奶牛乳房炎防治技术的研究进展

赖重波，李 崇，黄荣春，司红彬*

(1.广西大学 动物科学技术学院，广西 南宁 530005；2 广西玉林农业学校，广西 玉林 537000)

奶牛乳房炎又名奶牛乳腺炎，广泛存在于中国及世界各地，该病每年造成的经济损失严重，不仅危害奶牛健康，使奶牛泌乳量下降，乳制品的质量下降，降低养殖的利润，同时还使乳制品中的耐药菌、致病因子残留，危害人体健康[1]。引起奶牛乳房炎的原因是致病因子对机体的感染。奶牛自身的生理特点、营养、环境以及饲养管理不当等，均会使奶牛的抗病力下降，患乳房炎的几率加大[2]。

1 奶牛乳房炎的致病因素

奶牛乳房炎的致病因素较多，大致归纳如下：

1.1 致病微生物

引发奶牛乳房炎的病原微生物种类和数量繁多，主要有细菌、真菌、支原体、钩端螺旋体等。细菌中主要由革兰氏阳性菌、真菌和细菌导致的乳房炎较易产生耐药性[3]。罗金印等[4]对兰州奶牛乳房炎的病原菌调查结果为无乳链球菌30.0%，金黄色葡萄球菌21.4%。

1.2 管理因素

饲养管理不当，使得畜舍环境卫生条件不达标。通风、温度、湿度不适，易滋生多种致病微生物；挤奶不规范，对挤奶器操作不熟练直接或间接导致奶牛乳房损伤。营养因素是指管理饲料时饲料的突然改变或者成分不均衡，例如饲料中的氮水平或蛋白质含量过高则可促发乳房炎[5]。

1.3 疾病继发

奶牛乳房炎可继发于子宫内膜炎、胎衣不下、流产，甚至腹泻、口蹄疫等。中毒、高热、前胃弛缓等疾病可诱发乳房炎[3]。董全吉[6]在治疗过程中发现奶牛子宫内膜炎可继发奶牛乳房炎。

1.4 个体和遗传因素

奶牛乳房炎具有一定的遗传性，例如患有奶牛乳房炎的母牛，其雌性后代发病率较其他雌性母牛高。且与奶牛乳房形状有关，前后乳房附着较松散、乳房下垂、乳头位置朝外发育的母牛易患乳房炎。当然，也有个体差异[7]。

2 奶牛乳房炎的治疗

在奶牛乳房炎的治疗中，抗生素是主要治疗药物。随着抗生素耐药性的逐渐增强，现在中草药以及其它治疗方法和药物也渐渐发展起来。

2.1 抗生素治疗乳房炎

引起乳房炎的致病微生物较多，需通过药敏试验来确定相应致病微生物种类，这样才能正确用药配药，从而提高治愈率。

侯晓申[8]使用了复方阿莫西林乳房注射剂和速诺LC对临床型奶牛乳房炎进行分组治疗，试验结果表明两组的疗效均较好，但复方阿莫西林乳房注射剂对于奶牛乳房炎耐药病原菌效果更显著。高健[9]在对奶牛乳房炎常见致病菌的致病特点分析后，提出了关于抗生素治疗乳房炎的新理念，即在已经确定某种治疗的抗生素并且给药2-3d后，立即停止治疗，给予乳腺组织以自行恢复的时间，使它的炎症、临床症状逐渐消失，从而治愈。

虽然抗生素对奶牛乳房炎的治疗有一定作用，但引起奶牛乳房炎的致病菌对抗生素的耐药性也在逐渐增大。田晓英等[10]通过调查发现，天津地区检测出的奶牛乳房炎中的金黄色葡萄球菌对大环内酯类、林可酰胺类等8类29种抗生素均有较高的耐药性,其中对乙酰螺旋霉素、林可霉素和β-内酰胺类的耐药率达到了100%。武君元等[11]研究发现，新疆阿克苏地区奶牛乳房炎大肠杆菌对四环素和氟喹诺酮类表现出较高的耐药性。孙垚等[12]调查发现，广东省部分地区奶牛乳房炎分离出的葡萄球菌对临床常用的抗生素均有较高的耐药性。鉴于各地奶牛乳房炎致病菌均存在对抗生素耐药的情况，国内许多专家学者逐渐发现中草药对治疗奶牛乳房炎的良好前景。

