.1 生品饮片溶液 将延胡索药材取出来，将杂质去除，洗净，干燥，切厚片，就将延胡索片获取了过来。将适量延胡索取出来，粉碎，过40目筛。将0.5 g左右的粉末取出来，精密称定，在圆底烧瓶中放置，将50 mL浓氨试液-甲醇（1:20）混合溶液精密加入，对重量进行称定，进行1 h的冷浸后再进行1 h的加热回流，放冷，对重量进行称定，补重过程中将浓氨试液-甲醇（1:20）混合液充分利用起来，摇匀，滤过，将25 mL续滤液精密吸取出来，减压将溶剂回收过来，将甲醇加入残渣对其进行溶解，向5 mL容量瓶中转移，向刻度定容，在此过程中将甲醇充分利用起来，摇匀，滤过，将续滤液取出来，就将供试品溶液获取过来。

2.3.2 醋灸品饮片溶液 将延胡索片取出来，将20%食醋加入拌匀，闷透，在锅内放置，用文火炒干，取出，放凉，就将醋延胡索片获取了过来。将适量醋延胡索片取出来，粉碎，过40目筛。将0.5 g左右的粉末取出来，精密称定，将醋灸饮片溶液制备出来。

2.3.3 生品煎剂溶液 将5 g左右的延胡索片取出来，精密称定，在500 mL烧杯中放置，用水进行2次煎煮，第一次将100 mL水加入其中，进行20 min的微沸；第二次将50 mL水加入其中，进行10 min的微沸。将两次煎液合并，将氨水加入其中，将pH值调整到10，然后进行2次萃取，在此过程中将三氯甲烷充分利用起来，每次20 mL，将萃取液合并，将10 mL蒸馏水加入其中洗涤，之后对水层进行洗涤，在此过程中将5 mL三氯甲烷充分利用起来，将三氯甲烷液合并，将5 g无水硫酸钠加入其中脱水后滤过，向50 mL容量瓶中转移滤液，向刻度定容，在此过程中将三氯甲烷充分利用起来，摇匀，将10 mL精密吸取出来，减压将溶剂回收过来，将甲醇加入残渣中对其进行溶解，向5 mL容量瓶中转移，向刻度定容，在此过程中将甲醇充分利用起来，摇匀，过滤过程中将0.45 μm滤膜充分利用起来，将续滤液取出来，就将生品煎剂溶液获取了过来。

2.3.4 醋灸品煎剂溶液 将5 g左右的延胡索片取出来，精密称定，将醋灸品煎剂溶液制备出来。

2.4 线性关系考察 经延胡索乙素对照品溶液精密吸取出来，稀释过程中将甲醇充分利用起来，分别将浓度为 0.013 1、0.032 8、0.041 0、0.065 6、0.102 5 mg/mL的溶液配制出来，测定过程中以上述色谱条件为基础，将横坐标设定为对照品浓度（X），将纵坐标设定为峰面积值（Y）进行回归，将标准曲线获取过来，即Y=10 482X+9.777 6（r = 0.999 9），结果表明，延胡索乙素和峰面积线性关系良好的前提为其在0.013 1～0.102 5 mg/mL之间。

2.5 精密度试验 将生品饮片溶液供试品溶液精密吸取出来，进行6次连续进样，对峰面积进行测定，RSD = 1.01%（n = 6），说明具有良好的精密度。

2.6 稳定性试验 将生品饮片溶液供试品溶液精密吸取出来，将进样时间点设定在0、2、4、6、8、10 h，对峰面积进行测定，RSD = 1.14%（n = 6），说明样品在10 h内具有良好的稳定性。

2.7 重复性试验 将6份同一批生品饮片样品取出来，分别将供试品溶液制备出来，进样测定，将含量计算出来，结果延胡索乙素的平均含量为0.054%，RSD =1.51%（n = 6），说明具有良好的重复性。

2.8 加样回收率试验 将6份同一批生品饮片样品取出来，每份0.25 g左右，精密称定，在圆底烧瓶中放置，然后分别将0.8、0.8、1.0、1.0、1.2、1.2 mL的0.128 1 mg/mL的对照品溶液准确加入其中，将供试品溶液制备出来，进样测定，结果平均回收率为101.32，RSD = 1.42%（n = 6）。

2.9 样品含量测定 分别将3个批次的各样品取出来，将供试品溶液制备出来，对延胡索乙素的含量进行测定，结果生品饮片、醋炙品饮片的平均含量分别为0.054 2%、0.052 2%，变化增减率为-3.70；生品煎剂、醋炙品煎剂的含量分别为0.010 9%、0.012 9%，变化增减率为+18.18。

3 讨论

本研究结果表明，延胡索乙素和峰面积线性关系良好的前提为其在0.013 1～0.102 5 mg/mL之间；RSD = 1.01%（n = 6），说明具有良好的精密度；RSD =1.14%（n = 6），说明样品在10h内具有良好的稳定性；延胡索乙素的平均含量为0.054%，RSD = 1.51%（n = 6），说明具有良好的重复性；平均回收率为101.32，RSD =1.42%（n = 6）；生品饮片、醋炙品饮片的平均含量分别为0.054 2%、0.052 2%，变化增减率为-3.70；生品煎剂、醋炙品煎剂的含量分别为0.010 9%、0.012 9%，变化增减率为+18.18，说明延胡索醋炙后饮片中具有稍低的延胡索乙素含量，发生这一现象的原因可能是其受到醋炙操作的影响，醋炙过程中受热可能会在一定程度上破坏延胡索乙素[4-6]，而煎剂中则具有显著较高的延胡索乙素含量，证实了醋炙能够促进水中延胡索乙素溶出的增加。因此，如果临床应用延胡索煎剂，则应该将醋炙品选取出来[7-10]。

通常情况下，一些相关医学学者会简单理解延胡索醋炙的增效原理为所含有效成分含量在醋炙后增加[11-13]。为了将这一错误观念有效纠正过来，本研究一方面对醋炙前后饮片中延胡索乙素的含量进行了测定，另一方面还专门依据中药汤剂的煎煮方法将生炙饮片的煎剂制备了出来，同时对其中所含延胡索乙素含量进行测定，来说明为水煎煮过程中有效成分的溶出提供良好的前提条件才是延胡索醋炙增效的原理。此外，和饮片相比，生品及醋炙品煎剂中均具有显著较低的延胡索乙素含量，说明传统水煎法对延胡索有效成分具有极低的提取率，从这里我们可以看出，在制备含有延胡索中成药的工艺中，临床可以考虑延胡索入药时以粉末的形式或应用乙醇提取，从而将药物充分利用起来[14-18]。但是目前，临床仍然没有统一这时醋炙的必要性，仍然需要相关医学学者进一步深入研究探索[19-20]。

总之，延胡索醋炙前后饮片中延胡索乙素的含量变化较小，但煎剂中延胡索乙素的含量变化较大，溶出会显著增加，值得临床充分重视。

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