茴香提取液对酒精中毒小鼠的解酒及脑组织抗氧化作用的研究

韩光顺+梁华益+焦雯

【摘要】 目的：探究茴香提取液對酒精中毒小鼠的解酒及脑组织抗氧化的作用。方法：采用56度白酒按0.15 mL/10 g体重给予一次性灌胃法建立小鼠醉酒模型，取50只小鼠，每组10只为清醉解酒药组、模型组、茴香低剂量组、茴香中剂量组和茴香高剂量组，以茴香高、中、低三种剂量分别进行预防性干预和治疗性干预，分别观察茴香对小鼠醉酒时间和醒酒时间的影响；另取50只小鼠，按体重随机分为正常组、模型组、茴香低剂量组、茴香中剂量组和茴香高剂量组，每组10只，除正常组外，各组采用56度白酒按0.13 mL/（10 g·d）体重灌胃，并给予相应的药物干预，30 d后，取脑组织匀浆，测脑组织谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）的活性。结果：与正常组相比，模型组脑指数、MDA水平明显升高，SOD活性、GSH含量均明显降低（P<0.01）；与模型组相比，茴香中、高剂量组MDA水平明显降低，茴香高剂量组脑指数、SOD活性、GSH水平均明显升高（P<0.05或0.01）；在预防醉酒实验中茴香高剂量组和清醉解酒药组醉酒时间明显延长，醒酒时间明显缩短，在治疗醉酒实验中茴香高剂量组和清醉解酒药组醒酒时间均明显缩短（P<0.05或0.01）。结论：茴香提取液具有一定的解酒促醒作用及降低酒精中毒小鼠脑组织氧化应激损伤。

【关键词】 茴香； 酒精中毒； 脑组织； 氧化应激； 小鼠

【Abstract】 Objective：To explore the effect of Fennel on sober-up and anti-oxidation of brain tissue in alcoholism mice.Method：The mice model of drunkenness were established with 56° alcohol were single gavaged according to 0.15 mL/10 g.50 mice were divided into the Qingzui drug group，the model group，the high-dose Fennel group，the medium-dose Fennel group，the low-dose Fennel group according to the weight of 50 mice，preventive intervention and therapeutic intervention were taken in high，medium and low three doses，respectively observed the effect of Fennel on drunkenness and sober-up time.Another 50 mice were divided into the normal control group，the model group，the high-dose Fennel group，the medium-dose Fennel group，the low-dose Fennel group according to the weight of 50 mice，10 mice in each group，each group mice were given 56° alcohol[0.13 mL/（10 g·d）] except for the normal control group，and corresponding drugs were given，brain tissue were collected，homogenate，and determined the contents of malondialdehyde（MDA） and glutathione（GSH），superoxide dismutase（SOD） activity after 30 d.Result：Compared with the normal control group，brain index，MDA level increased apparently in the model group，SOD activity and GSH content decreased apparently（P<0.01）.Compared with the model group，MDA level decreased apparently in the medium-dose Fennel group and the high-dose Fennel group，brain index，SOD activity，GSH level apparently increased in the high-dose Fennel group（P<0.05 or 0.01）.The drunkenness time of the high-dose Fennel group and the sober-up drug group apparently prolonged，sleeping time of the high-dose Fennel group and the sober-up drug group apparently shortened in drunkenness prevention experiment，sleeping time of the high-dose Fennel group and the sober-up drug group apparently shortened in drunkenness treatment experiment（P<0.05 or 0.01）.Conclusion：Fennel certainly has the effect of sober-up and wake-promoting and can relieve oxidative stress injury in alcoholism mice brain tissue.endprint

【Key words】 Fennel； Alcoholism； Brain tissue； Oxidative stress； Mice

First-authors address：Youjiang Medical College for Nationalities，Baise 533000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.02.010