2.2 中草药治疗乳房炎

中草药毒副作用几乎不存在，残留极少、不产生抗药性和耐药性、对乳制品品质和质量无影响，所含多种有效成分克服了抗生素的某些不足，因而具有其独特的优势。

研究表明，中药制剂对奶牛乳房炎有较理想的效果。谭武贵等[13]研究发现在“万乳康”基础上,添加了蒲公英、金银花等中药成分后所得新药“泰乳康”较“万乳康”的转阴率和治愈率均显著提高。张伟等[14]通过临床治疗实验发现复方(蒲公英、车前草、紫花地丁各30克，黄芪、当归、赤芍、红花各20克组成的方剂)治疗奶牛轻微乳房炎疗效显著。刘明江[15]通过基因转录深度测序分析、GO 分析、KEGG Pathway分析实验初步证明：脂多糖(LPS)是通过激活奶牛乳腺上皮细胞(bMEC)的NF-κB，MAPKs信号通路诱导奶牛乳房炎。而纯中药灌注剂“金浦”中的主要活性成分咖啡酸可抑制bMEC的NF-κB的活性和细胞MAPKs信号通路的转导，从而减弱了LPS对 bMEC的诱导炎性损伤。

近些年来，中草药提取物治疗乳房炎等其他疾病已经成为热点。吕平等[16]通过正交试验研究出的复配方(苦丁茶、蒲公英、丁香的提取物加上溶菌酶)对从临床型奶牛乳房炎病例的奶样分离出的致病菌具有良好的抑制效果。张宇[17]对兰州及其周边奶牛场中分离出的奶牛乳房炎耐药菌进行试验：通过培养筛选出耐药菌的质粒消除后，再经过碱裂解法抽离，最后使用琼脂凝胶糖电泳检测9种中药(五倍子、五味子、艾叶、大黄、黄连、黄芩、三颗针、乌梅、黄柏)提取液作用，观察耐药菌株质粒条带的改变；最后用9种中药亚抑菌浓度提取液作用于耐药菌中筛选出的超广谱β-内酰胺酶的菌。结果表明，9种中药提取液对耐药质粒有消除作用，对超广谱β-内酰胺酶的菌有抑制作用。证实这9种中药提取液可以降低该病致病菌的耐药性。

2.3 中西医结合

使用中西医结合方法治疗奶牛乳房炎，能够发挥两类药物优势，提高治疗效果，是目前应用前景最广阔的方法。陈万良[18]取20头隐性或慢性乳房炎病例，随机分2组，分别用抗生素和中西医结合进行治疗；结果显示中西医治疗组的抗生素残留远小于抗生素组。议旦吉[19]治疗实验结果：16例患乳房炎病牛经中西医结合治疗后有效率达到了93.75%。

2.4 其它治疗药物

除了以上提到的治疗方法和药物以外，还有一些天然、人工的化合物等可治疗乳房炎。研究表明，该类治疗药物的疗效均较好。

王琪等[20]通过大蒜素对引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度和对奶牛乳房炎的临床治疗试验，证明大蒜素对该菌具有良好的抑制效果且大蒜素对奶牛乳房炎有较好的治疗效果，大蒜素与中草药进行协同治疗时效果更好。冷秀芬[21]使用苦参碱类生物碱对奶牛乳房炎进行临床治疗，治疗的总有效率为93.33%。程浩等[22]用天然化合物肉桂醛对引起奶牛乳房炎的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和链球菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度进行检测，从其生长曲线可知肉桂醛对该三类致病菌均有较强的抑制和杀灭作用。

3 生物制剂预防乳房炎

3.1 细胞因子

细胞因子具有可调节机体多种免疫细胞的功能，能增强免疫细胞对病原微生物的抵抗力和杀伤力[23]。弓素梅等[24]使用酶联免疫吸附法对使用中药“乳炎消”的临床型奶牛乳房炎进行检测，试验结果表明，白细胞介素2、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α三种细胞因子有明显影响。

3.2 疫苗

对于奶牛乳房炎疫苗的研究，只有少数针对性的细菌疫苗，无法对所有病原菌产生影响。目前的疫苗种类主要有:

3.2.1 灭活苗

ysigin苗(针对金黄色葡萄球菌性)、J5疫苗(针对大肠杆菌性)、Mycomune疫苗(针对分支杆菌性)、Startvac多联苗(针对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌性)等。谢昆等[25]成功将奶牛隐性乳房炎大肠杆菌蜂胶灭活苗研制出来，并在经过建立动物模型、小鼠攻毒试验后证明该疫苗具有较好的安全性且具有良好的免疫效果。Bradley, A. J.等[26]成功将奶牛隐性乳房炎大肠杆菌蜂胶灭活苗研制出来，并在经过建立动物模型、小鼠攻毒试验后证明该疫苗具有较好的安全性且具有良好的免疫效果。

3.2.2 弱毒活苗

Tollerud T等[27]用减毒菌株金黄色葡萄球菌(w79)对奶牛乳房炎有抗感染作用。Pellegrino M等[28]利用金黄色葡萄球菌无毒突变体RC122免疫奶牛，用RC108攻毒，结果表明，此疫苗能够显著诱导产生抗体，并显著降低牛奶中体细胞数量。