由酒精中毒和酒精依赖形成所引发的社会公共卫生问题和人体健康问题已经成为仅次于心脑血管疾病和肿瘤的第三大危险因素，对人体重要脏器都有所损害，但由于脑组织有很强的氧化代谢速率，酒精在脑组织引起的氧化应激损伤比较明显，因此长期大量的饮酒可能会改变脑组织结构及形态，严重者可能引起神经细胞变性[1-3]。茴香是我国传统中药，主要成分含有黄酮、糖苷、甾醇及生物碱等多种类型的化合物[4-5]，具有胃理气的功效，其果实、根、茎和叶均可供药用，茴香具有抗氧化、抗肝纤维化及对肝损伤有保护作用[6-9]。本课题组前期研究发现，茴香可能通过提高肝组织对自由基的防御能力和提高乙醇脱氢酶活性加快乙醇代谢而减轻酒精对肝脏的损伤（另文发表），本研究旨在探讨茴香提取液对酒精中毒小鼠的解酒及脑组织抗氧化的作用，现报道如下。

1 材料與方法

1.1 动物 SPF级雄性小白鼠100只（生产许可证号SCXK桂2012-0003，生产批号0007545），体重（22±2）g，右江民族医学院实验动物中心提供，饲养环境温度26～27 ℃，相对湿度40%～70%，自由饮食。

1.2 试剂与药品 56度北京红星二锅头（北京红星股份有限公司，20161010），谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所（批号分别为20161107，20161112，20161109），清醉解酒药（江西博诚药业有限公司生产，20161006），茴香为茎叶部分（广西百色市出售，晒干备用）。

1.3 主要仪器 722型可见光分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 茴香提取液的提取 茴香茎叶粉碎，取茴香100 g，加蒸馏水400 mL，浸泡40 min，分次放入微波炉微波处理，用1 000 mL水分两次浸提，30 min/次，最后浓缩至含生药1.0 g/mL。冰箱冷藏，按相应浓度用原液1.0 g/mL及分别稀释为0.5 g/mL和0.25 g/mL。

1.4.2 茴香对急性酒精中毒小鼠醉酒、醒酒时间的影响

1.4.2.1 茴香预防干预对急性酒精中毒小鼠醉酒时间、醒酒时间的影响 取健康雄性小鼠50只，随机分为5组，每组10只。模型组（蒸馏水）、清醉解酒组（200 mg/kg清醉解酒药）、茴香低剂量组（2.5 g/kg）、茴香中剂量组（5 g/kg）、茴香高剂量组（10 g/kg）。模型组给予蒸馏水，其他各组给予相应的药物灌胃干预，30 min后，按0.15 mL/10 g体重给予56度北京红星二锅头白酒灌胃，观察醉酒时间和醒酒时间（醉酒时间：从灌胃白酒到翻正反射消失时间，以1 min内翻正反射小于3次为醉酒；醒酒时间：翻正反射消失到翻正反射恢复）

1.4.2.2 茴香治疗干预对急性酒精中毒小鼠醉酒时间、醒酒时间的影响 实验分组、药物干预及观察指标同预防醉酒1.4.2.1，不同的是，给予白酒灌胃30 min后，再给予相应的药物干预治疗。

1.4.3 茴香对酒精中毒小鼠脑组织抗氧化作用的影响

1.4.3.1 分组与造模 取雄性小鼠50只，按体重随机分组（每组10只）：正常组、模型组、茴香低剂量组（2.5 g/kg茴香）、茴香中剂量组（5 g/kg茴香）和茴香高剂量组（10 g/kg茴香）。灌白酒前，正常组和模型组给予蒸馏水、其余各组给予相应茴香剂量干预，1 h后，除正常组给予蒸馏水外，其余各组每天按0.13 mL/10 g给予56度白酒，分两次灌胃，两次给酒时间间隔4 h以上，药物干预1次/d，共30 d。每周称体重1次，以调整灌胃剂量。

1.4.3.2 指标检测 末次给药12 h内禁食，测小鼠体重、取脑组织称重，计算脑指数，脑指数=（脑重量/小鼠体重）×100%。取脑组织制备成10%组织匀浆，取上清液，按试剂盒说明书用分光光度计测定并计算脑组织MDA、GSH的含量和SOD活性。

1.5 统计学处理 采用SPSS 20.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用用单因素方差分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 茴香对酒精中毒小鼠脑指数的影响 与正常组相比，模型组脑指数明显升高，差异有统计学意义（P<0.05，0.01）；与模型组相比，茴香高剂量组脑指数明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结果见表1。

2.2 茴香对急性酒精中毒小鼠醉酒时间、醒酒时间的影响 与模型组相比，在预防醉酒实验中茴香高剂量组和清醉解酒药组醉酒时间均明显延长，醒酒时间明显缩短，差异均有统计学意义（P<0.05或0.01）；在治疗醉酒实验中，茴香高剂量组和清醉解酒药组醒酒时间均明显缩短，差异均有统计学意义（P<0.05或0.01）。见表2。

2.3 茴香对酒精中毒小鼠脑组织SOD、MDA、GSH的影响 与正常组相比，模型组GSH含量、SOD活性均显著降低，MDA含量明显增加，差异均有统计学意义（P<0.01）；与模型组相比，茴香高剂量组SOD活性、GSH含量均明显升高，差异均有统计学意义（P<0.05），茴香中、高剂量组MDA水平均明显降低，差异均有统计学意义（P<0.05或0.01）。见表3。endprint

3 讨论

有研究表明当机体大量饮酒后，血中酒精浓度就会增加，而且酒精的脂溶性相对较大，易穿透血脑屏障，会随血液进入脑组织，脑组织酒精浓度的增高会刺激脑部边缘系统、小脑、延髓等组织，从而使机体产生昏睡、记忆力下降等一系列神经中枢受抑制的行为表现[10-12]。本研究结果发现，茴香治疗组小鼠脑指数明显低于模型组，茴香预防性干预，可以明显延长小鼠醉酒潜伏期，减少小鼠的醒酒时间；茴香干预性治疗，也能明显缩短小鼠的醒酒时间，减轻酒精对中枢神经系统的抑制作用。说明茴香具有一定的解酒、醒酒作用，并能减轻酒精中毒小鼠脑水肿。

有研究表明，酒精导致脑损伤主要与乙醇及其代谢产物导致脑血流量减少进而发生脑缺血、缺氧介导的脑组织发生氧化应激和脂质过氧化反应引起的自由基损害等有关[13-15]。脑组织中酒精浓度增高后，酒精在脑组织代谢产生的大量的氧自由基、活性氧等过氧化产物，同时还能促进机体发生脂质过氧化反应，进一步对脑组织造成损害 [16-17]，机体脑组织过氧化产物主要有SOD、GSH、MDA等，GSH可以清除体内过多的氧自由基等过氧化产物，是体内一种抗氧化剂，而且可以和酒精的代谢产物乙醛相结合，当酒精在脑组织代谢增加时，GSH含量就会相应减少，进一步加重脑组织的损伤。SOD是体内一种超氧化物歧化酶，SOD活力的高低可以反映机体抗氧化水平的高低。MDA是体内脂质过氧化代谢产物，MDA含量的多少可以间接的反应体内脂质过氧化的程度[18-20]。本实验结果显示，模型组MDA水平升高，SOD、GSH水平降低，而经过茴香治疗后，脑组织SOD、GSH水平升高，MDA水平降低，说明茴香可以减轻酒精对脑组织的氧化应激损伤，从而对脑组织进行保护作用。

有研究表明，中草药成分中的总黄酮类和异黄酮类化合物具有解酒和预防醉酒的功能，而茴香提取液中的主要成分就是总黄酮类和异黄酮类化合物[4]，由此推测，茴香中的总黄酮是茴香具有解酒和预防醉酒的主要物质。另外由于脑组织中酒精含量减少，氧自由基及脂质过氧化产物生成减少[21]，从而降低酒精对脑组织的氧化应激损伤。

综上所述，茴香提取液可以通过增加脑组织超氧化物歧化酶活性，降低脂质代谢反应增加脑组织的抗氧化能力；茴香可能通过黄酮类物质的直接解酒作用以及通过提高乙醇脱氢酶活性达到对酒精中毒小鼠解酒和预防醉酒的作用。

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（收稿日期：2017-10-10） （本文编辑：程旭然）endprint