3.2.3 亚单位疫苗

根据研究人员提取的成分又可分为：

3.2.3.1 夹膜多糖疫苗

pfiter公司于2010在纯化的金黄色葡萄球菌CP5和CP8加上ClfA疫苗，可有效防止病原菌黏附到细胞。杨岚等[29]将牛源金黄色葡萄球菌CP8与CLFA和FnB-PB偶联加入佐剂制成疫苗，能使奶牛体细胞数保持在正常范围。侯书宝[30]成功研制的奶牛乳房炎大肠杆菌lps基因亚单位疫苗，具有较好的免疫保护作用。

3.2.3.2 表面蛋白疫苗

这是由金黄色葡萄球菌主要表面黏附蛋白和无乳链球菌主要黏附蛋白作为目的抗原进行试验研究所得的疫苗。姚笛[31]成功构建了抗乳链球菌和金黄色葡萄球菌感染的表位疫苗，并通过实验验证了该疫苗的效果。Song, Baifen等[32]研究了引起奶牛乳房炎的链球菌的表面蛋白GapC蛋白，可知该蛋白为主要毒力因子。他们将GapC蛋白重组替换大肠杆菌的ompA基因进行重组后肌注小鼠，用ELISA检测小鼠血清中的抗GapC,通过酶联免疫斑点法检测白细胞介素-4和干扰素-γ，最后使用致病链球菌攻毒小鼠，可得GapC蛋白使免疫的小鼠表现出更好的细胞和体液免疫，表明在大肠杆菌表面展示作为针对链球菌物种的疫苗的GapC是可行的。

3.2.3.3 重组亚单位疫苗

重组技术是通过克隆和表达一种或几种微生物中的部分抗原来研发疫苗。李月颖等[33]用乳链球菌免疫分泌蛋白基因(IPS)构建重组质粒并转化到大肠杆菌进行表达，再经IPTG诱导后就可得到抗原性良好的目的蛋白。

3.2.3.4 其它单位疫苗

王登峰等[34]利用Blast分析来源不同的克隆菌菌株的Isdb所得的Isdb蛋白作为疫苗，可降低攻毒菌对攻毒鼠的损伤和感染力。

3.2.4 载体疫苗和核酸疫苗

刘永夏[35]研究的奶牛乳房炎大肠杆菌F17A-MF59疫苗，能有效增强机体对大肠杆菌的抗感染免疫反应。Su Y等[36]构建了含kozak和不含kozak序列的牛乳金黄色葡萄球菌的FnBPA-A基因的重组质粒，分别对小鼠免疫后进行攻毒实验，结果发现，未免疫小鼠全部死亡，证明Kozak 序列对加强 Fn BPA 的重组 DNA 疫苗诱导的免疫应答起了不容忽视的功能。Camussone, C. M.等[37]研究了一种用Iscom Matrix佐剂的金黄色葡萄球菌CP5裂解物疫苗，可诱导中性粒细胞进行吞噬作用，并与调控和促炎细胞因子的表达有关。还能有效阻止金黄色葡萄球菌对纤维蛋白原的结合，并将这些抗原作为候选体，置于体外，以防止葡萄球菌性乳房炎的形成。

3.3 抗菌肽

抗菌肽是一种具备生物活性的小分子多肽，是微生物入侵机体后的反应产物。抗菌肽具有很好的应用和开发潜力。应用于乳房炎奶牛致病菌的生物活性分子抗菌肽，对于乳房炎具有一定的防御作用，对隐性乳房炎具有积极的效果。

吕月琴等[38]研究发现，抗菌肽复合制剂可有效预防奶牛隐性乳房炎。叶滔等[39]通过实验研究发现，抗菌肽菌丝霉素成膜剂对奶牛隐性乳房炎有明显的预防效果。

4 小结

乳房炎是影响奶牛养殖业的主要疾病之一，由于病因较多，彻底治愈或消除的希望较小。国内外研究者研制出的多种防治奶牛乳房炎的中草药产品，效果和抗生素一样，甚至优于抗生素。但在临床治疗中，中草药要取代抗生素成为治疗乳房炎的主要手段还有很长的路要走。因为中草药的治疗和作用机制有待明确；而且中草药的来源、生产和使用的安全保障也不足。奶牛乳房炎应该以预防为主，搞好环境卫生，进行彻底消毒和清洗；保持通风状态，及时清除致病原微生物；加强对养殖场工作人员培训，在挤奶前进行彻底消毒和中草药药物清洁，最好能进行乳房按摩。国际上，牛奶中的体细胞数是判定奶牛隐性乳房炎的主要指标，应对奶牛体细胞数进行定期检测。在发生奶牛乳房炎的时候能够及时处理，防止传染。加强对奶牛乳房炎各种疫苗的研制，争取形成以疫苗等其他预防措施为主，药物治疗为辅的机制。应大力提倡中西医结合治疗乳房炎，因为中西医结合不仅能使乳房炎的治愈率大大提高，而且兽药残留量远远低于抗生素治疗。